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食品中真菌毒素危险性分析的方法及现状
对真菌毒素进行危险性分析具有重要的公共卫生意义.真菌毒素(mycotoxins)是某些真菌产生的二级代谢产物.在目前发现的300多种真菌毒素中,与食品安全相关的真菌毒素主要包括黄曲霉毒素(aflatoxins)、赭曲霉毒素(ochratoxin)、展青霉素(patulin)、玉米赤霉烯酮(zearalenone)、伏马菌素(fumonisins)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol)、T -2毒素(T-2 toxin)、杂色曲霉素(sterigmatocystin)、环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid)、麦角胺(ergotamine)、细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)等[1],这些真菌毒素不仅可以污染食品引起食物中毒,而且有些还具有致癌、致畸、致突变作用,对健康造成极大威胁.联合国粮食及农业组织与世界卫生组织(FAO/WHO)联合咨询专家会议提出的危险性分析(risk analysis)是一个基于科学的、按照结构化方法进行的开放透明的过程,它包括危险性评估(risk assessment)、危险性管理(risk management)和危险性信息交流(risk communication)3个部分.
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急性缺氧对环匹阿尼酸诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度升高的影响
目的：研究急性缺氧对Ca2+-ATPase抑制剂——环匹阿尼酸（CPA）诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞（PVSMC）内钙浓度（[Ca2+]i）升高的影响及机制。
方法：选用6只雄性SD大鼠（体重200~250 g），培养大鼠PVSMC，运用荧光显微镜和细胞内钙浓度检测系统观测CPA及急性缺氧（4%O2）对PVSMC的[Ca2+]i影响及钙池操纵性钙通道（SOCC）阻断剂氯化镍（NiCl2）和SKF96365的干预作用。
结果：含5μmol/L硝苯地平（电压依赖钙通道阻断剂）的无钙Krebs溶液孵育PVSMC，10μmol/L CPA使PVSMC的[Ca2+]i小幅度升高，急性缺氧能使[Ca2+]i升高幅度增加；恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后，10μmol/L CPA使[Ca2+]i显著升高，急性缺氧可导致CPA诱导的[Ca2+]i升高显著增强；SOCC阻断剂NiCl2（500μmol/L）和SKF96365（50μmol/L）均能明显抑制急性缺氧条件下CPA诱导的[Ca2+]i升高，但对高钾（60 mmol/L KCl）Krebs溶液引起的[Ca2+]i反应无影响。
结论：急性缺氧能够使CPA诱导的大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高增强，[Ca2+]i升高可被SOCC阻断剂阻断，提示急性缺氧能够增强SOCC活性，使细胞外Ca2+通过SOCC内流增强，从而导致大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高。 -
小檗碱对豚鼠结肠平滑肌细胞内游离钙浓度的影响
采用Ca2+荧光示踪剂Fura 2-AM和双波长荧光分光光度法, 观察小檗碱(berberine, Ber)对酶法分离的豚鼠结肠平滑肌细胞内游离钙([Ca2+]i)的影响并探讨其机制.在含1.5 mmol/L CaCl2的HEPES-Ringer缓冲液中, 豚鼠结肠平滑肌细胞[Ca2+]i为108±9.4 nmol/L (n=7), Ber对静息[Ca2+]i无明显影响, Ber呈浓度依赖性抑制, 60 mmol/L KCl引起的[Ca2+]i增高, IC50值为34.09 μmol/L.在含1.5 mmol/L Ca2+和无Ca2+的缓冲液中, 30、100 μmol/L Ber均显著抑制10 μmol/L ACh所诱发的[Ca2+]i的增高, 且有浓度依赖性; 同样Ber对环匹阿尼酸(CPA)所致的[Ca2+]i增高也有浓度依赖性抑制作用, 有钙和无钙条件下IC50分别为37.97 μmol/L和49.70 μmol/L.结果提示, Ber对结肠平滑肌细胞外Ca2+内流和细胞内钙释放均有抑制作用.
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蛋白酪氨酸激酶抑制剂对脑血管平滑肌细胞Ca2+池操纵性Ca2+内流的影响
目的研究蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂对牛脑血管平滑肌细胞(CSMC)Ca2+池操纵性Ca2+内流的影响.方法采用培养的CSMC,在生物荧光双波长影像分析系统用Fura-2/Am荧光探针测定单个细胞内游离Ca2+浓度.结果 (1)蛋白酪氨酸激酶抑制剂(genistein,2.5,5,10 μmol*L-1)能浓度依赖性降低内皮素-1(ET-1,10-7 mol*L-1)刺激引起的CSMC Ca2+内流,抑制率分别为5.6%±2.9%、25.6%±3.9%、48.9%±3.7%;蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂(vanadate,2,4,8 μmol*L-1) 能浓度依赖性升高CPA刺激引起的CSMC Ca2+内流,增加比率分别为8.2%±3.9%、18.8%±4.9%、46.6%±6.9%;(2)genistein (2.5,5,10 μmol*L-1)能浓度依赖性降低ATP(10 μmol*L-1)刺激引起的CSMC Ca2+内流,抑制率分别为6.7%±2.6%、24.6%±6.5%、51.3%±6.9%; vanadate (2,4,8 μmol*L-1) 能浓度依赖性升高ATP刺激引起的CSMC Ca2+内流,增加比率分别为4.8%±2.0%、28.5%±4.6%、49.6%±3.3%;(3)genistein (2.5,5,10 μmol*L-1)能浓度依赖性降低环匹阿尼酸(Cyclopiazonic acid,CPA,10 μmol*L-1)刺激引起的CSMC Ca2+内流,抑制率分别为6.5%±3.0%、22.5%±5.2%、44.6%±4.2%; vanadate (2,4,8 μmol*L-1)能浓度依赖性升高CPA刺激引起的CSMC Ca2+内流,增加比率分别为6.1%±3.1%、19.6%±5.1%、46.7%±2.8%.结论蛋白酪氨酸激酶/磷酸酶参与ET-1、ATP、CPA触发的CSMC Ca2+池操纵性Ca2+内流.
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巯亚硝基卡托普利对环匹阿尼酸引起的平滑肌细胞胞浆游离Ca2+浓度升高作用的影响
目的探讨巯亚硝基卡托普利(S-nitrosocaptopril,CapNO)对Ca 2+池操纵性Ca2+内流信号转导过程的影响.方法以Fura-2 荧光探针测定胞浆游离Ca2+ 浓度([Ca2+]I ).结果①CapNO(20～120 μmol·L -1)呈浓度依赖性抑制环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid, CPA)引起的 [Ca2+]I升高,80 μmol·L-1 CapNO为大效应浓度.相同浓度的captopril对CPA升高[Ca2+ ]I无明显抑制作用.②在80 μmol·L-1 CapNO抑制CPA引起[Ca2+]I升高作用的基础上(31%±11%);随后加入1 μmol·L-1硝苯地平不能降低[Ca2+ ]I,再加入20 μmol·L-1SK&F96365(大效应浓度)可进一步降低 [Ca 2+]I(54%±18%),其中SK&F96365净抑制率为24%±10%,与SK&F96365单独作用抑制率(54%±11%)比较差异有显著性.③不同顺序给予大效应浓度CapNO(80 μmol·L -1)和tyrphostinAG490(2 μmol·L-1)对CPA引起[Ca2+]I升高存在交叉抑制作用.结论 CapNO可通过阻断电压依赖性Ca2+通道和Ca 2+池操纵性Ca2+通道抑制CPA引起的[Ca2+]I升高,CapNO对CPA引起[ Ca2+]I升高的阻断作用存在酪氨酸激酶(Janus2亚型)敏感和非敏感两条途径.
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硝苯地平和SK&F96365对环匹阿尼酸引起的平滑肌细胞质游离Ca2+ 浓度升高作用的影响
目的探讨介导Ca2+池操纵性Ca2+内流的Ca2+通道特性. 方法以Fura-2荧光探针测定细胞质游离Ca2+浓度([Ca2+]i). 结果 (1)10 μmol/L环匹阿尼酸(CPA)可触发大鼠主动脉平滑肌细胞[Ca2+]i的双相升高(峰值和持续相).(2)SK&F96365(5～40 μmol/L)以浓度依赖性抑制CPA触发的[Ca2+]i升高持续相.(3)1 μmol/L硝苯地平阻断电压依赖性Ca2+通道后,20 μmol/L SK&F96365仍能抑制CPA触发的[Ca2+]i升高持续相;而在20 μmol/L SK&F96365抑制CPA触发[Ca2+]i升高持续相后,1 μmol/L硝苯地平不能产生进一步的抑制作用. 结论电压依赖性Ca2+通道和Ca2+池操纵性Ca2+通道介导了Ca2+池操纵性Ca2+内流.
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环匹阿尼酸对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响
目的 研究环匹阿尼酸(CPA)对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及可能机制.方法 原代培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫荧光染色鉴定,利用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测高钾(60 mmol/L KCl)溶液及CPA对PVSMC的[Ca2+]i影响.结果 原代培养的PVSMC表现出典型血管平滑肌细胞生长特征,并对平滑肌α-actin免疫荧光染色呈阳性反应;高钾溶液使PVSMC的[Ca2+]i显著升高,5 μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应;10 μmol/L CPA能使含5 μmol/L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10 μmol/L CPA能使含5 μmol/L硝苯地平的Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i迅速升高.结论 CPA能够使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与Ca2+从肌浆网释放,并诱发细胞外Ca2+通过钙池操纵性钙通道(SOCC)内流有关.
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SKF96365和氯化镍对环匹阿尼酸诱导的大鼠PASMC［Ca2＋］i升高的影响
目的：研究SKF96365和氯化镍（NiCl2）对环匹阿尼酸（CPA）诱导的大鼠远端肺动脉平滑肌细胞（PASMC）内游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）变化的影响。方法培养大鼠PASMC，运用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测CPA、SKF96365和NiCl2对PASMC[Ca2＋]i的影响。结果含5μmol／L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育PASMC，10μmol／LCPA使PASMC[Ca2＋]i短暂小幅升高，恢复细胞外Ca2＋至2．5mmol／L后，10μmol／LCPA使PASMC[Ca2＋]i迅速显著升高；50μmol／LSKF96365和500μmol／LNiCl2均能明显抑制10μmol／LCPA引起的PASMC[Ca2＋]i升高，但对高钾（60mmol／LKCl）溶液引起的PASMC[Ca2＋]i升高无影响。结论CPA可致大鼠PASMC[Ca2＋]i升高，且能被SKF96365和NiCl2阻断，提示CPA可能诱发细胞外Ca2＋经钙池操纵性钙通道（SOCC）内流，SKF96365和NiCl2能选择性抑制SOCC活性使经SOCC的Ca2＋内流减少。
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糖尿病大鼠病程的不同时期主动脉平滑肌对苯肾上腺素的收缩反应
目的：研究随着糖尿病的发生发展，大鼠主动脉平滑肌对苯肾上腺素等激动剂收缩反应的变化及其可能机制.方法：用链尿菌素诱导糖尿病后，在第2、6、12周，取主动脉环进行实验观察.结果：苯肾上腺素的浓度依赖性收缩反应曲线，与对照相比：在第2周，低浓度时(0.01-0.03μmol·L-1)明显增加(P＜0.01)，大反应无明显变化；在第6周，各浓度点均显著增加，且大收缩反应增加约40％；然而，在第12周1)苯肾上腺素10μmol·L-1引起的大收缩反应趋向降低(P＜0.05)，2)在无Ca2+液，也较对照明显减小(P＜0.05)，3)在无Ca2+液，在尼非地平1μmol·L-1和苯肾上腺素10μmol·L-1存在下，复Ca2+引起的收缩在两组间的差异未见显著性，4)在正常Krebs'液，环匹阿尼酸10μmol·L-1引起的收缩反应较对照也显著减小(P＜0.001).结论：(1)在糖尿病的第2周，平滑肌a1-肾上腺素能受体的敏感性增加.(2)糖尿病大鼠主动脉平滑肌对苯肾上腺素收缩反应的异常变化，与通过电压依赖性钙通道的Ca2+内流大小、胞内功能性Ca2+池大小及其胞内Ca2+池耗竭后所引起的充电性内流变化密切相关.
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肌浆网钙泵的抑制不参与过氧化氢诱导的大鼠主动脉收缩
目的：研究肌浆网钙泵抑制是否参与H2O2诱导的大鼠主动脉收缩反应。方法：离体主动脉环张力实验比较H2O2及钙泵特异性抑制剂环匹阿尼酸(CPA)缩血管效应及其信号机制的差异。结果：H2O2和CPA均收缩去内皮主动脉环，但H2O2触发快速短暂相位相收缩，而CPA诱导缓慢持续的张力相收缩。在无钙液中，仅CPA 30 μmol/L而非H2O2 30μmol/L预处理取消苯肾上腺素10 μmol/L缩血管效应。Thap-sigargin 30 μmol/L诱导大收缩反应时，仅H2O2能使血管环进一步收缩。另外，P2受体拮抗剂suramin、RB-2(各100μmol/L)以及多种酶抑制剂包括PLC、PKC、PLA2、COX和蛋白质酪氨酸激酶均能抑制H2O2而非CPA诱导的缩血管效应，但2-APB50μmol/L对两者都有抑制作用。结论：肌浆网钙泵抑制不是H2O2收缩大鼠去内皮主动脉的机制。
