首页 > 文献资料
-
高糖对大鼠结肠平滑肌细胞表达内源性胰岛素样生长因子1的影响
目的:探讨高糖对大鼠结肠平滑肌细胞(SMCs)表达内源性胰岛素样生长因子I(IGF-1)的影响.方法:酶解法分离培养SD大鼠结肠SMCs,c-actin免疫荧光鉴定,然后将大鼠结肠SMCs随机给予葡萄糖不同浓度(5.5 mmol/L和25mmol/L)组及甘露醇对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)刺激,CCK8实验检测SMCs增殖情况；流式细胞术检测SMCs细胞周期;ELISA检测培养液上清中IGF-I的含量；Western blot、Real-time PCR法检测SMCs合成内源性IGF-1的表达变化.结果:高糖(25 mmol/L)抑制大鼠结肠SMCs的增殖,在24 h与正常糖浓度间差异大(0.494±0.003 vs 0.597±0.044,P0.05)；高糖使约90％的结肠SMCs停滞在G1期(90.850％±0.706％ vs 55.202％±3.807％,P＜0.05),进入S期的SMCs明显减少(3.622％±0.156％ vs30.780％±3.808％,P＜0.05)；高糖环境中,结肠SMCs合成分泌的IGF-I减少(208.000 ng/L±31.443 ng/L vs 265.750 ng/L±26.538 ng/L,P＜0.05),SMCs表达内源性的IGF-I mRNA和蛋白也均减少(2.037±0.196 vs 2.257±0.273;0.247±0.045 vs 0.906±0.103,P＜0.05).结论:高糖抑制大鼠结肠SMCs增殖,使SMCs内源性IGF-1表达减少.
-
大鼠结肠平滑肌细胞分离及电生理功能鉴定
目的 建立大鼠结肠平滑肌细胞分离技术,评价单个结肠平滑肌细胞质量和电生理特征.方法 通过改良Bitar法建立大鼠结肠平滑肌细胞的分离方法,全细胞膜片钳技术记录结肠平滑肌细胞钙电流,证实结肠平滑肌细胞的电生理特性.结果 分离的大鼠平滑肌细胞呈梭形,横纹清晰,遮光性较强,长度各异.全细胞膜片钳记录细胞膜钙电流,证实所分离的细胞具有典型的钙电流特征.结论 Bitar法经改良后可以成功获得适合电生理实验需要的单个大鼠结肠平滑肌细胞,且易于操作,重现性好.
-
大鼠消化道平滑肌细胞KATP通道的牵张敏感性
目的 探讨大鼠结肠平滑肌细胞上是否存在ATP敏感K+通道(ATP-sensitive potassium channel,KATP)及其牵张敏感性.方法 用RT-PCR方法检测SD大鼠结肠平滑肌组织KATP mRNA的表达;联合应用单通道膜片钳技术和压力钳技术,采用inside-out模式记录大鼠结肠平滑肌细胞上KATP通道的电活动.结果 在大鼠结肠平滑肌组织中可检测出较高水平的KATPmRNA的表达;用inside-out模式在大鼠结肠平滑肌上可记录到KATP通道的电活动,该通道在膜电位钳制电压为+60 mV时电导值为(44.5±1.5)pS.KATP通道特异性阻断剂--glibenclamide能抑制该通道的活动.且该KATP通道在负压刺激下开放概率增加.结论 大鼠结肠平滑肌细胞上分布有KATP通道,该KATP通道对牵张刺激敏感.
-
小檗碱对血管紧张素Ⅱ诱导豚鼠结肠平滑肌细胞增殖的影响
目的 观察小檗碱对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的培养豚鼠结肠平滑肌细胞(SMC)增殖的影响.方法 组织贴块法培养的豚鼠结肠平滑肌细胞随机分成7组:对照组,模型组,小檗碱组(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L),硝苯地平组和溶剂组.分别测定MTT(四甲基偶氮唑盐微量酶)吸收数值和细胞周期中各期细胞构成比.结果 AngⅡ(0.1μmol/L)作用24h能使MTT吸收数值明显增加,并使SMC的C0/G1期细胞减少,细胞增殖指数增大.与AngⅡ组相比,AngⅡ加小檗碱(10μmol/L)组,AngⅡ加硝苯地平(10μmol/L),活细胞数减少,G0/G1期的细胞构成比增加,细胞增殖指数减少.结论 Ang Ⅱ对SMC有促增殖作用,能被小檗碱所拮抗.
-
胰岛素样生长因子-1对大鼠结肠平滑肌细胞增殖、凋亡及MAPK通路的影响
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠结肠平滑肌细胞(SMCs)增殖、凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的影响.方法 利用酶解法分离培养Sprague-Dawley大鼠结肠SMCs,进行免疫组化染色鉴定后,将其分为对照组、IGF-1组和IGF-1+ PD98059[细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂]组,分别采用噻唑蓝(MTT)法检测SMCs增殖,流式细胞术AnnexinV-FITC/PI检测SMCs凋亡,Western印迹检测磷酸化ERK、ERK、磷酸化p38MAPK、p38MAPK和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(JNK)、JNK的表达.结果 分离培养的细胞经免疫组化鉴定为结肠SMCs,IGF-1组较对照组细胞增殖增强[(1.786 ±0.271)比(0.998±0.057),P＜0.01],凋亡率降低[(2.59±0.28)％比(20.68±2.48)％,P＜0.01],磷酸化ERK表达增强,磷酸化ERK/ERK比值升高[(42.71±3.74)％比(23.88±2.52％),P均＜0.01]；磷酸化p38MAPK、p38MAPK、磷酸化JNK、JNK表达无差异(P均＞0.05).IGF-1+ PD98059组较对照组细胞增殖下降[(0.154±0.021)比(0.998±0.057),P＜0.01],凋亡率升高[(84.31±7.54)％比(20.68±2.48)％,P＜0.01],磷酸化ERK表达减弱,磷酸化ERK/ERK比值降低[(10.47±1.22)％比(23.88±2.52)％,P均＜0.01].结论 IGF-1可能通过激活结肠SMCs MAPK通路中的ERK途径,促进细胞增殖,抑制凋亡,可能与p38MAPK途径和JNK途径无关.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 结肠平滑肌细胞 细胞凋亡 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
防风对大鼠和小鼠胃肠运动的抑制作用及机制研究
目的 观察防风(RS)对大小鼠胃肠运动的抑制作用并探讨其机制.方法 采用苯酚红测定法观察RS对小鼠胃肠运动的影响;制备大鼠结肠平滑肌肌条并放置在浴槽中,滴加RS及其他试剂并记录肌条的收缩曲线加以分析;分离并培养大鼠结肠平滑肌细胞,探针孵育后,不同缓冲液条件下测定NS及RS处理前后细胞的荧光值并加以分析.结果 RS各组对小鼠小肠推进和胃排空均有抑制作用;RS各组均抑制离体大鼠结肠平滑肌肌条收缩,抑制Ach引起的肌条收缩.RS剂量与峰高和同线下面积有量效关系.不同缓冲液对RS处理后的荧光值和抑制率有显著性差异.结论 防风可抑制小鼠小肠推进及胃排空,抑制离体大鼠结肠平滑肌收缩,机制与肾上腺素能α受体及M胆碱受体有关,与阿片受体和β受体无关;防风可降低细胞内游离钙离子浓度,其机制与抑制细胞外钙离子内流有关,与抑制细胞内钙离子释放无关.
-
抑郁引起大鼠结肠动力学改变导致肠易激综合征的离子通道机制
目的探讨抑郁引起大鼠结肠动力学改变导致 IBS 的离子通道机制。方法将 SPF级成年雄性 SD 大鼠分为对照组和抑郁组，各15只。抑郁模型制备采用慢性温和不可预知应激刺激方式，28 d 后经旷场实验和液体消耗实验（FCT ）确定抑郁模型成功。根据临床表现、粪便性状和数量确定胃肠道反应，计算腹壁回撤反射阈值，评估结直肠扩张的敏感性变化，确定 IBS 发生率。酶解法分离单个结肠平滑肌细胞，全细胞膜片钳技术记录 ICa‐L 改变及其动力学特征变化。两两比较采用 t 检验，相关性分析采用 Pearson 法。结果与对照组比较，抑郁组大鼠体质量、旷场实验和 FCT 各测试值均显著降低。抑郁组大鼠排便颗粒数及其含水量明显增加，容量阈值显著降低，与旷场实验和 FCT 呈显著负相关（r＝－0．89、0．91，P均＜0．01），IBS 发生率为14／15。与对照组比较，抑郁组大鼠结肠平滑肌细胞膜上 ICa‐L 明显增大，对照组 ICa‐L 为（－21．31±4．79） pA ，抑郁组 ICa‐L 为（－33．52±4．45） pA ，且与抑郁大鼠排便颗粒数及其含水量呈显著正相关（r ＝0．91、0．91， P 均＜0．01）。对照组电流电压特性曲线（I‐V曲线）处在中部，抑郁组处在底部。抑郁组 L‐型钙通道激活曲线显著左移，大半激活电压由对照组的（－7．96±5．95） mV 减小为（－14．81±3．33） mV ；失活恢复电流明显增快，大半失活恢复时间由对照组的（393．28±41．79） ms 缩短为（163．29±27．34） ms ，提前了58．48％。结论抑郁可引起大鼠胃肠道出现明显 IBS ，其发生机制可能是抑郁引起结肠平滑肌细胞膜上 ICa‐L 异常增加，激活离子通道提前开放，失活恢复时间增快，使 L‐型钙通道发生电重构。
关键词： 抑郁 结肠平滑肌细胞 L-型钙电流/动力学 肠易激综合征 电重构 -
小檗碱对豚鼠结肠平滑肌细胞内游离钙浓度的影响
采用Ca2+荧光示踪剂Fura 2-AM和双波长荧光分光光度法, 观察小檗碱(berberine, Ber)对酶法分离的豚鼠结肠平滑肌细胞内游离钙([Ca2+]i)的影响并探讨其机制.在含1.5 mmol/L CaCl2的HEPES-Ringer缓冲液中, 豚鼠结肠平滑肌细胞[Ca2+]i为108±9.4 nmol/L (n=7), Ber对静息[Ca2+]i无明显影响, Ber呈浓度依赖性抑制, 60 mmol/L KCl引起的[Ca2+]i增高, IC50值为34.09 μmol/L.在含1.5 mmol/L Ca2+和无Ca2+的缓冲液中, 30、100 μmol/L Ber均显著抑制10 μmol/L ACh所诱发的[Ca2+]i的增高, 且有浓度依赖性; 同样Ber对环匹阿尼酸(CPA)所致的[Ca2+]i增高也有浓度依赖性抑制作用, 有钙和无钙条件下IC50分别为37.97 μmol/L和49.70 μmol/L.结果提示, Ber对结肠平滑肌细胞外Ca2+内流和细胞内钙释放均有抑制作用.
-
酶消化法分离培养糖尿病大鼠结肠平滑肌细胞
目的 探讨糖尿病(DM)大鼠结肠平滑肌细胞(SMC)的培养方法.方法 建立DM大鼠模型,分离结肠,用酶消化法体外培养正常及DM大鼠结肠SMC,α-肌动蛋白免疫荧光鉴定.结果 造模后大鼠体重(165±16.8)g,较正常组(286±14.5)g明显减轻(P＜0.01);血糖(25.4±3.4)mmol/L,明显高于正常组(4.3±0.8)mmol/L(P＜0.01).正常结肠SMC培养7 d左右即可融合成片、相互交叉成多层,进行传代;DM大鼠结肠SMC需12～14 d融合成片,进行传代;传代后正常结肠SMC需3～4 d即可进行下一次传代,而糖尿病结肠SMC则需5 d.α-肌动蛋白免疫组化染色鉴 定均为SMC.结论 DM大鼠结肠SMC增殖速度比正常SMC慢,培养条件也较正常SMC更严格,形态学上与正常SMC相似.
-
玉烛散对血虚型慢传输型便秘小鼠结肠平滑肌细胞内Ca2+浓度及收缩的影响
目的:观察玉烛散对血虚型慢传输型便秘小鼠结肠平滑肌细胞胞内游离Ca2+浓度及收缩作用的影响.方法:建立小鼠血虚型慢传输型便秘模型,制备不同浓度的玉烛散制剂,用莫沙必利做阳性对照,同时设置空白对照组.观察其对小鼠结肠平滑肌细胞胞内游离Ca2+浓度及收缩的影响.结果:玉烛散中剂量组、玉烛散高剂量组和莫沙必利组在加入含药血清后,平滑肌细胞内Ca2+浓度瞬时升高,30 s左右达到峰值,然后呈缓慢下降趋势,持续至600 s,与同组加药前Ca2+浓度相比差异具有统计学意义(P＜0.05);莫沙必利组、玉烛散中剂量组、玉烛散高剂量组平滑肌细胞收缩率分别为(4.64±1.23)％、(4.86±1.47)％、(4.67±1.73)％,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:玉烛散能提高血虚型慢传输型便秘小鼠结肠平滑肌细胞内Ca2+浓度,中、高剂量的玉烛散可以促进结肠平滑肌的收缩.
-
马来酸曲美布汀对结肠平滑肌细胞钙激活钾通道的影响
目的 研究马来酸曲美布汀对豚鼠结肠平滑肌细胞膜钙激活钾通道的影响.方法 酶解法急性分离单个豚鼠结肠平滑肌细胞,利用膜片钳技术在全细胞模式下记录钙激活钾电流[IK(ca)],用含有IK(ca)特异激动剂NS1619的生理盐水灌流细胞,使结肠平滑肌细胞处于超极化状态,检测给马来酸曲美布汀浓度分别为1.19 μmol/L、5.95 μmol/L、11.91 μmol/L后的结肠平滑肌细胞膜IK(ca).结果 浓度为1.19 μmoL/L、5.95 μmol/L、11.91 μmol/L的马来酸曲美布汀可抑制豚鼠单个结肠平滑肌细胞膜IK(ca)(P均＜0.01),当阶跃刺激为+80 mv时,其分别为超极化状态组的(65.87±4.80)％、(48.02±2.39)％、(18.88±2.29)％(P均＜0.01).结论 马来酸曲美布汀能抑制豚鼠结肠平滑肌细胞钙激活钾通道的开放,使细胞兴奋性升高,且呈浓度依赖性,这可能是马来酸曲美布汀治疗肠易激综合征便秘症状的机制之一.
-
银杏叶提取物对豚鼠结肠平滑肌细胞的直接作用
目的:探讨银杏叶提取物(Extract of Ginkgo biloba,EGb)对豚鼠游离结肠平滑肌细胞的直接作用机制.方法:用含1g/L Ⅰ型胶原酶及0.1g/L大豆胰蛋白酶抑制剂的消化液,消化获得游离的豚鼠结肠平滑肌细胞,将不同浓度EGb加入细胞悬液中,用显微镜测微尺随机观察50个细胞长轴变化情况,计算用药前后细胞平均长度.如果:EGb对结肠平滑肌细胞具有舒张作用,在0.11～3.5g/L浓度范围内,EGb对结肠平滑肌细胞的作用呈剂量-效应关系,大反映浓度为1.75g/L,其舒张效应为12.79%(P＜0.05).EGb预先孵育1 min,可抑制乙酰胆碱(ACh)效应的44.13%(P＜0.01).腺苷酸环化酶激动剂Forskolin可增强EGb的舒张效应,与单独应用EGb组相比较,舒张百分数增加8.87%(P＜0.05).结论:EGb对豚鼠游离结肠平滑肌细胞具有直接作用,这种作用可能与cAMP信号传导通路相关.
-
不同浓度氢溴酸槟榔碱对结肠平滑肌细胞钙离子移动和收缩力的影响
[目的]观察不同浓度的氢溴酸槟榔碱(Ah)对结肠平滑肌细胞钙离子(Ca2+)移动的影响,以探讨其对平滑肌收缩力的作用.[方法]取培养大鼠结肠平滑肌细胞,以荧光指示剂Fluo-3/AM负载,通过激光共聚焦显微镜(LSCM)动态观察不同浓度Ah对培养的结肠平滑肌细胞Ca2+移动的作用.[结果]Ah在1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mol/L浓度刺激下可使结肠平滑肌细胞[Ca2+]i荧光强度(FI)逐渐升高(P＜0.05),而在未加药以及1×10-13、1×10-12、1×10-11 mol/L浓度刺激下对[Ca2+]i FI无影响(P＞0.05);在1×10-3 mol/L浓度刺激下细胞膜迅速发生破裂;应用阿托品预处理,则FI从4.28士1.51降至3.83士1.40(P＞0.05).[结论]Ah可使结肠平滑肌细胞内[Ca2+]i逐渐升高,阿托品可阻断Ah对平滑肌的收缩作用.
-
抑郁引起大鼠结肠动力学改变导致肠易激综合征的L-型钙电流的变化
目的:探讨抑郁引起大鼠结肠动力学改变导致肠易激综合征(IBS)后细胞膜上L-型钙电流(ICa-L)变化.方法:SPF级成年雄性SD大鼠分为正常对照组(对照组,n=15)和抑郁症模型组(抑郁组,n=15).抑郁模型制备方法是采用孤养加慢性温和不可预知性应激刺激方式进行,28 d后通过旷场试验(OFT)和液体消耗试验(FCT)确定抑郁模型成功.根据临床表现、生成的粪便性状和数量确定IBS发生率.酶解法分离单个结肠平滑肌细胞,全细胞膜片钳技术记录结肠平滑肌细胞膜上Ia-L及其电流-电压(I-Ⅴ)曲线变化.结果:与对照组比较,抑郁组大鼠出现体重增长减慢,OFT和FCT值显著降低(P均＜0.01),提示抑郁大鼠模型建立成功;抑郁组大鼠出现严重体质减弱,排便颗粒数及其含水量明显增高(P均＜0.01),与OFT和FCT值比较呈显著的负相关(r值均＞-0.89,P均＜0.01),胃肠道症状的发生率显著增高(P＜o.01),说明抑郁引起大鼠出现严重的IBS病症.在电压钳制方式下,与对照组比较,抑郁组大鼠结肠平滑肌细胞膜上Ia-L峰值显著增大,其Ⅰ-Ⅴ曲线明显下移到底部和向左偏移.当钳制电位为+10 mV时,抑郁组大鼠结肠平滑肌细胞Ia-L由对照组的(--21.31±4.79)pA增加为(33.52±4.45)pA(P＜0.01).与抑郁大鼠的排便颗粒数及其含水量进行比较,具有显著正相关(r均＞0.91,P均＜0.01).结论:抑郁能引起大鼠胃肠道出现明显的IBS病症,其发生机制可能是抑郁诱发了大鼠结肠平滑肌细胞膜上ICa-L增加出现电重构,造成结肠性动作电位失常促使肠动力学改变形成.
