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大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞前列腺素E2表达的影响
目的 研究大麻素WIN55,212-2对体外培养的牛眼小梁细胞前列腺素E2(PGE2)表达的影响,从而探讨其降眼压机制.方法 采用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代培养,取传3代的细胞运用酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同浓度大麻素WIN55,212-2作用后细胞上清液中PGE2水平的变化;运用RT-PCR方法检测不同浓度大麻素WIN55,212-2作用后PGE2 mRNA在小梁细胞内的表达水平.结果 细胞上清液中的PGE2水平与细胞内PGE2 mRNA水平随大麻素浓度变化呈剂量依赖性升高.结论 一定剂量的大麻素可以促进小梁细胞分泌PGE2,从而达到降低眼压的目的.
关键词： 大麻素WIN55 212-2 小梁细胞 前列腺素E2 前列腺素E2mRNA -
肾上腺素抑制培养牛眼小梁细胞AQP1表达
目的测定肾上腺素对体外培养牛眼小梁细胞水通道蛋白-1(aquaporin1,AQP1)表达的影响,探讨肾上腺素降低眼压的机制.方法将传三代的牛眼小梁细胞随机分为对照和肾上腺素处理组.将不同浓度的肾上腺素(10-4、10-5和10-6mol/L)分别加入培养液持续培养14天后,免疫细胞化学方法检测牛眼小梁细胞AQP1表达水平,计算机图像分析软件测量细胞表面积.结果发现经不同浓度肾上腺素处理后的小梁细胞AQP1表达量吸光度值A和细胞表面积显著低于对照组(P＜0.05).结论肾上腺素对牛眼小梁细胞AQP1表达的抑制可能参与了肾上腺素降眼压作用.
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青光眼患者小梁网细胞线粒体的电镜观察
目的 原发性开角型青光眼(POAG)是一种发病隐匿的不可逆性致盲性眼病,发病机制有待进一步探讨.本研究通过电镜检测方法从小梁细胞线粒体形态改变及细胞连接的异常认识小梁细胞退行性改变,探讨POAG 的发病机理.方法 原代培养POAG 小梁网(GTM)与正常人的小梁网(NTM)细胞,电镜下对比观察小梁细胞线粒体和细胞连接的形态结构.结果 透射电镜可见培养的NTM 细胞胞质内线粒体数量较多,结构完整,嵴的数目和形态正常,细胞连接以缝隙连接为主,结构完整,并可见丰富的粗面内质网,偶可见高尔基体等细胞器;GTM 细胞线粒体数目少,形状多为空泡状,嵴多不可见,难以找到完整的细胞连接结构,其它细胞器明显减少.结论 (1)POAG 患者小梁细胞的线粒体发生了病理学形态的退行性改变;(2)POAG 患者小梁细胞的细胞连接连接出现了病理学形态的异常.提出POAG 患者小梁细胞线粒体的形态与功能异常以及小梁细胞的细胞连接异常可能导致小梁网功能异常,推测其与眼压升高及POAG发病密切相关.
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肝细胞生长因子在眼部的研究进展
肝细胞生长因子(HGF)是一种间质来源的多效生长因子,具有强大的促分裂、组织形成、诱发上皮细胞迁移、侵袭以及诱发血管生成的作用.其受体c-Met在多种组织和细胞中表达.HGF通过与其特异性受体c-Met结合引起一系列信号转导蛋白的酶促反应,促发相应生物学效应.HGF在多种组织器官的发生、发展、损伤修复、保护和调节内皮细胞功能、诱发血管生成以及恶性肿瘤的发展、转移中起着不可忽视的作用.在眼部,HGF是一种重要的细胞生长和分化的调节剂,它可刺激角膜上皮细胞和内皮细胞、虹膜和视网膜色素上皮细胞、晶状体上皮细胞、小梁细胞的生长和移行.房水中的HGF在角膜损伤修复、维持角膜内皮完整性、调节晶状体上皮细胞功能等方面起着重要作用.HGF及其受体在维持小梁网正常功能中起着决定性作用且可能与原发性开角型青光眼(POAG)的发病机制有关,在某些病理条件下,HGF可能诱发视网膜、虹膜血管生成对增生性视网膜病变的发生、发展起着重要作用.
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小梁细胞收缩特性研究进展
小梁细胞在原发性开角型青光眼发病机制的研究中日益受到重视，但其具体机制尚未明确。越来越多的资料证实小梁细胞具有平滑肌样收缩特性，主动参与房水流出及眼内压的调节。本文就其收缩特性的研究进展作一综述，以期为探索青光眼新的有效治疗方法提供参考。
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地塞米松对牛眼小梁水通道蛋白表达的影响
目的观察地塞米松对牛眼小梁细胞的损伤使其水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)表达的影响.方法体外培养牛眼小梁细胞,取第4代细胞鉴定后用于实验.应用浓度为5,25,50,250 μg/L地塞米松的培养液培养7天,通过Western Blot方法检测培养的牛眼小梁细胞在不同浓度地塞米松作用下AQP-1的蛋白表达水平.结果牛眼小梁细胞可见AQP-1蛋白条带表达,未经地塞米松作用的AQP-1蛋白条带表达灰度值为102.87±11.73.在浓度为5,25,50,250 μg/L地塞米松的培养液培养7天后AQP-1蛋白条带表达灰度值分别为111.64±13.32,115.31±9.41,121.39±9.81,129.42±13.52.当地塞米松浓度≥25 μg/L时,AQP-1表达出现抑制作用(P＜0.05).结论地塞米松使培养的牛眼小梁细胞AQP-1的表达减少,这可能是皮质类固醇性青光眼房水流出阻力增加的原因之一.
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葛根素对牛小梁细胞增殖的影响
目的观察葛根素对体外培养牛小梁细胞增殖的影响,探讨葛根素降低原发性开角型青光眼眼内压的作用机制.方法以新鲜牛眼球为材料,分离并培养小梁细胞.用MTT法研究不同浓度的葛根素对小梁细胞增殖的影响.结果各种浓度的葛根素对培养细胞形态无影响,各培养时期细胞数目未见明显减少.OD值仅有轻微下降(P>0.05).结论葛根素对牛小梁细胞增殖无明显促进或抑制作用,各浓度的葛根素对培养细胞无毒副作用.
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活血明目汤对兔实验性高眼压小梁细胞影响的研究
目的 探讨活血明目汤对实验性高眼压兔眼微循环、小梁细胞及细胞外基质的影响.方法 32只实验性高眼压兔随机分为活血明目汤治疗组和高眼压阴性对照组.治疗组以活血明目汤灌胃,对照组以生理盐水灌胃,检测球结膜微循环状况和并在光学显微镜和透射电子显微镜下观察小梁细胞的病理改变.结果 治疗组给药第10天球结膜微循环明显改善,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01).治疗组的小梁细胞变性较轻,细胞外基质无明显堆积.结论 活血明目汤可以明显改善兔实验性高眼所致微循环障碍,防止小梁细胞变性、坏死和纤维增生.
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转化生长因子-β2调节人眼小梁细胞表达CD44s的研究
原发性开角型青光眼的主要特征是眼压升高及视神经损害,其发病机制迄今尚未完全明确.小梁网是房水排出受阻的主要部位,小梁细胞生理功能和病理变化直接影响房水循环.
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眼科细胞培养的特殊技术
目前已建立了完整的人类眼部组织细胞分离培养技术,生长良好的有视网膜色素上皮细胞(retinal pigmentepithelium,RPE)、虹膜色素上皮细胞、睫状体色素上皮细胞、葡萄膜黑素细胞、各部位成纤维细胞(巩膜、眼球筋膜及角膜)、血管内皮细胞、小梁细胞和部分肌细胞等.
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地塞米松抑制培养牛眼小梁细胞AQP1表达
目的 测定地塞米松对体外培养牛眼小梁细胞水通道蛋白-1 ( aquaporin1,AQP1 ) 表达的影响,探讨糖皮质激素性青光眼房水引流阻力的形成机制.方法 将传3代的牛眼小梁细胞用数字表法随机分为对照和地塞米松处理组.将不同浓度的地塞米松(10-5、10-6、10-7 mol/L)分别加入培养液持续培养14 d,免疫细胞化学方法检测小梁细胞AQP1表达水平,计算机图像分析软件测量细胞表面积.结果 经不同浓度地塞米松处理后的小梁细胞AQP1表达量吸光度值A显著低于对照组(均P=0.000).10-7 mol/L地塞米松作用下细胞表面积显著大于对照组,而10-6 mol/L和10-5 mol/L地塞米松作用下细胞表面积显著低于对照组(均P=0.000).结论 地塞米松抑制牛眼小梁细胞AQP1表达,可能参与了糖皮质激素性青光眼的发生.
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地塞米松对兔眼水通道蛋白-1表达的影响及其与眼压的关系
目的：研究地塞米松（DEX）对兔眼小梁内皮细胞（TM）和睫状体无色素上皮（NPCE）细胞水通道蛋白-1（AQP1）表达的影响。方法建立兔皮质类固醇性高眼压模型，用免疫组化和免疫荧光方法检测高眼压组与正常对照组AQP1表达水平的差异。结果实验组兔眼NPCE的AQP1表达比正常对照组增强（P＜0.05），而在TM细胞则减弱（P＜0.05）。结论地塞米松能使兔眼眼压升高，可能是通过抑制AQP1在TM的表达，并使NPCE的AQP1表达上调，这可能是皮质类固醇性青光眼的病理机制之一。
关键词： 地塞米松 睫状体无色素上皮细胞 小梁细胞 水通道蛋白-1 青光眼 -
氧化应激对猪眼小梁细胞内皮细胞白细胞黏附分子-1表达的影响
目的 研究氧化应激对猪眼小梁细胞内皮细胞白细胞黏附分子-1(ELAM-1)表达的影响,探讨氧化应激诱导的ELAM-1的表达与白细胞介素1α(IL-1α)的关系.方法 原代培养的猪眼小梁细胞经过血清饥饿培养后,用不同浓度白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1rα)处理或直接用1 mmol/L的H2O2刺激后,用免疫细胞化学法检测小梁细胞ELAM-1的表达.结果 H2O2处理的原代培养的猪眼小梁细胞中ELAM-1表达呈阳性,高浓度(180μg/ml和600 μg/ml)拮抗剂IL-1rα预处理的猪眼小梁细胞ELAM-1表达呈阴性.结论 氧化应激可诱导猪眼小梁细胞表达ELAM-1.在体外细胞培养体系,高浓度的IL-1rα可拮抗氧化应激对ELAM-1表达的作用.
关键词： 氧化应激 小梁细胞 内皮细胞白细胞黏附分子-1 -
大麻素WIN55 212-2对牛眼小梁细胞内钙离子及组织型转谷氨酰胺酶表达的影响
青光眼主要与病理性眼压升高有关.眼压升高的重要发病机制是小梁细胞形态和功能发生改变以及细胞外基质增多致房水流出阻力增加.研究表明小梁细胞有平滑肌样功能,而钙离子使小梁细胞收缩,增加房水流出阻力[1].组织型转谷氨酰胺酶(tTG)是一种钙依赖性转移酶,具有催化蛋白质交联和结合的功能,且阻碍蛋白酶水解,促进其在细胞外堆积,增加房水流出阻力[2].
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细胞凋亡与原发性青光眼
目的:探讨细胞凋亡在青光眼发病机制研究中的新进展.方法:阅读国内外有关文献并进行综述.结果与结论:在原发性青光眼发病机制的研究中细胞凋亡的理论从一个新的角度对其进行考虑.青光眼视网膜神经节细胞及小梁细胞的凋亡在青光眼的发病机制、诊断治疗中发挥重要作用.
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青光眼病人小梁细胞体外培养、冻存与复苏
目的:探索青光眼病人小梁细胞体外培养和保存方法.方法:从小梁切除术取得的巩膜内板层,应用组织培养方法进行病人小梁细胞体外培养,完成鉴定工作;并将第四代的青光眼病人小梁细胞冻存,冻存2周、1个月、2个月、半年后,将细胞复苏,观察复苏后小梁细胞的生长情况.结果:青光眼病人小梁组织培养出的细胞经鉴定为小梁细胞,培养的小梁细胞经冷冻保存,复苏率超过80%.结论:青光眼病人小梁细胞体外培养及冻存复苏成功,使小梁细胞培养体系更加完善,为青光眼发病机理研究,筛选青光眼发病的相关基因以及探索小梁细胞移植治疗青光眼提供丰富的细胞来源.
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肿瘤坏死因子对体外培养牛眼小梁细胞整合素表达的影响
目的 探讨肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)对体外培养小梁细胞整合素(integrin)表达的影响及意义.方法 体外培养的牛眼小梁细胞分别以TNF-α浓度0.0mg/ml、20ng/ml、40ng/ml、60ng/ml孵育36h,免疫组化法行整合素-β1染色后用倒置显微镜观测,RT-PCR半定量检测整合素α-5表达量,利用凝胶图像分析系统对实验结果图像分析.结果 实验组阳性反应图像积分光密度值高于对照组,且随TNF-α浓度增高旱线性递增关系.RT-PCR法integrin α-5/β-actin光密度比值与对照组筹异具有统计学意义.结论 在体外培养条件下TNF-α可引起牛眼小梁细胞整合素合成增加,整合素或许在选择性激光小梁成形术降低眼压方面发挥了一定作用.
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干扰CLC-2基因表达对人眼小梁细胞细胞周期进程的影响
目的 观察抑制CLC-2基因的表达对人眼小梁细胞细胞周期进程的影响.方法 构建针对CLC-2的小干扰(siRNA)重组表达载体,脂质体LipofectamineTM2000介导转染人眼小梁细胞后,应用RT-PCR半定量检测小梁细胞CLC-2 mRNA表达量的变化;流式细胞仪检测干扰CLC-2表达后,人眼小梁细胞细胞周期进程.结果 与空载体组比较,重组载体组的CLC-2 mRNA表达明显降低,且有效抑制小梁细胞由G0期到G1的转位.结论 抑制CLC-2的表达可以干扰人眼小梁细胞正常细胞周期进程.
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氯离子通道阻滞剂对人眼小梁细胞吞噬作用的影响
目的 探讨氯离子通道阻滞剂-5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸[5-nitro-2-(3-phenyl-propylamino)-benzoic acid,NPPB]对人眼小梁细胞吞噬功能的影响.方法 培养人眼小梁细胞,对其进行免疫化学染色鉴定,采用RT-PCR技术检测小梁细胞CLC-2 mRNA的表达,然后应用流式细胞仪定量检测不同浓度NPPB作用下,小梁细胞对乳胶株的吞噬指数.结果 体外培养的人眼小梁细胞NES染色阳性,且成功检测出CLC-2 mRNA 表达.当加入10 μmol/L的NPPB作用6 h后,小梁细胞对乳胶株的吞噬指数与对照组相比无明显改变(P＞0.05),而50 μmol/L的NPPB作用后,小梁细胞对乳胶株的吞噬作用明显降低(P＜0.01),低于对照组,且随着加入NPPB浓度的增加,吞噬指数逐渐降低.结论氯离子通道阻滞剂浓度依赖的抑制小梁细胞的吞噬功能,且氯离子通道CLC-2可能参与调节小梁细胞吞噬过程.
关键词： 5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸 小梁细胞 吞噬 -
地塞米松对低渗诱导的人小梁细胞容积敏感性氯电流的影响
目的：分析地塞米松对低渗诱导的人小梁细胞容积敏感性氯电流的影响，探讨容积敏感性氯通道（VACC）在激素性青光眼（GIG）发病中的可能机制。方法：人小梁细胞悬液接种于直径35 mm塑料培养皿中单层生长，按培养液中是否含地塞米松分组，即正常培养液组和地塞米松培养1、3和7d组，共4组，采用全细胞膜片钳技术分别记录4组细胞在低渗状态下的氯电流密度值，比较各组数值的差异。结果：正常培养液组小梁细胞低渗刺激后，在＋100和－100 mV 电压钳钳制下，外向和内向电流密度值分别为（19.94±0.87）和（－6.53±0.41）pA/pF。地塞米松培养1、3和7 d组的小梁细胞低渗刺激后，在＋100和－100 mV电压钳钳制下，外向和内向电流密度值分别为（19.39±1.40）和（－6.42±0.28）pA/pF、（17.97±2.35）和（－5.82±0.94） pA/pF、（17.16±1.16）和（－5.65±0.43）pA/pF。地塞米松培养1 d组小梁细胞较正常培养液组低渗刺激后的外向和内向电流密度值减小，但差异无统计学意义（P＞0.05）；地塞米松培养3和7 d组小梁细胞较正常培养液组小梁细胞低渗刺激后的外向和内向电流密度值明显减小（P＜0.05）。结论：地塞米松导致体外培养的正常人小梁细胞容积敏感性氯电流密度值降低，进而影响小梁细胞容积调节，可能是导致 GIG房水流出阻力增加的原因之一。
