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慢性染铅对大鼠海马区神经细胞Ca2+浓度及Ca2+-ATP酶活性的影响
目的:观察慢性染铅对大鼠海马区神经细胞Ca2+浓度及Ca2+-ATP酶活性的影响.方法:用0.15%醋酸铅饲养大鼠建立慢性染铅动物模型,参照Dildy法和徐友涵法测定海马神经细胞Ca2+浓度及Ca2+-ATP酶活性.结果发现:细胞内Ca2+浓度,染铅组(203.83±30.50)nmol/L,对照组(97.62±19.83)nmol/L,t=8.31 P<0.005;Ca2+-ATP酶活性,染铅组(326.42±40.06)nmol(Pi).mg-1.min-1,对照组(253.07±25.40)nmol(Pi).mg-1.min-1,t=3.54,P<0.01.结论:慢性染铅可使大鼠海马区神经细胞内Ca2+浓度升高,Ca2+-ATP酶活性增强.
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急性缺氧对环匹阿尼酸诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度升高的影响
目的：研究急性缺氧对Ca2+-ATPase抑制剂——环匹阿尼酸（CPA）诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞（PVSMC）内钙浓度（[Ca2+]i）升高的影响及机制。
方法：选用6只雄性SD大鼠（体重200~250 g），培养大鼠PVSMC，运用荧光显微镜和细胞内钙浓度检测系统观测CPA及急性缺氧（4%O2）对PVSMC的[Ca2+]i影响及钙池操纵性钙通道（SOCC）阻断剂氯化镍（NiCl2）和SKF96365的干预作用。
结果：含5μmol/L硝苯地平（电压依赖钙通道阻断剂）的无钙Krebs溶液孵育PVSMC，10μmol/L CPA使PVSMC的[Ca2+]i小幅度升高，急性缺氧能使[Ca2+]i升高幅度增加；恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后，10μmol/L CPA使[Ca2+]i显著升高，急性缺氧可导致CPA诱导的[Ca2+]i升高显著增强；SOCC阻断剂NiCl2（500μmol/L）和SKF96365（50μmol/L）均能明显抑制急性缺氧条件下CPA诱导的[Ca2+]i升高，但对高钾（60 mmol/L KCl）Krebs溶液引起的[Ca2+]i反应无影响。
结论：急性缺氧能够使CPA诱导的大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高增强，[Ca2+]i升高可被SOCC阻断剂阻断，提示急性缺氧能够增强SOCC活性，使细胞外Ca2+通过SOCC内流增强，从而导致大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高。 -
15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响
目的 探讨15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞内Ca2+的作用及其来源.方法 以酶法(胶原酶Ⅰ型和弹性酶)分离培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞,将细胞稀释所需密度(2×105个/mL),加样于6孔板中的盖玻片上,放入37℃孵箱中培养12 h,细胞贴壁后,取出6孔板中的盖玻片,放入特制的小槽内,D-Hanks液冲洗细胞3次,加入1×10-5moL/L的Flou-3/AM,置37℃孵箱中避光孵育约30 min,用D-Hanks液洗去细胞外残留染料,应用激光扫描共聚焦显微镜技术,测定了15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞游离钙离子浓度的影响.结果 1)15-KETE(1×10-8-1×10-6) mol/L可依赖性引起肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)增加;2)1×10-6mol/L维拉帕米(L-型钙离子通道阻断剂)和无钙离子细胞外液显著阻抑了1×10-6 mol/L 15-KETE引起肺动脉平滑肌[Ca2+]i增加.结论 15-KETE可引起大鼠肺动脉平滑肌[Ca2+]i增加,并且此钙来源于细胞外液钙离子.
关键词： 15-酮基二十碳四烯酸 肺动脉平滑肌细胞 细胞内Ca2+浓度 -
4'-甲醚-黄芩素诱导绒毛膜癌JAR细胞凋亡的实验研究
目的 探讨4'-甲醚-黄芩素(4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制.方法 应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响.结果 不同质量浓度(10、20、40 mg/L)的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖,作用72 h后其增殖抑制率分别为(14.14±0.75)%、(34.34±2.99)%、(61.11±2.99)%(P＜0.01);4-MS作用72 h后细胞内Ca2+浓度分别为81.3±6.7、103.3±5.9、120.7±11.0,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05).40 mg/L 4-MS作用12、24、36 h后其早期凋亡率分别为(2.36±0.19)%、(4.22±2.44)%、(7.34±0.56)%,明显高于对照组(P＜0.01).20、40 mg/L 4-MS作用48 h后hTERT mRNA的表达量为0.05±0.01和0.02±0.01,明显低于对照组(P＜0.01).结论 4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2+浓度、降低hTERT mRNA的表达有关.
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pH改变对心肌细胞内Ca2+浓度和细胞长度的影响
目的:探讨细胞内pH(pHi)改变对心肌细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)和细胞长度的影响.方法:心肌细胞内分别灌注20 mmol/L 丙酸钠和15 mmol/L NH4Cl,建立细胞内酸碱中毒模型.荧光指示剂indo-1和SNARF-1载入大鼠心肌细胞内,用荧光显微镜同时测定心肌[Ca2+]i、pHi和细胞长度.结果:细胞内酸中毒早期,收缩期和舒张期[Ca2+]i轻度增加,细胞缩短 (CS)降低,细胞长度增加,心肌纤维对Ca2+的敏感性和CS/[Ca2+]i降低(P<0.01);碱中毒时,收缩期和舒张期[Ca2+]i均较对照组降低,CS增加,细胞长度变短,心肌纤维对Ca2+的敏感性和CS/[Ca2+]i增加(P<0.01).结论:酸中毒早期[Ca2+]i和细胞长度增加,碱中毒时[Ca2+]i和细胞长度降低.酸、碱中毒对Ca2+敏感性的影响并非线性关系,即单位pHi变化时酸中毒对敏感性的影响较碱中毒小.
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内皮素-1对大鼠心肌细胞正性肌力作用的研究
目的:探讨内皮素-1(ET-1)对大鼠心肌细胞正性肌力作用的细胞内机制.方法:将离子敏感性荧光指示剂indo-1和SNARF-1载入大鼠心室肌细胞内,荧光显微镜法同时测定细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)、pH(pHi)和细胞长度.结果:在17例大鼠心肌细胞中,只有8例对灌注ET-1表现出明显的细胞缩短反应,即正性肌力作用,占47%,另9例对灌注ET-1没有反应.ET-1 100nmol/L可使细胞缩短的幅度增加至给药前的(202.85±28.13)%,P＜0.01;[Ca2+]i瞬间变化的幅度增加至给药前的(132.06±10.93)%,P＜0.05;pHi与对照组相比轻度增加.结论:ET-1可直接作用于大鼠心室肌细胞引起正性肌力作用,其作用机制是增加了[Ca2+]i瞬间变化,而不是明显增加了PHi.
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4'-甲醚-黄芩素对绒毛膜癌JAR细胞内Ca2+浓度的影响
目的:探讨4'-甲醚-黄芩素对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及细胞内Ca2+浓度的影响.方法:应用MTT法、流式细胞术和激光共聚焦扫描显微镜技术,体外观察该化合物对JAR细胞的影响.结果:4'-甲醚-黄芩素对JAR细胞的生长具有抑制作用.随着药物浓度与作用时间的增加,Annexin V-FITC+/PI-细胞、细胞内Ca2+浓度逐渐增加,与对照组相比差异有显著性.结论:4'-甲醚-黄芩素能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2+浓度有关.
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补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞内Ca2+浓度的影响
现代医学研究表明,肿瘤耐药性尤其是多药耐药基因(multidrug resistant gene, MDR)的表达使肿瘤对多种化疗药物产生耐受.这是导致化疗失败的主要原因[1],并且也是肺癌化疗缓解后复发和转移的重要原因.研究还表明细胞内钙离子的浓度及活性改变对肿瘤化疗耐药性的产生有一定的影响.我们通过临床和实验研究发现,补肾助阳与化瘀解毒两类中药对肺癌化疗具有明显的增效解毒作用.
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尼莫地平对人结肠癌细胞系HCT增殖的影响及机制探讨
目的:研究钙拮抗剂尼莫地平对人结肠癌细胞系HCT生长的影响及探讨其相应的机制.方法:MTT法检测不同剂量尼莫地平对HCT细胞生长的影响.探讨经尼莫地平作用的HCT细胞是否发生凋亡:用流式细胞术检测凋亡细胞亚二倍体峰;DNA凝胶电泳检测HCT细胞DNA的梯度条带;瑞士-姬姆萨染色观察HCT细胞的形态学变化.激光共聚焦扫描显微镜检测在尼莫地平作用下HCT细胞内钙离子的浓度及分布状态的变化.结果:MTT法示尼莫地平可抑制人结肠癌细胞系HCT的生长.流式细胞术检测显示,尼莫地平作用后,HCT细胞亚二倍体峰面积增大,且凋亡细胞数呈剂量依赖性;高剂量尼莫地平组可见典型的DNA的梯度条带;细胞形态呈现细胞的胞膜泡化,胞质浓缩,染色质断裂等变化.Fluo-3荧光标记显示尼莫地平作用于HCT细胞后,细胞内Ca2+浓度[Ca2+]i升高,PI荧光标记的细胞核型发生变化.结论:尼莫地平作为钙拮抗剂对结肠癌HCT细胞系的生长有抑制作用;其机制可能是通过细胞凋亡作用的.
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Cariporide对糖基化终末产物所致血管平滑肌细胞增殖的影响
目的 观察cariporide对糖基化终末产物所致大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响.方法 采用组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞.用体外制备的外源性糖基化终末产物和平滑肌细胞共孵育24 h,加入不同浓度的cariporide(0.1、1.0和10 μmol/L)处理.用噻唑蓝比色法所测得的细胞吸光度值及考马斯亮蓝法测得的细胞总蛋白含量来反映细胞增殖情况,利用2,7-二羧乙基-5,6羧基荧光素及钙荧光探针通过荧光分光光度计分别检测细胞内的pH值及Ca2+浓度.结果 糖基化终末产物(10 mg/L)与平滑肌细胞共孵24 h,与正常对照组比较,细胞吸光度值(0.554±0.032比0.155±0.018)和细胞内总蛋白浓度均显著增加(193.3±10.7 μmol/L比127.8±8.2μmol/L,P＜0.01);cariporide 0.1、1.0和10μmol/L使细胞吸光度值从0.554±0.032分别降至0.402±0.028、0.298±0.020、0.174±0.019;细胞内总蛋白浓度也从(193.3±10.7)μmol/L分别降至(180.9±9.8)μmol/L,(156.4±9.4)μmol/L,(130.6±8.8)μmol/L,同时cariporide也明显降低了糖基化终末产物处理后的平滑肌细胞内pH值及Ca2+水平.结论 外源性糖基化终末产物能显著刺激平滑肌细胞的增殖;cariporide对糖基化终末产物诱导的平滑肌细胞增殖具有显著抑制作用,其机制可能与cariporide抑制细胞内糖基化终末产物诱导的pH值及Ca2+水平升高有关.
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环匹阿尼酸对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响
目的 研究环匹阿尼酸(CPA)对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及可能机制.方法 原代培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫荧光染色鉴定,利用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测高钾(60 mmol/L KCl)溶液及CPA对PVSMC的[Ca2+]i影响.结果 原代培养的PVSMC表现出典型血管平滑肌细胞生长特征,并对平滑肌α-actin免疫荧光染色呈阳性反应;高钾溶液使PVSMC的[Ca2+]i显著升高,5 μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应;10 μmol/L CPA能使含5 μmol/L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10 μmol/L CPA能使含5 μmol/L硝苯地平的Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i迅速升高.结论 CPA能够使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与Ca2+从肌浆网释放,并诱发细胞外Ca2+通过钙池操纵性钙通道(SOCC)内流有关.
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补肾化瘀解毒方药物血清对肺癌耐药细胞内Ca2+浓度影响的研究
为了探讨补肾化瘀解毒方对肺癌耐药细胞内Ca2+浓度的影响,选择人肺腺癌耐药株A549/DDP为模型,采用荷瘤动物血清药理及流式细胞法,并与正常动物含药血清为对照,结果补肾化瘀解毒方荷瘤动物含药血清与正常动物药物血清均能显著降低肺癌A549/DDP耐药细胞内Ca2+浓度(P＜0.001),但荷瘤动物药物血清降低作用显著高于正常动物药物血清(P＜0.05).表明补肾化瘀解毒方药物血清有阻止肺癌耐药细胞内Ca2+的内流或释放作用,但荷瘤动物药物血清与正常动物药物血清具有差异性.
