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miR-486基因修饰的脐带间充质干细胞外泌体对心肌细胞生物学特性影响
目的:观察miR-486基因修饰脐带间充质干细胞外泌体的生物学特性,评价其对大鼠H9c-2心肌细胞生物学特性的影响.方法:分离并扩增人脐带间充质干细胞(UC-MSC),并鉴定其免疫表型和成骨及成脂分化能力;用电子显微镜观测外泌体的形态结构;应用Transwell细胞迁移实验观察外泌体对细胞迁移特性的影响.用重组腺病毒载体介导间充质干细胞高表达miR-486,应用qRT-PCR确定高表达miR-486的UC-MSC.收集培养上清,通过超速离心获得外泌体,应用qRT-PCR检测UC-MSC外泌体miR-486表达量.用Dye670标记评价外泌体对心肌细胞增殖的影响;在H2O2诱导的心肌细胞凋亡模型中通过AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测外泌体对心肌细胞凋亡的影响.结果:UC-MSC分泌外泌体直径均在40-100 nm之间,且具有双膜结构.重组腺病毒能够有效介导miR-486在间充质于细胞表达,miR-486基因修饰UC-MSC分泌的外泌体中miR-486的表达显著增高.高表达miR-486的外泌体对心肌细胞有促增殖、促迁移作用及抑制心肌细胞凋亡的作用.结论:脐带间充质干细胞来源的且高表达miR-486的外泌体对心肌细胞有促增殖及抑制细胞凋亡作用.
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miR-486、miR-499在肺癌患者血浆中的表达及临床价值
目的：探讨miR-486和miR-499在肺癌患者血浆中的表达及临床意义，分析其在非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）中表达的差异。方法收集35例肺癌患者（其中NSCLC组21例，SCLC组14例）及30例健康者（对照组）血样标本，运用qPCR的方法测定各组血浆miR-486、miR-499的表达量，分析NSCLC和SCLC患者血浆中miR-486和miR-499的表达量与各临床特征的关系。对所有入组者血浆miRNA的相对表达量进行ROC曲线分析，计算曲线下面积（AUC）、佳临界值及其敏感度和特异度。结果 NSCLC和SCLC组中血浆miR-486、miR-499的相对表达量均低于对照组（P＜0.05）。NSCLC组血浆miR-486在不同临床特征患者间表达差异均无统计学意义；而TNM分期越晚、分化程度越低，miR-499表达越低（P＜0.05）。SCLC组分期越晚，miR-486表达越低；而miR-499在不同临床特征患者间表达差异均无统计学意义。miR-486诊断肺癌的AUC为0.83（95%CI为0.73~0.93），敏感度和特异度分别为90.0%和68.6%，佳诊断界值为1.02；miR-499诊断肺癌的AUC为0.75（95%CI为0.62~0.88），敏感度和特异度分别为60.0%和94.3%，对肺癌的佳诊断界值为0.32。结论血浆miR-486、miR-499在肺癌患者中表达下调，可能预示预后不良，有望作为肺癌潜在筛查及预后的指标。
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miR-486对胶质瘤干细胞的抑制作用
背景：既往研究发现，miR-486在胶质瘤干细胞(CD133+)中的表达水平显著低于其在胶质瘤非干细胞(CD133-)中的表达水平，但是miR-486对CD133+细胞的影响尚不明确。目的：探索miR-486对CD133+细胞的作用。方法：利用流式细胞分选将 U87胶质瘤细胞中分为 CD133+和 CD133-细胞。通过脂质体转染构建 miR-486过表达的胶质瘤干细胞。结果与结论：流式细胞分选和纯化获得高比率的CD133+胶质瘤干细胞。实时反转录PCR检测发现miR-486在CD133+胶质瘤干细胞的表达水平比CD133-胶质瘤细胞明显下降。脂质体转染成功构建miR-486过表达的胶质瘤干细胞，体外实验发现miR-486高表达抑制胶质瘤干细胞的增殖，将其阻滞于G1/S期，并促进凋亡。提示miR-486对胶质瘤干细胞具有抑制作用。
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血清hsa-miR-486-5p在乳腺癌早期诊断中的价值
目的 探讨与乳腺癌早期诊断密切相关的血清microRNA(miRNA)的临床价值.方法 对乳腺癌发生发展4个阶段(正常-非典型增生-原位癌-浸润性癌)的组织进行miRNA高通量测序,以得到与疾病进展密切相关的目标miRNA,进而利用RT-qPCR技术分析目标miRNA在4个阶段血清中的表达情况.结果 hsa-miR-486-5P在乳腺癌发生发展4个阶段的组织和血清中均随疾病进展呈下调状态,在早期乳腺癌患者血清中呈明显低表达,与乳腺癌分子分型无关(P＞0. 05).早期乳腺癌组低表达的血清hsa-miR-486-5p与正常对照组相比呈显著差异性(P＜0. 01);ROC曲线分析结果显示ROC曲线下面积(AUC 值)为81. 2%(95%CI: 0. 707～0. 917),灵敏度和特异度分别为62. 5%和90. 3%.结论 血清hsa-miR-486-5p可以作为诊断早期乳腺癌的生物标志物,具有较高的临床应用价值.
关键词： hsa-miR-486-5p miR-486 早期乳腺癌 诊断 非典型增生 -
胃癌患者血清miR-486的表达水平及其意义
目的:探讨胃癌患者血清miR-486的表达水平及其辅助诊断的价值.方法:收集经病理确诊的100例胃癌患者、30例胃息肉患者及50例健康对照者的血清标本.采用荧光定量PCR方法定量检测血清miR-486的表达水平,用化学发光法检测CEA、CAl99、CA724的含量.采用Mann-Whitney U检验比较不同组间血清miR-486水平的差异,采用x2检验分析胃癌患者血清miR-486水平与其临床病理特征之间的关系.采用Spearman相关性分析胃癌患者血清miR-486水平与CEA、CA199及CA724的关系,应用ROC曲线及AUC(95％CI)评估它们作为诊断指标的诊断效能.结果:胃癌、胃息肉患者和健康对照者血清miR-486的含量分别为0.454(0.225,0.653)、0.121(0.083,0.166)和0.063(0.013,0.119);胃癌患者血清miR-486的含量显著高于胃息肉患者和健康对照者,差异均具有统计学意义(P均＜ 0.001);而胃息肉患者与健康对照者血清miR-486的含量差异无统计学意义(P＞0.05).胃癌患者血清miR-486的表达水平在不同年龄、性别、胃癌部位无统计学差异(P＞0.05),在分化程度(P=0.046)、TNM分期(P=0.013)、淋巴结是否转移(P=0.006)差异均有统计学意义.胃癌患者血清miR-486含量与CEA(r=0.213,P=0.034)、CA724(r=0.297,P=0.003)有相关性,与CA199(r=0.037,P=0.714)无相关性.胃癌组与健康对照组比较,血清miR-486的AUC 0.839,95％CI为0.774～0.904.结论:胃癌患者血清miR-486含量显著高于胃息肉患者和健康对照者,miR-486可能是胃癌辅助诊断的一个重要生物学指标.
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miR-486对CD133+胶质瘤干细胞的影响
目的 研究miR-486对CD133+胶质瘤干细胞的影响.方法 CD133抗体标记U87胶质瘤细胞系,流式细胞分选纯化CD133+胶质瘤干细胞,实时荧光定量PCR(qPCR)检测CD133+胶质瘤干细胞中miR-486的表达量.脂质体转染方法构建过表达miR-486的CD133+胶质瘤干细胞,MTT法检测其凋亡率,流式分析仪检测细胞增殖率与生长周期.结果 流式分选后CD133+胶质瘤干细胞纯度从1.7％提升至84.2％ (P ＜0.001),达到实验要求.CD133+ U87胶质瘤细胞中miR-486相对表达量为(0.33±0.10),显著低于CD133+ U87胶质瘤细胞中的miR-486表达量(0.45±0.09)(P＜0.05).转染miR-486模拟物的CD133+胶质瘤干细胞较转染miRNA对照模拟物的CD133+胶质瘤干细胞相对增殖率降低(220％ vs 360％),细胞周期检测对照组细胞位于G0/G1期的比例低于转染miR-486后的细胞(62.8％ vs 76.8％,P＜0.05),转染miR-486后细胞凋亡率显著提高(1.7％ vs 23.2％,P＜0.001).结论 CD133+胶质瘤干细胞中miR-486表达量减少,过表达miR-486的CD133+胶质瘤干细胞增殖受到抑制,生长周期被阻滞于G1/S期,凋亡率显著提高,可能是胶质瘤靶向治疗胶质瘤干细胞的有效靶点.
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miR-486在非小细胞肺癌血液中表达及意义
目的：对比分析非小细胞肺癌患者肿瘤组织、瘤旁组织和外周血清中miR-486的表达情况，探讨miR-486是否有可能成为新的非小细胞肺癌标记物。方法：选取20例临床上确诊并进行外科治疗的非小细胞肺癌病例，每个病例取3块肿瘤组织，3块正常肺组织以及3×10ml外周血液样本。另选取20例健康志愿者抽取3×10ml外周血液作为对照。提取总RNA进行qRT-PCR实验。分析外周血清和肿瘤组织中miR-486的表达情况。结果：miR-486在非小细胞肺癌肿瘤组织中呈低表达状态（ P﹤0.05），其在瘤组织内的表达与外周血清中的表达呈正相关性（P﹤0.05）。结论：miR-486在人体外周血清中的表达与非小细胞肺癌存在正相关性，提示外周血清中miR-486可以成为非小细胞肺癌的预警因子。
