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miR-363-3p在胃癌组织中的表达及其对细胞系HGC-27增殖、迁移与侵袭功能的影响
目的 探讨miR-363-3p在胃癌及癌旁样本中的表达差异,并分析其在胃癌细胞系中的功能.方法 使用realtime PCR检测59例胃癌组织及对应癌旁组织中miR-363-3p的表达差异;使用miR-363-3p模拟物(miR-363-3p-mimic)实现miRNA在胃癌细胞系HGC-27中的过表达,经增殖实验、划痕实验和Transwell实验,检测miR-363-3p对HGC-27细胞功能的影响.结果 miR-363-3p抑制胃癌细胞系HGC-27细胞增殖(P＜0.05,P＜0.01),抑制胃癌细胞系HGC-27细胞迁移(P＜0.001),miR-363-3p对抑制胃癌细胞系细胞的侵袭(P＜0.05).结论 miR-363-3p在胃癌发生中可能起到抑癌作用,并有可能成为对胃癌治疗的一个新靶点.
关键词： 胃癌 HGC-27 miR-363-3p -
百里醌联合5-氟尿嘧啶对胃癌HGC-27细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察百里醌(TQ) 联合5-氟尿嘧啶(5-Fu) 诱导对胃癌HGC-27细胞发生增殖和凋亡的影响.方法 于2015年9月—2017年8月在武汉大学中心实验室进行实验,以TQ 50 μmol/L(TQ组)、5-Fu 75 μg/ml(5-Fu组)及 TQ 50 μmol/L + 5-Fu 75 μg/ml(联合组)刺激胃癌HGC-27细胞24 h后,CCK-8检测其对增殖的影响,Hoechst染色、流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法分析凋亡相关蛋白 Bax和Bcl-2的表达.结果 CCK-8结果显示,百里醌可抑制胃癌HGC-27细胞的增殖,联合组对细胞的抑制率高于5-Fu组及TQ组( F =767.05,P<0.01).Hoechst结果显示,联合组的凋亡率明显高于5-Fu组.流式细胞仪检测显示,对照组的凋亡率为(2.26 ± 0.17)%,TQ组、5-Fu组及联合组的凋亡率分别为(3.76 ± 0.44)%、(6.24 ± 0.19)%及(9.76 ± 0.25)%,联合组的凋亡率高于TQ组和5-Fu组( F =449.58,P<0.01).蛋白质印迹法结果显示,联合组的促凋亡蛋白Bax表达量均较(TQ组或5-Fu组)升高( F =58.803,P<0.01),且抑凋亡蛋白Bcl-2较TQ组或5-Fu组降低( F =67.203, P<0.01).结论 百里醌联合5-氟尿嘧啶可抑制胃癌HGC-27细胞增殖并促进其凋亡,百里醌可增加胃癌HGC-27细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性.
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榄香烯脂质体对人胃癌细胞HGC-27的体内外作用的初步研究
背景与目的：近年来，许多研究表明榄香烯脂质体在临床治疗消化道肿瘤及其恶性胸腹水中应用广泛。本研究结合体内和体外实验旨在观察榄香烯脂质体对人胃癌细胞HGC-27生长的抑制作用。方法：在体外实验中，应用机器视觉-全自动活细胞观测分析系统(Cell-IQ)对不同浓度下的榄香烯脂质体进行观测，以筛选出对人胃癌HGC-27细胞产生抑制作用的佳浓度，并通过流式细胞术分析在佳浓度下，榄香烯脂质体对人胃癌细胞HGC-27凋亡的影响。在胃癌腹膜转移的裸鼠模型中，观察榄香烯脂质体、顺铂(cisplatin，DDP)等药物对裸鼠腹膜肿瘤指数(peritoneal cancer index，PCI)的影响，并用免疫组化检测CD31标记的肿瘤微血管密度(microvessel density，MVD)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在肿瘤中的表达，以期对榄香烯脂质体抑制胃癌HGC-27细胞腹膜转移的机制进行探讨。结果：榄香烯脂质体作用于人胃癌细胞HGC-27后，Cell-IQ分析抑制作用随浓度增加，逐渐增强，以100μg/mL为佳，榄香烯脂质体浓度再增高，其抑制肿瘤作用不再增强。佳作用时间为4~19 h。应用流式细胞术检测，100μg/mL榄香烯脂质体作用于人胃癌HGC-27细胞24 h后，肿瘤细胞凋亡率为45%，对照组仅有0.019%。处理组的细胞凋亡率明显高于对照组。人胃癌腹膜转移裸鼠模型建立后给予榄香烯脂质体等药物干预，腹膜转移瘤PCI指数有明显差异，其中以联合治疗组下降明显，免疫组化检测发现CD31-MVD及VEGF蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论：榄香烯脂质体对于人胃癌细胞有明确抑制作用，佳质量浓度为100μg/mL，佳作用时间为4~19 h；榄香烯脂质体对人胃癌裸鼠腹腔转移有明确预防作用；榄香烯脂质体对人胃癌细胞抑制作用的主要机制可能为诱导凋亡。
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赖氨酰氧化酶对胃癌细胞迁徙能力的影响
目的 研究赖氨酰氧化酶(LOX)对胃癌细胞迁徙能力的影响.方法 培养两株胃癌细胞,用Real-Time PCR法检测其LOX的表达量;通过体外Transwell小室迁徙实验比较两株胃癌细胞在不同浓度β-氨基丙腈(BAPN)作用下迁徙能力的变化.结果 两株胃癌细胞中均有LOX的表达,当BAPN浓度是0.2和0.3 mmol/L时,胃癌细胞的体外迁徙能力受到抑制.结论 LOX可能通过增强肿瘤细胞的迁徙能力而促进肿瘤的转移.
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雷公藤红素对HGC-27细胞增殖、迁移及凋亡的影响
目的:研究雷公藤红素对人胃癌细胞HGC-27增殖、迁移及凋亡的影响.方法:用0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0 μmol/L的雷公藤红素培养HGC-27细胞24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖比率.用0.0、0.5、1.0、1.5 μmol/L的雷公藤红素培养HGC-27细胞48 h后,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Hochest染色检测细胞核凋亡小体的形成,Western blot法检测细胞中凋亡及侵袭相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、ERK、p-ERK、P38及p-P38的表达水平.结果:雷公藤红素作用后,HGC-27细胞增殖比率降低,细胞迁移率减小,早期细胞凋亡率增加(P<0.05)并能够诱导核凋亡小体的形成;细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、p-P38表达均升高,而Bcl-2和p-ERK表达降低(P<0.05).结论:雷公藤红素对人胃癌细胞的增殖和迁移有一定的抑制作用,并能诱导其凋亡.
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甲磺酸伊马替尼对胃癌细胞HGC-27增殖、凋亡及迁移的影响
目的:探讨甲磺酸伊马替尼对胃癌细胞株HGC-27增殖、凋亡及迁移的影响.方法:CCK-8法检测甲磺酸伊马替尼对HGC-27细胞增殖的影响;流式细胞术检测药物对HGC-27凋亡的影响;Western blot检测凋亡蛋白bax、caspase-3的表达;细胞划痕实验观察药物对HGC-27的迁移作用.结果:CCK-8法结果显示,甲磺酸伊马替尼抑制HGC-27细胞增殖,并随着药物浓度增大,抑制作用愈加明显(P<0. 01);流式结果显示,甲磺酸伊马替尼能促进HGC-27的凋亡,药物浓度越大,促凋亡作用愈大(P<0. 01);Western blot 结果显示,甲磺酸伊马替尼能够增加凋亡蛋白bax、caspase-3的表达(P<0. 05);细胞划痕实验显示,甲磺酸伊马替尼处理48 h后,明显抑制HGC-27的迁移(P<0. 01).结论:甲磺酸伊马替尼能够有效抑制HGC-27的增殖、诱导其凋亡并阻碍其迁移.
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半胱氨酸蛋白酶抑制剂A失调对胃癌细胞的增殖凋亡和迁移的影响
目的 研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂A在胃癌中可能存在的作用及机制.方法 建立体外HGC-27胃癌细胞模型.构建过表达质粒PCDNA3.1-CSTA和合成RNA干扰抑制剂siRNA-CSTA,并转染至细胞株中,综合使用MTT,Transwell和流式细胞技术评估细胞增殖,迁移和凋亡.同时,使用PCR(qRT-PCR)和Western-Blot检测半胱氨酸蛋白酶抑制剂A和PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达.结果 半胱氨酸蛋白酶抑制剂A在HGC-27细胞株中的表达与其在胃正常上皮细胞中的表达相比显著下调,半胱氨酸蛋白酶抑制剂A在pc-CSTA转染细胞后过表达,同时在si-CSTA转染细胞中抑制.与对照组相比,细胞活力及细胞迁移在pc-CSTA组显着减弱,用si-CSTA组明显增强,细胞凋亡在pc-CSTA组显著诱导,在si-CSTA组明显抑制.与对照组相比,p-PI3K,p-Akt和p-mTOR蛋白的表达,在pc-CSTA组明显低表达,而在si-CSTA组中明显高表达.结论 半胱氨酸蛋白酶抑制剂A可作为治疗胃癌的潜在靶点.半胱氨酸蛋白酶抑制剂A下调能影响HGC-27细胞增殖和迁移,同时激活PI3K/Akt/mTOR信号通路促进胃癌的进展.
