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阳离子脂质体介导pE-CEA-cd-tk对CEA阳性肺癌的杀伤作用
目的增强E.coli cd/HSV-1 tk自杀基因的细胞毒性,实现阳离子脂质体介导pE-CEA-cd-tk/5-FC+GCV体系靶向杀伤CEA阳性肺癌.方法 PCR法分别扩增出CMV增强子,CEA启动子,cd-tk,构建真核表达载体pE-CEA-cd-tk;MTT法检测pE-CEA-cd-tk/5-FC+GCV体系的体外细胞毒性.体内实验采用肺腺癌细胞SPC-A-1裸鼠皮下移植瘤模型.通过肿瘤局部或鼠尾静脉注射脂质体/pE-CEA-cd-tk复合物,腹腔注射GCV+5-FC前体药物进行治疗.结果阳离子脂质体介导pE-CEA-cd-tk/5-FC+GCV体系体外可靶向杀伤CEA阳性肺癌细胞,这种杀伤作用存在显著的细胞差异;体内可抑制小鼠皮下肺肿瘤结节的生长,荷瘤鼠存活期延长.结论阳离子脂质体介导pE-CEA-cd-tk/5-FC+GCV体系体内外对CEA阳性肺癌均具有较强的杀伤作用.有望用于CEA阳性肺癌的治疗.
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CMVE-PEG3启动子在前列腺癌DU145细胞中的活性鉴定
[目的]比较CMVE-PEG3p、PEG-3启动子在DU145细胞中的启动活性,为前列腺癌靶向性基因治疗提供依据.[方法]用PCR法扩增CMV增强子、PEG-3启动子；在真核表达质粒pShuttle-EGFP基础上分别构建2种启动子调控的、以绿色荧光蛋白为目的基因的真核表达质粒pShuttle-CMVE-PEG3p-EGFP、pShuttle-PEG3p-EGFP.将重组质粒用脂质体分别转染前列腺癌DU145细胞和人正常前列腺上皮细胞RWPE-1,72h后用Imagepro-Plus6.0分析2种启动子在相同时间内启动绿色荧光蛋白的表达水平.[结果]重组质粒在DU145细胞中观察到了绿色荧光,在RWPE-1细胞中无绿色荧光.pShuttle-CMVE-PEG3p-EGFP质粒在DU145细胞中表达强于pShuttle-PEG3p-EGFP.2种质粒在DU145细胞中的荧光强度(IOD)分别为246.22、130.93.[结论]所克隆的CMVE-PEG3p启动子和PEG-3启动子在前列腺癌DU145细胞中均表现出肿瘤特异性,其中CMVE-PEG3p启动子具有更强的启动效应,有望开发成为前列腺癌靶向性基因治疗的工具.
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hTERT启动的双自杀基因CDTK载体的构建
目的:构建hTERT启动子启动的双自杀基因载体CDTK(pc-ChCDTK).方法:利用PCR扩增CMV增强子、hTERT启动子、yCD及TKgly 4种元件,并构建过渡载体T-CMV,T-hTERT,T-yCD,T-TKgly,连至pc-DNA3.1(-)质粒载体上构建成双自杀基因载体pc-DNA3.1-CMV- hTERT-CDTK(pc-ChCDTK);对各个元件、过渡载体及终载体进行琼脂糖凝胶电泳、酶切和测序鉴定.结果:实验所构建的终载体的酶切产物琼脂糖凝胶电泳所得片段大小分别为6 773bp和288bp,与预期片段一致;测序证实终载体与pc-ChCDTK序列一致.结论:成功构建了含有hTERT启动子的肿瘤特异性双自杀基因载体pc-ChCDTK.
关键词： CMV增强子 hTERT启动子 Cdgly TK基因 载体 自杀基因疗法
