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筋骨草总环烯醚萜对三阴性乳腺癌转移的抑制作用及其机制研究
目的 研究筋骨草总环烯醚萜对高转移三阴性乳腺癌细胞侵袭转移的作用及分子机制.方法 采用肿瘤细胞黏附血管内皮细胞实验、Transwell迁移和侵袭实验以及尾静脉注射诱导的实验性乳腺癌肺转移模型,检测细胞黏附、运动、侵袭和转移能力.Western blot法检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)相关蛋白和胞外信号调节激酶(ERK) 1/2丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白的表达.结果 筋骨草总环烯醚萜50～200mg· L-1对MDA-MB-231细胞的黏附、迁移和侵袭能力有明显的抑制作用.连续给予200 mg·kg-筋骨草总环烯醚萜3周能明显抑制荷瘤动物肺转移.进一步研究发现,筋骨草总环烯醚萜能显著降低p-ERKI/2蛋白表达;逆转乳腺癌细胞EMT,主要表现在上皮性标志物E-cadherin和ZO-1表达增加,间质性标志物vimentin表达降低.结论 筋骨草总环烯醚萜能有效地抑制高转移性乳腺癌细胞的侵袭和转移,作用机制可能与其调控ERK1/2 MAPK通路,逆转肿瘤细胞EMT有关.
关键词： 乳腺癌 筋骨草总环烯醚萜 肿瘤转移 丝裂原活化蛋白激酶通路 上皮间质转化 -
胰岛素样生长因子-1对大鼠结肠平滑肌细胞增殖、凋亡及MAPK通路的影响
目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠结肠平滑肌细胞(SMCs)增殖、凋亡及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的影响.方法 利用酶解法分离培养Sprague-Dawley大鼠结肠SMCs,进行免疫组化染色鉴定后,将其分为对照组、IGF-1组和IGF-1+ PD98059[细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂]组,分别采用噻唑蓝(MTT)法检测SMCs增殖,流式细胞术AnnexinV-FITC/PI检测SMCs凋亡,Western印迹检测磷酸化ERK、ERK、磷酸化p38MAPK、p38MAPK和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(JNK)、JNK的表达.结果 分离培养的细胞经免疫组化鉴定为结肠SMCs,IGF-1组较对照组细胞增殖增强[(1.786 ±0.271)比(0.998±0.057),P＜0.01],凋亡率降低[(2.59±0.28)％比(20.68±2.48)％,P＜0.01],磷酸化ERK表达增强,磷酸化ERK/ERK比值升高[(42.71±3.74)％比(23.88±2.52％),P均＜0.01]；磷酸化p38MAPK、p38MAPK、磷酸化JNK、JNK表达无差异(P均＞0.05).IGF-1+ PD98059组较对照组细胞增殖下降[(0.154±0.021)比(0.998±0.057),P＜0.01],凋亡率升高[(84.31±7.54)％比(20.68±2.48)％,P＜0.01],磷酸化ERK表达减弱,磷酸化ERK/ERK比值降低[(10.47±1.22)％比(23.88±2.52)％,P均＜0.01].结论 IGF-1可能通过激活结肠SMCs MAPK通路中的ERK途径,促进细胞增殖,抑制凋亡,可能与p38MAPK途径和JNK途径无关.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 结肠平滑肌细胞 细胞凋亡 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
钙敏感受体及其相关信号转导通路对细胞因子分泌的调控
本文对钙敏感受体（CaSR）的结构特点、信号转导、生理作用进行了概述。重点阐述了CaSR介导的相关信号转导通路对细胞因子分泌的调控机制，并对二者关系的研究前景进行了展望。
关键词： 钙敏感受体 细胞因子 核转录因子通路 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
选择性cAMP类似物对前列腺癌细胞生长的影响
目的 探讨8-氯-环磷酸腺苷(8-Cl-cAMP)及其代谢物8-氯-腺苷(8-Cl-adenosine)靶向蛋白激酶A RⅠα(PKA RⅠα)抑制PC3M肿瘤生长的作用.方法 采用MTT法检测PC3M细胞增殖;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测RⅠα、RⅡβ、Caspase-3、Bcl-2、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷酸化p38 MAPK表达.结果 8-Cl-cAMP和8-Cl-adenosine抑制PC3M细胞生长(P＜0.05),引起细胞凋亡(P＜0.05),下调RⅠα表达,上调RⅡβ表达,激活磷酸化p38 MAPK,抑制Caspase-3和Bcl-2表达.结论 8-Cl-cAMP及其代谢物8-Cl-adenosine靶向PKA RⅠα抑制PC3M肿瘤生长.其机制可能通过cAMP/PKA通路激活MAPK通路起作用.
关键词： 前列腺癌 环磷酸腺苷类似物 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
钙敏感受体在无镁细胞外液中的表达及其与丝裂原活化蛋白激酶通路的关系
目的 目前对癫痫机制中钙敏感受体(CaSR)的研究主要针对的是体内动物模型,以及单一细胞的体外培养模型.文中旨在探讨CaSR的表达情况及与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的关系. 方法 取wistar大鼠原代神经元与心肌细胞共同培养10d后,将神经元与心肌细胞共培养的细胞随机分为5组:对照组(不做任何处理)、无镁组(无镁细胞外液)、无镁+精胺组(无镁细胞外液+激动剂精胺)、无镁+ calhex231组(无镁细胞外液+抑制剂calhex231)、无镁+精胺+calhex231组(无镁细胞外液+精胺+calhex231).无镁细胞外液孵育共培养细胞引起神经元异常放电,制备癫痫模型.采用HE染色、透射电镜观察各组细胞的形态学变化,MTT检测各组细胞的存活率,Western blot检测共培养细胞中CaSR、抗磷酸化的细胞外信号调节激酶(P-ERK)、抗磷酸化的c-jun N-末端激酶(P-JNK)、P-P38及Bcl-2蛋白的表达. 结果 与无镁组比较,无镁+精胺组细胞水肿、破裂程度更严重,出现细胞核碎裂;无镁+ calhex231组细胞完整性较好.无镁+精胺+calhex231组细胞水肿、破裂,但较无镁+精胺组有改善.细胞存活率比较:无镁+精胺组[(61.08±15.44)％]、无镁+ calhex231组[(82.80±14.37)％]及无镁+精胺+calhex231组[(82.04±17.37)％]较对照组[(100.00±0.00)％]显著降低(P＜0.01);无镁+精胺组较无镁组[(88.88±9.85)％]显著降低(P＜0.01).无镁组CaSR蛋白量(0.73±0.19)高于对照组(0.45±0.12),低于无镁+精胺组(1.32±0.15)和无镁+精胺+calhex231组(1.19±0.12),差异有统计学意义(P＜0.01).无镁组Bcl-2、P-ERK蛋白表达量低于对照组,高于无镁+精胺组(P＜0.01).无镁组P-JNK、P-P38 MAPK蛋白量高于对照组,低于无镁+精胺组、无镁+精胺+calhex231组(P＜0.05).结论 无镁细胞外液能够引起神经元与心肌细胞损伤,提高CaSR的表达及参与MAPK信号通路,介导神经元与心肌细胞凋亡,且CaSR抑制剂能够缓解CaSR激动剂引起的细胞损伤.
关键词： 钙敏感受体 癫痫模型 神经元 心肌细胞 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
黄连素对人主动脉血管平滑肌细胞钙化的作用及其机制
目的 探讨黄连素影响人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)钙化的作用及机制.方法 利用糖基化终末产物(AGEs)建立HASMCs钙化模型,予以不同浓度(10、25、50μmol/L)的黄连素干预.用冯库萨、茜素红染色观察细胞钙化程度,采用细胞内钙含量试剂盒测定钙含量,Western blotting检测各组细胞骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)及骨形成蛋白2(BMP2)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38蛋白表达.结果 与对照组比较,AGEs组钙化程度、细胞内钙含量升高(P均<0.05),不同浓度黄连素干预HASMCs钙含量呈浓度依赖性减少(P均<0.05);AGEs组OPG、BMP2、OPN、ERK、p38蛋白表达量较对照组明显增高(P均<0.05),不同浓度黄连素呈浓度依赖性地减少HASMCs的OPG、BMP2、OPN、ERK、p38蛋白表达量(P均<0.05).结论 黄连素可抑制AGEs诱导的HASMCs钙化,其机制可能与下调ERK、p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路导致OPG、OPN、BMP2表达减少有关.
关键词： 黄连素 人主动脉血管平滑肌细胞 血管钙化 糖基化终末产物 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
IL-1α对猪小梁细胞ELAM-1、 MAPK通路蛋白表达的影响
目的 研究猪重组白细胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)对体外培养的猪眼小粱细胞内皮白细胞黏附因子-1(endothelial leukocyte adhesion molecule-1,ELAM-1)及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路蛋白表达的影响.方法 传第3代的猪眼小梁细胞血清饥饿培养24h后,利用IL-1α进行干预.免疫组织化学分析干预后猪眼小梁细胞E-LAM-1的表达；采用Western blotting检测干预后细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、c-JunN端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38通路磷酸化水平的变化.结果 正常猪眼小梁细胞不表达ELAM-1,经IL-1α刺激后小梁细胞磷酸化的ELAM-1、ERK1/2、JNK和P38的表达显著增加；MAPK通路所包括的ERK、JNK和p38通路均发生活化,其中对JNK通路的影响大.结论 外源性IL-1α对猪眼小梁细胞MAPK信号转导通路可产生影响,IL-1α可诱导猪眼小梁细胞表达ELAM-1.
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p38抑制剂对缺血再灌注大鼠心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶通路的影响
目的 探讨p38抑制剂对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响.方法 将44只大鼠随机分为4组:对照组(9只)、缺血组(15只)、缺血再灌注组(10只)和干预组(10只).对照组大鼠只暴露心脏,缺血组大鼠制备心肌缺血模型,缺血再灌注组大鼠制备心肌缺血再灌注模型,干预组大鼠在左冠状动脉前降支结扎前30 min注射p38抑制剂SB20358(100 μg· kg-1),其余操作均与缺血再灌注组一致.观察各组大鼠心肌组织形态学变化及心肌组织中p38、c-Jun氨基端激酶(JNK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)水平的变化.结果 对照组大鼠心肌组织中未检测到p38、ERK1/2和JNK蛋白.缺血组缺血60、90 min时大鼠心肌组织中p38蛋白水平显著高于缺血30 min时,差异均有统计学意义(P＜0.05);各个时间点,干预组大鼠心肌组织中p38蛋白水平显著低于缺血组和缺血再灌注组,差异均有统计学意义(P＜0.05).随着再灌注时间的延长,缺血再灌注组和干预组大鼠心肌组织中p38蛋白水平逐渐降低,但差异均无统计学意义(P＞0.05).随着缺血和再灌注时间延长,缺血组大鼠心肌组织中ERK1/2和JNK水平略有升高,缺血再灌注组和干预组大鼠心肌组织中ERK1/2和JNK水平略有降低,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 MAPK中p38参与心肌缺血再灌注损伤,但JNK和ERK1/2的作用不显著.
关键词： p38抑制剂 心肌缺血再灌注 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
TLR4受体/MAPK信号通路在心源性恶病质发生机制中的作用研究进展
心源性恶病质是一种发生在慢性心力衰竭终末期的严重并发症,以骨骼、肌肉和脂肪组织减少为特征.国内外的研究证实,Toll样受体4(TLR4)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路与心力衰竭的发生及演变有着密切的联系,并直接或间接通过细胞因子的激活、神经激素分泌的调控及胰岛素抵抗等参与心源性恶病质的发生.本文就TLR4/MAPK信号通路在心源性恶病质发生机制中的作用予以综述,以期对今后心源性恶病质的临床治疗提供一定的理论依据.
关键词： 心源性恶病质 Toll样受体4 丝裂原活化蛋白激酶通路 肿瘤坏死因子α -
线粒体细胞色素B降低通过丝裂原活化蛋白激酶通路对胃癌发展的影响
目的 探讨细胞色素B在胃癌发生发展中的作用.方法 收集经病理证实为胃癌的手术患者12例胃癌组织,其中淋巴结转移标本6例,无淋巴结转移标本6例.应用Western blot检测两组胃癌组织凋亡相关因子B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)的表达水平,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白表达水平.结果 与无转移组比较,有转移的胃癌组织中促凋亡因子bax表达降低(有转移组∶无转移组=0.55∶1.00,P＜0.05),而抑制凋亡因子bcl-2表达增加(有转移组∶无转移组=1.32∶1.00,P＜0.05),细胞凋亡水平下降(活化的Caspase-3表达有转移组∶无转移组=2.86∶3.35,P＜0.05);有转移的胃癌组织MAPK通路活化水平明显较无转移组降低(P＜0.05).结论 胃癌转移与线粒体细胞色素B表达水平下降,从而抑制MAPK通路磷酸化,导致细胞凋亡减少有关.
关键词： 胃癌 线粒体细胞色素B 凋亡 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
RIPK4低表达影响骨肉瘤细胞增殖与丝裂原活化蛋白激酶信号通路的研究
目的 探讨受体相互作用蛋白激酶4 (receptor interacting protein kinase 4,RIPK4)低表达抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路异常的相关性研究.方法脂质体转染法将RIPK4-siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞;四甲基偶氮唑盐(methylt hiazolyldiphenyl-tet razolium bromide,MTT)实验检测骨肉瘤MG-63细胞增殖情况;免疫荧光实验检测RIPK4 siRNA低表达对MAPK表达分布的影响;蛋白质印迹实验检测骨肉瘤MG-63细胞中RIPK4-siRNA对MAPK信号通路的影响.结果 MTT结果表明,和空白组比较,RIPK4-siRNA转染组48 h时细胞生存率明显较低(P＜0.05).免疫荧光实验显示,RIPK4低表达后,RIPK4-siRNA转染组细胞中,MAPK主要分布在细胞核,且总体表达减少.蛋白质免疫印迹法结果显示,RIPK4-siRNA转染MG-63细胞后,RIPK4蛋白水平明显下调,同时,MAPK在细胞胞浆的表达减少,而在细胞胞核的表达分布增多.灰度值分析表明,和空白组比较,RIPK4-siRNA转染组MAPK下游的因子细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase,ERK)、p38 MAPK、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)、核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的灰度值明显降低(P＜0.05).结论 在MG-63细胞中,RIPK4的低表达影响MAPK激酶的分布及表达,RIPK4的低表达对MG-63细胞增殖抑制可能和MAPK/ERK/p38/JNK/NF-κB信号通路异常有关.
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竹节香附素A对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬的影响
目的 探讨竹节香附素A(RA)对胃癌SGC-7901细胞的影响及其分子机制.方法 MTT观察RA对胃癌细胞SGC-7901生长抑制;流式细胞术检测RA对细胞凋亡的影响;透射电镜观察RA诱导自噬;Western blot检测凋亡、自噬相关蛋白表达.结果 RA能显著抑制SGC-7901细胞生长;RA能诱导SGC-7901细胞凋亡和自噬;Western blot检测发现,随着给药剂量增加,LC3-Ⅰ逐渐向LC3-Ⅱ翻转,PARP及bcl-2表达递减,bax、p-p38表达递增.结论 RA能有效抑制SGC-7901细胞生长,其机制可能是诱导细胞凋亡和自噬,RA诱导凋亡及自噬可能是通过激活MAPK通路实现的.
关键词： 胃癌 竹节香附素A 凋亡 自噬 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
丝裂原活化蛋白激酶信号对高氧性肺损伤水通道蛋白5的调控机制
目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)信号通路三亚族ERK、p38、JNK对高氧性肺损伤异常表达水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)的分子调控机制.方法:制备高氧肺损伤动物模型,通过不同信号途径抑制剂干预.随机将Wistar实验大鼠分为8组(n=6):空气对照组(A)、高氧组(H)、高氧+ERK抑制剂PD98059组(H+PD)、高氧+p38抑制剂SB203580组(H+SB)、高氧+JNK抑制剂SP600125组(H+SP)及空气+抑制剂对照组(A+PD、A+SB、A+SP),采用蛋白质免疫印迹法检测AQP5蛋白表达,real-time PCR检测AQP5 mRNA.结果:Western blot结果显示:A组AQP5蛋白呈较高表达,H组AQP5表达减弱(P=0.000),而H+SB、H+SP组较H组AQP5蛋白表达明显升高(P=0.000),二者中尤以H+SB组其蛋白上调更明显,H+PD组与H组比较无统计学性差异(P=-0.737);real-time PCR结果显示:H组AQP5 mRNA表达较空气对照组降低(P=0.000),H+SB、H+SP与H组比较AQP5 mRNA表达升高(P=0.000),二者中尤以H+SB组其mRNA上调更明显,但二者与A组比较,差异仍有统计学意义(P=0.000),而H+PD干预组与H组比较,未见肺组织AQP5 mRNA表达的明显变化(P=0.796).A组与A+抑制剂对照组(A+PD、A+SB、A+SP)在AQP5蛋白及mRNA表达上均无明显差异.结论:抑制剂SB203580及SP600125在高氧暴露后能增加AQP5蛋白和mRNA表达,因而推测MAPKs通路中p38、JNK可能参与了调控高氧肺损伤AQP5基因表达的下调过程.
关键词： 急性肺损伤 高氧 水通道蛋白5 丝裂原活化蛋白激酶通路 -
肾素/肾素前体受体在高血压中的进展
肾素/肾素前体受体是肾素-血管紧张素系统的重要成员之一,能够与肾素及肾素前体结合,增强血管紧张素转化酶的活性进而影响心血管系统,同时可以诱导非肾素-血管紧张素系统细胞内的信号转导,如丝裂原活化蛋白激酶通路、经典的Wnt通路等,诱发动脉硬化、高血压等疾病.近年来,诸多研究表明肾素/肾素前体受体在成人和胚胎生长发育、心血管疾病及肾脏等疾病的发生中都具有重要的作用.现对肾素/肾素前体受体及其在心血管系统的作用进行综述.
关键词： 肾素/肾素前体受体 丝裂原活化蛋白激酶通路 V-ATP酶 高血压 -
SDF－1α通过 p38MAPK－HIF－1α通路加强卵巢癌细胞转移的机制探讨
目的：明确缺氧诱导因子－lα（ HIF－1α）在基质细胞衍生因子－1α（ SDF－1α）调控的卵巢癌细胞迁移中的作用及其机制。方法采用免疫组化分析HIF－1α在卵巢癌组织中的表达水平；将HIF－1αsiRNA转染SKOV3卵巢癌细胞，分别用SDF－1α和SDF－1α＋SB203580处理，用RT－PCR及western blotting分析HIF－1α、p38MAPK的表达水平。结果免疫组化分析表明，HIF－1α在卵巢癌组织中高表达，同时SDF－1α可明显诱导HIF－1α的mRNA及蛋白水平的表达；当用HIF－1αsiRNA转染后，细胞中HIF－1α的表达水平明显下降。当用通路抑制剂SB203580处理后，SDF－1α诱导的HIF－1α水平明显降低。结论 SDF－1α可通过p38MAPK－HIF－1α通路来调控卵巢癌细胞的迁移。因此，该研究将为卵巢癌的防治提供新的研究方向。
