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Pumilio1/Pumilio2双基因条件性敲除小鼠模型的建立及基因型鉴定
目的 建立及鉴定Pumilio1/Pumilio2(Pum1和Pum2)双基因条件性敲除的小鼠模型,为进一步研究PUF家族在哺乳动物精子发生中的生物学功能奠定基础.方法 将构建的Pum1条件性敲除和Pum2条件性敲除的两个品系小鼠进行交配并繁殖,终繁殖成功的子代小仔Pum1和Pum2两个基因均为纯合子.对子代以剪趾方式进行编号,提取子代小鼠脚趾或鼠尾基因组DNA,用PCR法和琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型.结果 Pum1和Pum2双基因条件性敲除的小鼠模型繁殖成功,同时获得更多PUF家族双基因条件性敲除的小鼠.结论 成功建立了Pum1和Pum2双基因条件性敲除的小鼠模型;正确的交配繁殖策略和鉴定方法是获得PUF家族双基因条件性敲除小鼠的有效途径.
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哺乳动物PUF家族蛋白PUMILIO1的伴侣蛋白研究
目的:探索NIH3T3和DU145细胞中PUM1蛋白的伴侣蛋白.方法:收集NIH3T3和DU145细胞进行免疫沉淀实验,实验组和对照组分别使用抗PUM1抗体和抗Goat-IgG抗体.通过银染实验观察实验组与对照组是否有差异性条带,通过质谱鉴定和Mascot软件对差异性条带所包含的蛋白进行分析,鉴定PUM1蛋白在细胞中发挥作用时的可能互动蛋白.结果:在NIH3T3和DU145细胞银染实验中,实验组凝胶泳道均在约37 KD处出现差异性条带.对NIH3T3细胞中差异性条带进行质谱分析,通过Mascot软件肽质量指纹谱搜索,将有真实差异的蛋白评分低阈值设为65,P＜0.05,结果显示肽段评分高的蛋白为NDFIP2蛋白.与NCBInr数据库比对,检测到针对NDFIP2的肽段的覆盖率为40％.结论:NDFIP2与哺乳动物PUM1蛋白在细胞内关联,可能是PUF家族蛋白的伴侣蛋白.
