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miR-486对胶质瘤干细胞的抑制作用
背景：既往研究发现，miR-486在胶质瘤干细胞(CD133+)中的表达水平显著低于其在胶质瘤非干细胞(CD133-)中的表达水平，但是miR-486对CD133+细胞的影响尚不明确。目的：探索miR-486对CD133+细胞的作用。方法：利用流式细胞分选将 U87胶质瘤细胞中分为 CD133+和 CD133-细胞。通过脂质体转染构建 miR-486过表达的胶质瘤干细胞。结果与结论：流式细胞分选和纯化获得高比率的CD133+胶质瘤干细胞。实时反转录PCR检测发现miR-486在CD133+胶质瘤干细胞的表达水平比CD133-胶质瘤细胞明显下降。脂质体转染成功构建miR-486过表达的胶质瘤干细胞，体外实验发现miR-486高表达抑制胶质瘤干细胞的增殖，将其阻滞于G1/S期，并促进凋亡。提示miR-486对胶质瘤干细胞具有抑制作用。
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洛伐他汀对胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响
背景：越来越多的研究报道洛伐他汀对多种肿瘤细胞具有抑制增殖、促进凋亡、诱导分化等作用，而对正常细胞的毒副作用较小，但其对胶质瘤干细胞的影响尚未见报道。
目的：探讨洛伐他汀对胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响。
方法：利用流式细胞仪分选技术从人类恶性胶质母细胞瘤细胞系U87中分选出胶质瘤干细胞；MTT法检测洛伐他汀对胶质瘤干细胞增殖的影响；流式细胞仪检测洛伐他汀对胶质瘤干细胞凋亡的影响；Western blot检测洛伐他汀对胶质瘤细胞Ki67、Bax及Bcl-2表达的影响。
结果与结论：①利用流式细胞仪分选技术成功从人类恶性胶质母细胞瘤细胞系 U87中分选出 CD133+胶质瘤干细胞，分选后CD133阳性细胞比率为85%；②洛伐他汀能够浓度(5，10，20μmol/L)和时间(24，48，72，96 h)依赖性地抑制胶质瘤干细胞的增殖；③10μmol/L洛伐他汀干预48 h能够诱导胶质瘤干细胞的凋亡；④洛伐他汀能够浓度(5，10，20μmol/L)依赖性地抑制胶质瘤细胞中Ki67的表达；⑤10μmol/L洛伐他汀能够提高胶质瘤细胞中Bax的表达，同时降低Bcl-2的表达；⑥Ki67，Bax，Bcl-2蛋白表达的变化进一步验证了洛伐他汀能够浓度和时间依赖性地抑制胶质瘤干细胞的增殖，诱导胶质瘤干细胞的凋亡。 -
ADAM12基因表达沉默对CD133阳性胶质瘤细胞自我更新能力的影响
目的：研究解整合素-金属蛋白酶12(a disintegrin and metalloprotease 12,ADAM12)基因表达沉默抑制CD133阳性（CD133+）胶质瘤细胞的自我更新能力。方法采用shRNA重组慢病毒转染技术沉默胶质瘤U87细胞系ADAM12基因表达分为ADAM12基因表达干扰序列组（shRNA-ADAM12）、阴性对照组（shRNA-NC）及空白对照（shRNA-C）组。通过Western blotting以及Real-time PCR验证各组细胞ADAM12表达情况；采用悬浮培养得到胶质瘤细胞球以富集CD133+的胶质瘤细胞；并通过免疫荧光染色技术检测ADAM12与CD133在细胞球与贴壁细胞的表达情况；通过神经肿瘤球形成实验检测三组细胞的自我更新能力；利用Western blotting分别检测三组细胞成球后未分化或分化相关蛋白CD133、GFAP及TUBB3以及Notch通路靶基因Hes1的蛋白表达情况。结果慢病毒转染技术可显著下调U87胶质瘤细胞ADAM12的mRNA及蛋白的表达量，shRNA-ADAM12组与shRNA-NC组较shRNA-C组mRNA的相对表达量为0.22±0.03与0.98±0.06（F=425.37，P＜0.01）；三组AD?AM12蛋白的相对表达量分别为28.72%±2.36%、69.21%±3.92%及69.04%±3.57%（F=145.42, P＜0.01）；免疫荧光染色显示细胞球中ADAM12与CD133表达量明显高于普通细胞；神经肿瘤球形成实验结果显示，三组成球数分别为45.5±2.3、104.2±5.8以及109.6±6.2，与shRNA-NC组及shRNA-C组相比，shRNA-ADAM12组的成球能力明显降低，差异具有统计学意义（ F=147.03，P＜0.01）。shRNA-ADAM12组与shRNA-C组相比，GFAP与TUBB3蛋白表达量分别上调约166%与146%，CD133与HES1的蛋白表达量分别下调了54%与50%，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。结论 ADAM12基因表达沉默可能通过抑制Notch通路活性降低CD133+胶质瘤细胞的自我更新能力。
关键词： 解整合素-金属蛋白酶12 CD133+胶质瘤细胞 自我更新
