首页 > 文献资料
-
急性缺氧对环匹阿尼酸诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度升高的影响
目的：研究急性缺氧对Ca2+-ATPase抑制剂——环匹阿尼酸（CPA）诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞（PVSMC）内钙浓度（[Ca2+]i）升高的影响及机制。
方法：选用6只雄性SD大鼠（体重200~250 g），培养大鼠PVSMC，运用荧光显微镜和细胞内钙浓度检测系统观测CPA及急性缺氧（4%O2）对PVSMC的[Ca2+]i影响及钙池操纵性钙通道（SOCC）阻断剂氯化镍（NiCl2）和SKF96365的干预作用。
结果：含5μmol/L硝苯地平（电压依赖钙通道阻断剂）的无钙Krebs溶液孵育PVSMC，10μmol/L CPA使PVSMC的[Ca2+]i小幅度升高，急性缺氧能使[Ca2+]i升高幅度增加；恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后，10μmol/L CPA使[Ca2+]i显著升高，急性缺氧可导致CPA诱导的[Ca2+]i升高显著增强；SOCC阻断剂NiCl2（500μmol/L）和SKF96365（50μmol/L）均能明显抑制急性缺氧条件下CPA诱导的[Ca2+]i升高，但对高钾（60 mmol/L KCl）Krebs溶液引起的[Ca2+]i反应无影响。
结论：急性缺氧能够使CPA诱导的大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高增强，[Ca2+]i升高可被SOCC阻断剂阻断，提示急性缺氧能够增强SOCC活性，使细胞外Ca2+通过SOCC内流增强，从而导致大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高。 -
一种大鼠肺静脉平滑肌细胞快速培养方法的建立及评价
目的 通过改进原代大鼠肺静脉平滑肌细胞(pulmonary vein smooth muscle cells,PVSMCs)的培养方案,以期建立快速、方便、高细胞活力的肺静脉平滑肌细胞培养方法,为肺静脉在肺血管相关疾病研究中提供适合的细胞模型.方法 体视镜下显微分离大鼠肺静脉,胶原酶消化后获取原代PVSMCs,分别用低糖DMEM培养基、DMEM-F12培养基、高糖DMEM培养基作为培养液,观察PVSMCs的生长情况和细胞形态,对平滑肌α-actin进行免疫荧光鉴定,并用实时荧光法检测PVSMCs对高钾溶液引起的细胞内钙浓度升高的反应,评价细胞活力.结果 PVSMCs在3种培养基中的生长速率比较:DMEM-F12＞高糖DMEM＞低糖DMEM.DMEM-F12中培养的PVSMCs可见细胞质中有典型的、并行排列的、绿色荧光显色的平滑肌α-actin蛋白,细胞核呈蓝色荧光,细胞纯度达95％以上,而阴性对照只见染蓝光的细胞核.细胞对高钾溶液具有良好反应.结论 DMEM-F12培养基中PVSMCs生长速率大,细胞符合平滑肌细胞免疫结构特征,并具有良好的细胞功能.DMEM-F12培养基更适合PVSMCs的培养.
-
急性缺氧对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响
目的:研究急性缺氧对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及L型电压依赖性钙通道(VDCC)阻断剂硝苯地平的作用,为缺氧性肺动脉高压发病机制的进一步研究提供理论依据.方法:胶原酶消化法培养大鼠远端PVSMC,利用荧光显微镜和细胞内钙浓度检测系统观测急性缺氧(4％O2)、高钾(60 mmol/L KCl)溶液对PVSMC的[Ca2+]i影响及硝苯地平的干预作用.结果:对照组PVSMC的[Ca2+]i随时间变化维持基线水平；缺氧组PVSMC急性缺氧后,[Ca2+]i迅速升高并维持平台水平,△[Ca2+]i达82.83 nmol/L士23.03 nmol/L;硝苯地平干预组PVSMC予急性缺氧和5μmol/L硝苯地平干预后,[Ca2+]i升高幅度较小；高钾溶液孵育PVSMC后,[Ca2+]i迅速增高,5 μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应.结论:急性缺氧可使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与激活PVSMC的VDCC和另外的非VDCC依赖的钙通道导致细胞外Ca2+内流有关.
关键词： 急性缺氧 细胞内钙浓度 肺静脉平滑肌细胞 L型电压依赖性钙通道 大鼠 -
经典瞬时受体电位蛋白在大鼠远端肺静脉平滑肌细胞的表达
目的:研究经典瞬时受体电位(TRPC)蛋白在大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)的表达.方法:利用胶原酶消化法培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫学鉴定PVSMC;采用Real-time PCR和免疫印迹法检测TRPC蛋白在大鼠远端PVSMC的表达.结果:原代培养的PVSMC呈长梭形,表现出典型的血管平滑肌细胞生长特点,并对平滑肌细胞α-actin免疫荧光显色呈阳性反应；Real-time PCR显示,在已知的7个TRPC成员(TRPC1-7)中,大鼠远端PVSMC有TRPC-1、TRPC-2、TRPC-3、TRPC-4、和TRPC-6的mRNA表达,表达强弱顺序为:TRPC-6＞ TRPC-1＞ TRPC-4＞ TRPC-3＞TRPC-2,不表达TRPC-5和TRPC-7；免疫印迹法进一步表明,在大鼠远端PVSMC有TRPC-1、TRPC-4和TRPC-6的蛋白表达,表达强弱顺序为TRPC-6＞TRPC-1＞TRPC-4.结论:大鼠远端PVSMC主要表达TRPC-1和TRPC-6,其可能与肺静脉平滑肌细胞内Ca2+浓度调节有关.
关键词： 经典瞬时受体电位蛋白 肺静脉平滑肌细胞 大鼠 -
慢性缺氧对大鼠肺静脉平滑肌细胞内钙离子浓度的影响
目的：：探索原代培养肺动脉高压模型大鼠肺静脉平滑肌细胞( PVSMCs)是否具有血管平滑肌功能及L型电压依赖性钙通道( VDCC)阻断剂硝苯地平对其细胞内钙离子浓度([ Ca2＋] i )的影响，为慢性缺氧性肺动脉高压发病机制的研究提供理论依据。方法：用显微镜操作和胶原酶消化法分离、培养肺动脉高压模型大鼠肺静脉平滑肌细胞，鉴定培养的细胞及计算纯度，利用细胞内钙离子浓度检测系统观察慢性缺氧对PVSMCs静息[ Ca2＋] i 的影响及硝苯地平的干预作用。结果：该方法培养的肺动脉高压模型造模的PVSMCs呈典型的平滑肌特性，表现为“峰-谷”状生长，免疫化学α-Actin鉴定显色，而且培养纯度达到98％；慢性缺氧能使PVSMCs的静息[Ca2＋]i 从(104.3±7.9) nmol/L提高到(197.9±11.8) nmol/L(P<0.05)；5 mmol/L的硝苯地平能完全阻断慢性缺氧PVSMCs的[ Ca2＋] i 对高钾溶液的反应。结论：慢性缺氧可使PVSMCs的静息[ Ca2＋] i 升高，其机制可能与激活PVSMCs的VDCC导致细胞外Ca2＋内流有关。
-
环匹阿尼酸对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响
目的 研究环匹阿尼酸(CPA)对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及可能机制.方法 原代培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫荧光染色鉴定,利用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测高钾(60 mmol/L KCl)溶液及CPA对PVSMC的[Ca2+]i影响.结果 原代培养的PVSMC表现出典型血管平滑肌细胞生长特征,并对平滑肌α-actin免疫荧光染色呈阳性反应;高钾溶液使PVSMC的[Ca2+]i显著升高,5 μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应;10 μmol/L CPA能使含5 μmol/L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10 μmol/L CPA能使含5 μmol/L硝苯地平的Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i迅速升高.结论 CPA能够使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与Ca2+从肌浆网释放,并诱发细胞外Ca2+通过钙池操纵性钙通道(SOCC)内流有关.
