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瘤果黑种草子挥发油的化学成分分析及百里醌的定量
目的:分析瘤果黑种草子Nigella glandulifera Freyn(NG)挥发油化学成分,与国外果黑种草子N、sativa(NS)、黑种草子N damascena(ND)比较,对水蒸气蒸馏法(hydrodiStillation,HD)提取NG挥发油中百里醌定量.方法:采用HD与SFE-CO2萃取从NG提取挥发油,用GC-MS对化学成分分析,采用峰面积归一化法测定各成分相对百分含量,与NS,ND挥发油比较;用气相色谱外标一点法对挥发油中百里醌定量.结果:3个种属挥发性成分比较,NG,NS主要成分为间一伞花烃,分别是33.75%,61.48%,ND为β-榄香烯73.24%,NG,NS,ND百里醌相对百分含量分别为3.73%(HD),3.80%(HD),0.08%(HD),SFE-CO_2主要成分为亚油酸(66.36%),间-伞花烃较低(0.93%);NG挥发油百里醌定量1.58%.结论:NG挥发性成分与NS,ND有较大差异.
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百里醌抑制体内外胰腺癌转移作用
为探讨百里醌抑制体内外胰腺癌转移的作用及其机制,本研究应用不同浓度百里醌作用人胰腺癌Panc-1细胞后,观察百里醌对体外Panc-1细胞迁移和侵袭的作用;Western blotting检测胰腺癌细胞中NF-κB和MMP-9表达的变化.体内建立起裸鼠胰腺癌原位移植瘤模型,分成对照组和百里醌组,实验结束后观察百里醌对裸鼠胰腺癌转移的抑制作用,同时免疫组织化学法检测裸鼠胰腺肿瘤组织中CD34、NF-κB和MMP-9的阳性表达.结果表明,百里醌可浓度依赖性抑制体外人胰腺癌Panc-1细胞迁移和侵袭,同时可下调人胰腺癌Panc-1细胞中NF-κB和MMP-9的表达;另外,与对照组相比较,百里醌可明显抑制荷瘤裸鼠中胰腺癌转移,并下调CD34、NF-κB和MMP-9在胰腺肿瘤组织中的阳性表达.总之,结果提示百里醌可抑制体内外胰腺癌转移,该作用可能通过下调NF-κB和MMP-9的表达而实现.
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Mucin-4在百里醌抑制肝癌生长中的作用
目的 探讨百里醌对体内外肝癌生长的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 不同浓度百里醌作用人肝癌细胞株SMMC-7721后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其对细胞生长的抑制作用;Hoechst染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;RT-PCR检测Mucin-4 mRNA在SMMC-7721细胞中的表达;Western blot-ting检测肝癌细胞中Mucin-4蛋白表达;建立裸鼠肝癌皮下移植模型,完全随机法分为对照组和低(10 μmol/L)、中(20 μmol/L)、高剂量(40 μmol/L)百里醌组,观察不同剂量百里醌对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Mucin-4的阳性表达.结果 不同浓度(10、20、40 μmol/L)百里醌作用人肝癌SMMC-7721 24 h后,细胞存活率分别为(80.14±9.84)％、(71.68±6.51)％和(64.58±5.24)％;百里醌作用后,SMMC-7721细胞出现典型凋亡形态学改变;百里醌干预后SMMC-7721细胞中Mucin-4蛋白和mRNA的表达均明显下调,呈浓度依赖性;实验结束后,对照组和低、中、高剂量百里醌组肿瘤体积分别为(1056.3±236.3)、(672.3±178.8)、(529.4±165.7)、(473.1±141.5) mm2,各百里醌组肿瘤体积明显低于对照组(P＜0.05),低、中、高剂量百里醌组抑瘤率分别为36.5％ 、49.9％和30.3％;百里醌可明显降低肿瘤组织中Mucin-4的阳性表达.结论 百里醌可显著抑制体内外肝癌生长,该作用可能通过抑制Mucin-4的表达而实现.
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百里醌对内皮祖细胞的抑制作用
目的 探讨百里醌对人脐血来源的内皮祖细胞血管生成的抑制作用及其可能机制.方法 采用贴壁选择法培养人脐血内皮祖细胞(EPCs),DiI - ac - LDL吞噬试验及VEGFR-2、Ⅷ因子和CD34细胞免疫组化证实细胞属性；百里醌作用EPCs后,CCK-8法检测细胞增殖；Transwell小室实验测定EPCs体外侵袭能力；小管形成实验检测EPCs体外小管形成能力；Western blotting检测EPCs中MMP -2和MMP -9蛋白表达.结果 体外成功培养出人脐血内皮祖细胞,百里醌可显著抑制体外EPCs增殖,IC50=51.2nmol/L;百里醌可抑制体外EPCs侵袭和小管形成,呈浓度依赖性；百里醌可显著下调EPCs中MMP -2和MMP -9的表达.结论 百里醌可能通过抑制EPCs中MMP -2和MMP -9的表达从而抑制EPCs参与的血管生长,从而有望作为有效的血管生成抑制药物.
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百里醌联合吉西他滨对胰腺癌BxPC-3细胞体外生长的影响
目的 探讨百里醌联合吉西他滨对胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 采用CCK-8法检测细胞相对活性,Hoechst染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、XI-AP)、半胱天冬酶(cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9)、PTEN、Akt及phospho-Akt蛋白的表达.结果 百里醌呈浓度依赖性地抑制胰腺癌BxPC-3细胞增殖,诱导细胞凋亡.吉西他滨组(GEM)、百里醌组(TQ)、百里醌联合吉西他滨组(TQ+GEM)、百里醌与吉西他滨序贯给药组(TQ-GEM)相对细胞活性分别为83.7％±4.1％、51.8％±6.0％、48.25％±6.50％、33.3％±3.9％;早期凋亡率分别为12.2％±3.8％、30.4％±4.3％、43.5％±5.7％、58.3％±6.1％;各组相对细胞活性均明显低于对照组(P＜0.05),而细胞凋亡率显著增高(P＜0.05);与GEM组比较,TQ-GEM组与TQ+ GEM组相对细胞活性明显下调(P ＜0.001),凋亡率明显上调(P ＜0.001);TQ-GEM组较TQ+ GEM组出现更明显的增殖受抑(P ＜0.001),更高的细胞凋亡率(P＜0.001).百里醌-吉西他滨序贯给药作用于胰腺癌BxPC-3细胞后,BxPC-3细胞中Bax蛋白表达明显下调,而Bcl-2、XIAP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达明显上调.百里醌可显著上调BxPC-3细胞PTEN的表达,明显抑制Akt磷酸化.结论 百里醌可明显增强吉西他滨对体外胰腺癌细胞生长抑制作用,可能是通过上调PTEN,Akt去磷酸化,促使Bcl-2、XIAP表达上调及Bax表达下调,活化caspase-3、caspase-9诱导细胞凋亡而实现.
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百里醌抑制膀胱癌细胞生长的实验研究
目的 探讨百里醌对体外膀胱癌细胞株BIU -87生长的影响及其机制.方法 百里醌单独作用人膀胱癌细胞株BIU - 87及预处理NF - κB激活剂TPA后百里醌再作用BIU - 87细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blotting检测膀胱癌细胞质中IκBα蛋白表达.结果 与对照组相比较,百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞株BIU -87生长,并明显诱导细胞凋亡；预处理TPA可显著削弱百里醌对BIU -87细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用；百里醌干预后膀胱癌细胞质中IκBα的表达明显上调.结论 百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞生长,并诱导细胞凋亡,该作用可能通过促进其胞质中IκBα的表达而实现.
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百里醌对大肠癌生长和转移的抑制作用
目的 探讨百里醌对大肠癌生长及转移的影响及其机制.方法 百里醌作用大肠癌细胞株SW480后,cell counting kit -8(CCK -8)法检测细胞增殖；荧光显微镜下观察细胞形态；划痕试验和Transwell小室实验分别测定大肠癌细胞体外迁移和侵袭能力；用Western blotting检测大肠癌细胞中Mucin -4、HER -2和FAK蛋白表达；建立起裸鼠大肠癌皮下移植模型,观察百里醌对裸鼠大肠癌移植瘤生长的影响；免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67和Mucin -4阳性表达.结果 与对照组相比较,百里醌可显著抑制体外大肠癌SW480细胞生长、迁移和侵袭,并明显诱导细胞凋亡；百里醌可呈显著下调大肠癌细胞中Mucin -4和HER -2的表达,并抑制FAK磷酸化；百里醌可显著抑制裸鼠大肠癌皮下移植瘤生长；百里醌可明显降低大肠癌肿瘤组织中Ki- 67和Mucin -4的阳性表达.结论 百里醌可显著抑制大肠癌生长和转移,该作用可能通过抑制Mucin -4蛋白表达而实现.
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百里醌诱导膀胱癌细胞凋亡作用机制的研究
目的 探讨百里醌对人膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的影响及对其诱导凋亡的潜在作用机制.方法 应用CCK8法检测细胞增殖活性,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测基因Bcl-2、Bax、caspase-3、c-myc mRNA的表达水平,Wsetern blot法检测不同浓度百里醌作用后Bcl-2、Bax、c-myc蛋白表达水平的变化.结果 细胞增殖抑制曲线结果显示百里醌能明显抑制BIU-87细胞增殖,其24、48、72h半数抑制浓度(IC50)分别是38.75 ±0.58、34.33±1.01和32.43±0.71 μmol/L.百里醌能以剂量依赖性方式诱导膀胱癌细胞凋亡.百里醌作用于BIU-87细胞后,Bcl-2、c-myc mRNA及Bcl-2、c-myc蛋白的表达量呈浓度依赖性降低,而caspase-3、Bax mRNA及caspase-3、Bax蛋白表达水平呈浓度依赖性递增.结论 百里醌能抑制BIU-87细胞的增殖,且能诱导BIU-87细胞的凋亡,其诱导凋亡机制可能与Bcl-2、c-myc表达水平降低及caspase-3、Bax表达水平上调有关.
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百里醌对体内外乳腺癌细胞生长和凋亡的作用
目的 研究百里醌在体内外对人乳腺癌细胞株MCF-7生长和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖；Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡；Western blot检测survivin以及半胱天冬酶(pro-caspase 3、pro-caspase 8、pro-caspase 9)蛋白的表达,并利用活力检测试剂盒检测caspase 3、caspase 8、caspase 9的活力；建立裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型,原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤组织细胞的凋亡情况；采用免疫组化方法检测肿瘤组织中ki-67、survivin和caspase 3的表达.结果 百里醌对体外MCF-7细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用；百里醌可下调MCF-7细胞中survivin、pro-caspase 3和pro-caspase 8的表达,但对pro-caspase 9的表达无明显影响；活力测定结果进一步显示,百里醌作用MCF-7细胞后,caspase 3和caspase 8被激活,而对caspase 9无明显影响；在体内试验中,百里醌可抑制裸鼠皮下移植瘤生长,同时诱导体内乳腺癌细胞凋亡,另外百里醌还可分别下调和上调肿瘤组织细胞中survivin和caspase 3的表达.结论 百里醌对体内外乳腺癌细胞有凋亡诱导作用,死亡配体途径可能是百里醌诱导乳腺癌细胞凋亡的主要机制之一.
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百里醌对人膀胱癌细胞体内外作用及其机制的研究
目的 探讨百里醌对体内外膀胱癌生长的影响及其机制.方法 百里醌作用人膀胱癌细胞株BIU-87后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；细胞免疫荧光检测核因子(NF)-κB转位变化；Western印迹检测膀胱癌细胞中NF-κB、生存素(survivin)和X连锁凋亡抑制蛋白( XIAP)蛋白表达；建立裸鼠膀胱癌皮下移植瘤模型,观察百里醌对裸鼠膀胱癌皮下移植瘤生长的影响；免疫组织化学法检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原Ki-67、NF-κB和XIAP的阳性表达.结果 与对照组相比较,20、40、80 μmol/L百里醌均可显著抑制体外膀胱癌BIU-87细胞生长(81.2％±4.6％,72.5％ ±6.5％,58.4％±8.9％比100％,均P＜0.05),并明显诱导细胞凋亡(7.6％ ±1.6％,11.2％±2.1％,14.3％±2.8％比1.6％±0.5％,均P＜0.05)；细胞免疫荧光结果显示,百里醌干预后膀胱癌细胞核中NF-κB的表达明显被抑制；百里醌可显著下调BIU-87细胞中NF-κB和XIAP的表达,但对survivin的表达无明显影响.百里醌可显著抑制裸鼠膀胱癌皮下移植瘤生长[(0.41 ±0.12)比(0.89 ±0.23)g,P＜0.05],同时明显降低皮下移植瘤组织中Ki-67、NF-κB和XIAP的阳性表达.结论 百里醌可显著抑制体内外膀胱癌生长,该作用可能通过抑制NF-κB及其调控蛋白XIAP的表达而实现.
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百里醌抑制胰腺癌裸鼠原位移植瘤生长的实验观察
目的 观察百里醌对胰腺癌裸鼠原位移植瘤生长和转移的影响及其作用机制.方法 建立外科胰腺癌原位移植模型,随机分为4组:对照( Control)组、低剂量百里醌(L-TQ)组、高剂量百里醌(H-TQ)组和吉西他滨(GEM)组,第3周开始分别给予溶媒(1％乙醇)0.2 ml/只、百里醌5 mg/kg、百里醌20 mg/kg和吉西他滨100 mg/kg治疗.术后第8周处死裸鼠,测量胰腺肿瘤瘤重并计算抑瘤率；观察裸鼠肿瘤转移情况；免疫组织化学法检测肿瘤组织中细胞增殖因子(Ki-67)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达.结果 L-TQ组、H-TQ组和GEM组的抑瘤率分别为42.57％、64.11％和54.77％；与对照组相比,GEM组肿瘤转移未被明显抑制,而L-TQ组和H-TQ组肿瘤转移明显被抑制；与对照组相比较,L-TQ组和H-TQ组中Ki-67、XIAP和MMP-9的表达强度明显减弱,而GEM组中仅Ki-67表达下调.结论 百里醌具有抑制胰腺癌裸鼠原位移植瘤生长和转移的作用,此作用机制可能与抑制XIAP和MMP-9的表达有关.
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百里醌联合5-氟尿嘧啶对胃癌HGC-27细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察百里醌(TQ) 联合5-氟尿嘧啶(5-Fu) 诱导对胃癌HGC-27细胞发生增殖和凋亡的影响.方法 于2015年9月—2017年8月在武汉大学中心实验室进行实验,以TQ 50 μmol/L(TQ组)、5-Fu 75 μg/ml(5-Fu组)及 TQ 50 μmol/L + 5-Fu 75 μg/ml(联合组)刺激胃癌HGC-27细胞24 h后,CCK-8检测其对增殖的影响,Hoechst染色、流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法分析凋亡相关蛋白 Bax和Bcl-2的表达.结果 CCK-8结果显示,百里醌可抑制胃癌HGC-27细胞的增殖,联合组对细胞的抑制率高于5-Fu组及TQ组( F =767.05,P<0.01).Hoechst结果显示,联合组的凋亡率明显高于5-Fu组.流式细胞仪检测显示,对照组的凋亡率为(2.26 ± 0.17)%,TQ组、5-Fu组及联合组的凋亡率分别为(3.76 ± 0.44)%、(6.24 ± 0.19)%及(9.76 ± 0.25)%,联合组的凋亡率高于TQ组和5-Fu组( F =449.58,P<0.01).蛋白质印迹法结果显示,联合组的促凋亡蛋白Bax表达量均较(TQ组或5-Fu组)升高( F =58.803,P<0.01),且抑凋亡蛋白Bcl-2较TQ组或5-Fu组降低( F =67.203, P<0.01).结论 百里醌联合5-氟尿嘧啶可抑制胃癌HGC-27细胞增殖并促进其凋亡,百里醌可增加胃癌HGC-27细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性.
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百里醌通过抑制氧化应激信号通路减轻肝缺血再灌注损伤
目的 探讨百里醌对肝缺血再灌注损伤的影响及其机制. 方法 建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型. 30只C57小鼠随机分为3组,每组10只,分别为假手术组、缺血/再灌注损伤组( IRI组)和百里醌预处理组(百里醌组). IRI组、百里醌组小鼠肝缺血90 min再灌注4 h时采血和收集肝脏标本,分别生化检测血清中丙氨酸氨基转移酶( ALT )、天冬氨酸氨基转移酶( AST )的含量,以及肝组织中活性氧自由基( ROS )、丙二醛(MDA)含量,过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,观察肝组织的病理形态. 结果 与假手术组比较,IRI组ALT、AST、ROS、MDA含量提高,而CAT、GPx、SOD活性降低,病理改变加重. 与IRI组比较,百里醌组ALT、AST、ROS、MDA含量降低,而CAT、GPx、SOD活性提高,病理改变减轻. 结论 百里醌能通过抑制氧化应激减轻肝缺血再灌注损伤.
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百里醌调控M2型巨噬细胞表型极化的机制研究
目的 考察黑种草子中的活性成分百里醌(thymoquinone)对M2型巨噬细胞极化的调控机制.方法 利用白介素4 (IL-4)诱导鼠源巨噬细胞为M2型巨噬细胞模型;MTT法观察百里醌对细胞活力的影响;Trans-well小室迁移实验考察巨噬细胞造模前后自身迁移力的变化、对乳腺癌4T1细胞的迁移能力变化及百里醌干预的影响;qRT-PCR法考察百里醌对M2型巨噬细胞内精氨酸酶1(Arg1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的影响;Western blot法考察百里醌对细胞内ARG1、iNOS蛋白及信号传导与转录激活因子6(STAT6)信号通路的影响.结果 百里醌不仅抑制巨噬细胞向M2表型极化后自身迁移力的提高,也抑制M2型巨噬细胞促进乳腺癌4T1细胞的体外迁移加剧.百里醌呈剂量依赖性抑制Arg1同时提高iNOS的表达,降低STAT6蛋白的磷酸化水平.结论 百里醌逆转巨噬细胞M2表型极化,部分通过抑制IL-4/STAT6信号通路的活化,调控Arg1/iNOS的表达消长而干预M2表型极化进程中巨噬细胞自身及其促乳腺癌细胞的体外迁移加速.
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百里醌抑制人胰腺癌BxPC-3细胞体外运动和侵袭的研究
背景：胰腺癌是恶性程度高的消化道肿瘤，目前吉西他滨依赖的化疗对抑制胰腺癌转移的治疗效果欠佳。研究发现百里醌对多种肿瘤细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用。目的：探讨百里醌对人胰腺癌BxPC-3细胞体外运动和侵袭的影响及其作用机制。方法：常规培养人胰腺癌细胞株BxPC-3，加入不同浓度百里醌进行处理。采用Boyden小室法检测细胞体外运动、侵袭情况；蛋白质印迹法检测细胞FAK、Akt蛋白表达和Akt磷酸化水平的改变；免疫荧光技术检测细胞内FAK表达、细胞黏着斑和F-actin的变化。结果：10、25μmoI/L百里醌对BxPC-3细胞体外运动的抑制率分别为43.4%、73.8%，对体外侵袭的抑制率分别为60.5%、75.6%，百里醌呈浓度依赖性地抑制胰腺癌BxPC-3细胞的体外运动、侵袭（P＜0.05）。百里醌能明显下调BxPC-3细胞FAK表达，并抑制细胞磷酸化Akt的激活。百里醌可诱导FAK弥散分布于胞质，明显抑制黏着斑形成和F-actin的聚合集化。结论：百里醌通过抑制FAK/PI3K/Akt通路的信号转导和激酶活性，浓度依赖性地抑制人胰腺癌BxPC-3细胞的体外运动和侵袭。
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百里醌对2型糖尿病大鼠脑内氧化应激及细胞因子表达的影响
目的 探讨植物单体百里醌(thymoquinone,TQ)对2型糖尿病大鼠脑组织内氧化应激相关蛋白及细胞因子表达的影响.方法 48只成年6周龄Wistar大鼠(140～160 g)随机分为正常对照组、模型组和百里醌组(n=16).正常对照组给予清洁级普通饲料;模型组及百里醌组高糖高脂饲料喂养,6周后给予腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ) 35 mg/kg制备2型糖尿病模型,造模成功后继续高糖高脂饲料喂养6周.百里醌组造模成功后隔天给予腹腔注射TQ(5 mg/kg),模型组注射等剂量无水乙醇.治疗6周后同时处死3组大鼠,获取海马组织标本提取蛋白质.使用Western blot方法测定海马组织中的核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)及环加氧酶-2(cyclo-oxygenase 2,COX-2)的蛋白质水平,使用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒检测SOD的活性.使用血糖仪测量各组大鼠造模成功后及处死前的血糖.所有的计量资料采用x±s表示,组间计量资料比较用单因素方差分析(One Way ANOVA).结果 与正常对照组相比,模型组海马组织中Nrf2和HO-1的蛋白质水平明显降低(P＜0.05);与模型组相比,百里醌组海马组织中HO-1和Nrf2的蛋白质水平升高(P＜0.05).同时,与正常对照组相比,模型组海马组织中SOD的活性明显降低(P＜0.05);与模型组相比,百里醌组SOD的活性明显升高(P＜0.05).此外,与正常对照组相比,模型组海马组织COX-2的蛋白质水平明显升高(P＜0.05);与模型组相比,百里醌组海马组织的COX-2的蛋白质水平下降(P＜0.05).结论 百里醌可以抑制2型糖尿病大鼠脑组织内的炎性反应并改善氧化应激.
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百里醌通过磷酸化p38MAPK途径介导NSCLC细胞毒性作用的机制研究
目的 探讨百里醌(TQ)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞毒性作用的分子机制.方法 NSCLC鳞癌细胞SK-MES-1接种于96孔板,予20、40、60、80、100 μmol/L TQ培养24 h,观察浓度依赖性,计算TQ的IC50值;予接近IC50浓度TQ培养SK-MES-1,观察时间依赖性;予ERK抑制剂U0126和p38抑制剂SB203580分别作用于SK-MES-1、95-D,观察细胞存活率;Western blot检测U0126预处理1h,加TQ孵育SK-MES-1 30 min后测p-p38、p38,p-ERK1/2、ERK1/2,p-JNK、JNK蛋白表达.结果 ①TQ呈浓度和时间依赖性降低NSCLC细胞存活率;②30 μmol/L TQ和10 μmol/L U0126 +30μmol/L TQ比较其细胞存活率有显著差异(P =0.000),但与10 μmol/L SB203580 +30μmol/L TQ比较无显著差异(P=1.00),10 μmol/L SB203580+ 30 μmol/L TQ与10 μmol/L U0126+ 30 μmol/L TQ组比较有显著差异(P =0.000);60 μmol/L TQ、10 μmol/L U0126+60 μmol/L TQ、10 μmol/L SB203580 +60μmol/L TQ两两比较均无显著差异(P＞0.05);随TQ浓度增加,SB203580对95-D细胞的保护作用逐渐减弱,10μmol/L SB203580+ 40μmol/L TQ组与40 μmol/L TQ组比较细胞存活率仍有显著差异(P=0.033);③Western blot结果表明U0126显著抑制ERK1/2磷酸化,p38随TQ浓度增加而磷酸化增加,但ERK 1/2磷酸化减少,JNK磷酸化无明显改变.结论 TQ透过磷酸化p38途径介导NSCLC毒性作用,而不是ERK1/2途径.
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百里醌对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用
目的 观察百里醌对大鼠肾缺血再灌注损伤(ischemia-reper fusion injury,IRI)的保护作用.方法 60只健康SD大鼠,♂,随机分成正常组、模型组和百里醌组.模型组和百里醌组大鼠建立肾脏缺血再灌注模型,百里醌组在再灌注同时腹腔注射百里醌(40 mg·kg-1).HE染色观察肾脏组织病理改变;测定血清指标肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)以及肾组织指标丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD);采用原位缺口末端标记检测肾小管上皮细胞凋亡指数(AI);RT-PCR检测肾脏组织中的caspase-3,Bax和TNF-α和IL-1β的表达情况.结果 模型组可见肾小管扩张,肾小管上皮细胞坏死等,经百里醌治疗后明显改善.与模型组相比,百里醌组凋亡指数明显降低(P＜0.05).与正常组比较,模型组SOD活性显著降低(P＜0.05),MDA含量、Scr和BUN显著升高(P＜0.05);与模型组比较,百里醌组SOD活性显著升高(P＜0.05),MDA含量、Scr和BUN显著降低(P＜0.05);与正常组比较,模型组中caspase-3、Bax、TNF-α和IL-1β mRNA表达水平明显增高(P＜0.05).和模型组比较,百里醌组中caspase-3、Bax、TNF-α和IL-1β表达明显减低(P＜0.05).结论 百里醌可减轻氧化应激水平,发挥抗炎及抗凋亡作用,从而在肾脏IRI过程中发挥保护作用.
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百里醌对体内外人乳腺癌细胞MCF-7生长和凋亡的影响
目的 探讨百里醌对人乳腺癌细胞株MCF-7的影响.方法 应用CCK-8法检测百里醌对MCF-7人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖抑制作用;流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡情况.建立裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型,原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤组织细胞的凋亡情况;采用免疫组化方法检测肿瘤组织中ki-67、survivin的表达.结果 百里醌可显著抑制体外人乳腺癌细胞株MCF-7生长,并明显诱导细胞凋亡;百里醌可显著抑制裸鼠乳腺癌皮下移植瘤生长,且明显降低乳腺癌肿瘤组织中Ki-67和survivin的阳性表达.结论 百里醌可显著抑制人乳腺癌生长,该作用可能通过抑制Ki-67和survivin表达而实现.
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百里醌对兔骨关节炎模型关节软骨的保护作用及机制
目的 探索关节腔内注射百里醌对兔骨关节炎模型关节软骨的保护作用及机制.方法 选用新西兰大白兔构建动物模型,分为百里醌组、骨关节炎组和假手术组各20只,观察并记录实验大白兔6min内步行距离.术后9周处死动物取左膝关节标本进行大体组织学Gross评分,切片行苏木精-伊红(HE)染色、番红染色后进行组织病理学Mankin评分,采用RT-PCR检测3组大白兔关节软骨中基底金属蛋白酶-13(MMP-13)、基底金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)和2型胶原(Collagen Ⅱ)等靶基因表达水平.结果 百里醌组大白兔的行走距离明显大于骨关节炎组(P＜0.05);而Gross评分、Mankin评分均低于骨关节炎组(均P＜0.05).与骨关节炎组比较,百里醌组MMP-13mRNA表达水平明显下降(P＜0.05),TIMP-1、Aggrecan和Collagen Ⅱ mRNA表达水平明显上升(均P＜0.05).结论 百里醌对兔骨关节炎模型的关节软骨具有保护作用,可以减少疼痛,延缓骨关节炎的进展.百里醌可能通过下调MMP-13mRNA表达,上调TIMP-1、Aggrecan和Collagen Ⅱ mRNA表达的分子机制实现保护作用.
