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东亚钳蝎有效部位抗小鼠癫痫作用的研究
东亚钳蝎是传统的动物性中药,具有抗惊厥、抗癫痫、镇痛、镇静、抗血栓和抗肿瘤等多种作用[1-3].本实验室已从中提取出东亚钳蝎有效部位(active fraction of buthus martensii karsch,AFBmK)[4],为了进一步研究AFBmK的抗癫痫作用机制,利用戊四氮(PTZ)建立癫痫模型,研究经AFBmK治疗后的癫痫小鼠大脑海马中一氧化氮合酶(NOS)的活性,以及NO的含量变化.
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大鼠迷走神经刺激的启动时间与抗痫效果
目前迷走神经刺激术(vagus nerve stimulation,VNS)在临床应用中存在的主要问题是怎样实施才能大限度地发挥其应有的作用.为此,我们用海人藻酸复制大鼠癫痫模型,以ECoG、行为学表现为观测指标,探讨VNS的启动时间是否与癫痫治疗的效果有关.
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颞叶癫痫大鼠海马Akt蛋白表达变化的研究
目的 动态观察颞叶癫痫大鼠神经元磷酸化Akt(phospho-Akt)蛋白的表达变化,探讨其在癫痫发生发展中的作用.方法 清洁级SD雄性成年大鼠36只,随机分为正常对照组、诱发大鼠癫痫持续状态(status epilepticus,SE)后3 h、6h、12 h、24h、3 d组.用氯化锂LiCl和匹罗卡品(PILO)制备癫痫动物模型,应用免疫组织化学染色技术检测致痫后各时间点磷酸化Akt蛋白表达情况.结果 免疫组织化学法显示正常组与假手术组大鼠海马CA1、CA3区可见少量磷酸化Akt阳性细胞,两组间差异无统计学意义(P>0.05);模型组可见CA1、CA3区Akt阳性细胞增加(P<0.01),6 h达到高峰,3 d回到对照组水平.结论 上调磷酸化Akt蛋白表达有利于减少海马神经元凋亡,可能是保护神经损伤的机制之一.
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左乙拉西坦治疗小儿癫痫的临床观察
左乙拉西坦一种吡咯烷酮衍生物,化学名称为(S)-α-乙基-2-氧代-1-吡咯烷乙酰胺,是抗癫痫药物的主要用药之一,在临床中也得到了广泛的大量的应用。在很多动物实验中,在制作癫痫模型时均应用左乙拉西坦为抗癫痫的药物。从1999年开始到现在左乙拉西坦临床疗效肯定,国外很多实验证明左乙拉西坦主要可以有效的控制儿童和成人的全身性发作、部分性发作。可以单独使用或辅助其它抗癫痫的药物使用,作为抗癫痫主药的治疗。近年来由于左乙拉西坦对生活质量、精力/疲乏、认知功能、药物作用、情感状况、社会功能和健康状况影响较小,其安全性较高的原因,主要应用于4岁以上的儿童。
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苯妥英钠、苯巴比妥钠诱导建立难治性癫痫动物模型及其脑组织P糖蛋白表达的研究
目前,全球大约20%~30%的癫痫患者应用一线的抗癫痫药物(antiepileptic drugs,AEDs)无法达到有效的治疗效果,成为难治性癫痫(refractory epilepsy,RE).难治性癫痫患者致残率高,对社会及家庭造成影响大,因此建立稳定的难治性癫痫动物模型,从中寻找有效的治疗药物已成为广大神经科医生面临的急待解决的问题.近年国内外文献报道,难治性癫痫模型可通过电刺激杏仁核点燃,同时应用一线的AED进行动物筛选建立[1,2].本文模拟人类难治性癫痫发生的可能机制,应用较大剂量一线抗癫痫药物苯妥英钠(PHT),苯巴比妥钠(PB)进行诱导,从另外一种途径探索生建立此模型.
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草果知母汤在阻断点燃模型形成过程中对NMDA受体及其mRNA的影响
观察抗癫痫中药草果知母汤在阻断戊四唑点燃模型形成过程中,对兴奋性氨 基酸类神经递质Glu的受体NMDA结合力及其NMDAR1 mRNA的影响。以NMDA的竞争性拮抗剂MK- 801为对照,用配基受体法、原位杂交法检测相应指标的变化。结果显示:与模型组相比, 中药组大鼠海马NMDAR1 mRNA的含量明显降低,差别有显著性意义(P<0.05),MK -801 组无明显变化;与模型组相比,中药组NMDA受体结合力明显降低,但差别无显著性意义,MK -801组皮层NMDA结 合力明显降低,差别有极显著性意义(P<0.01)。说明中药草果知母汤主要通过降低 NMDAR1 mRNA的表达来降低NMDA受体的含量。
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点燃模型在抗癫痫药物研究中的应用
点燃(Kindling)模型是国际公认较理想的慢性癫痫模型,与人类复杂部分性癫痫在症状、脑电图、痫样放电等方面相似.点燃机制因涉及脑神经的长时程增强及可塑性变化等,又被应用于学习与记忆、精神神经疾病、药物成瘾等领域的研究.点燃模型不仅有助阐明癫痫发病机制和研究新抗癫痫药,对探索脑功能也有重要价值.
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锂-匹罗卡品致癫痫大鼠模型时程机制探讨
目的 观察锂-匹罗卡品致癫痫大鼠模型各时程c-fos mRNA和fos蛋白表达水平.方法 采用免疫组化和实时荧光定量PCR技术检测fos蛋白和基因水平的表达.结果 fos基因和蛋白在癫痫持续状态后1h升高,6h同时达高峰.24h表达仍有升高.结论 癫痫持续状态后6h fos蛋白和mRNA表达同时达高峰.
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杏仁核点燃模型癫痫样放电传播途径研究
目的:探讨杏仁核点燃模型癫痫样放电的传播途径.方法:选择健康Wistar大鼠30只以电刺激杏仁核的方式制作杏仁核点燃癫痫模型,于右侧杏仁核、左侧海马及右侧额叶皮质埋植电极记录脑电活动,观察电刺激杏仁核时在杏仁核、海马及额叶皮质出现癫痫样放电的潜伏期、低刺激强度及癫痫样放电的持续时间.结果:杏仁核出现癫痫样放电时,海马及皮质均未记录到癫痫样放电.而当杏仁核、海马及皮质三处出现癫痫样放电时的低刺激强度依次增大,潜伏期依次延长,海马处癫痫样放电的持续时间长.结论:杏仁核点燃模型癫痫样放电可能由杏仁核经海马传至皮层,海马可能为癫痫样放电传播的重要结构.
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蝎毒抗癫痫反复发作的GFAP基因调控机制
已有的资料证实红藻氨酸(Kainic acid, KA)癫痫模型具有癫痫发作敏感性长期增强的特征,伴有海马结构胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein, GFAP)的大量表达,其为海马结构反应性胶质化的神经病理学基础;用反义GFAP mRNA转染的星形胶质细胞的细胞株内不再表达GFAP.
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利用电刺激大鼠皮层惊厥阈值模型测定不同剂量国产和进口左乙拉西坦的药效与时效
左乙拉西坦(levetiracetam)1999年经美国食品药品管理局(FDA)批准,初用于成人部分性癫痫发作,2005年6月其口服片剂和溶液剂被批准用于4岁及4岁以上儿童的部分性癫痫发作的辅助治疗,2007年3月在中国上市,商品名为开浦兰.近来国产左乙拉西坦(佐依坦、吉易克)已经批准在国内上市.本研究利用皮层惊厥阈值测定仪与大鼠电刺激皮层癫痫模型,比较国产与进口左乙拉西坦其药效、时效有无差异;利用该模型观察左乙拉西坦在加用卡马西平后两药间有无相互干扰作用,现报告如下.
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锂-匹罗卡品癫痫模型中大鼠苔藓纤维发芽机制研究
目的:通过观察锂-匹罗卡品癫痫模型中大鼠实验性癫痫发作时的行为、脑电图及病理生理变化,探讨苔藓纤维发芽(MFS)在癫痫中的发病机制.方法:利用锂-匹罗卡品(Li-PC)制作大鼠急性癫痫持续状态(SE)的癫痫模型.造模后7 d、14 d、28 d,进行苔藓纤维发芽评分.结果:模型组大鼠2周时可见MFS穿过齿状回内分子层颗粒细胞层,进入内分子层及CA3区锥体细胞始层黑色颗粒形成,4周时形成连续密集颗粒带,MFS评分显著高于生理盐水对照组(P<0.05).结论:急性期SE神经元损伤致苔藓纤维发芽,可能是慢性颞叶癫痫的病理基础.
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拉莫三嗪消化道给药对大鼠惊厥阈值的影响
癫痫是一种突然发生,自行终止,反复发作的脑部神经元高度同步化,并具自限性异常放电所致的短暂性脑功能障碍,据世界卫生组织统计,全世界癫痫患者达5 000万,我国约有650万[1],治疗以药物控制发作为主要手段.拉莫三嗪现已广泛用于难治性癫痫的治疗,但有关的实验研究报道较少.本实验采用电刺激大鼠皮层制作癫痫模型,动态观察拉莫三嗪对于癫痫大鼠惊厥阈值的影响,以及对海马部位神经元的保护作用,从而为临床治疗提供一定的理论依据.
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点燃癫痫模型中颞区脑组织GAD基因表达的研究
目的探索癫痫发生与谷氨酸脱羧酶(GAD)基因表达的关系.方法采用印防己毒(PTX)腹腔注射致SD鼠慢性点燃模型,将SD鼠分为对照组、癫痫发作组、发作间期组和苯巴比妥钠干预组.RT-PCR半定量方法检测颞区脑组织GAD67 和GAD65 mRNAs 表达水平.结果癫痫发作期和发作间期颞区脑组织GAD67 和GAD65 mRNAs表达水平较对照组均明显升高(P<0.05),以GAD65 mRNAs表达水平在发作期升高明显(P<0.01),而药物干预组颞区脑组织GAD mRNA表达水平无明显变化.结论在该模型中,GAD 基因表达水平改变与癫痫发作密切相关,提示GABA能神经元的抑制功能增强是机体重要的内源性抗癫痫机制.苯巴比妥钠可以预防癫痫的发生,从而阻止脑组织GAD基因表达代偿性增强.
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杏仁核点燃癫痫鼠模型脑内不同神经结构FOS蛋白的表达
目的观察杏仁核点燃癫痫鼠模型脑内不同核团FOS蛋白表达顺序及强度以探讨癫痫的传播途径.方法选择健康Wistar大鼠60只制作杏仁核点燃癫痫模型,分别在点燃后0.5h、1h、2h、4h及24h用免疫组织化学方法观察癫痫大鼠脑内梨状皮质、杏仁核、海马、齿状回、尾壳核、皮质、皮质下结构、小脑Purkinje细胞、小脑齿状核、脑桥网状结构共10个核团FOS蛋白表达情况.结果杏仁核点燃后0.5h梨状皮质、齿状回、小脑Purkinje细胞开始出现FOS表达,然后表达逐渐增强,杏仁核、海马、小脑齿状核、皮质、皮质下结构、尾状核及脑桥网状核在发作后1~2h开始表达,4h表达明显,癫痫发作24h后大多数核团FOS蛋白表达低于4h但仍高于1h~2h.结论杏仁核点燃大鼠癫痫发作后可引起脑内FOS蛋白区域性一过性表达.梨状皮质表达早,是首先被激活的结构之一,而杏仁核、海马、小脑Purkinje细胞、皮质可能为杏仁核点燃模型癫痫传播途径的重要组成部分.
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慢性癫痫大鼠海马细胞外液卡马西平浓度的研究
研究表明癫痫灶附近多种药物转运体(multidrug transporter,mdt)的过度表达可能降低靶点细胞外液抗癫痫药(AED)浓度而产生癫痫耐药现象.关于慢性癫痫脑细胞外AED浓度的研究国内未见报道.因此我们建立大鼠慢性癫痫模型,采用微透析活体取样的方法,检测大鼠海马脑细胞外液卡马西平浓度.
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VNS和X线照射对癫痫大鼠皮层GS的影响
目的:探讨癫痫大鼠放射和VNS治疗中兴奋性氨基酸递质Glu的主要代谢酶GS抗痫作用中的作用机制.方法:利用慢性点燃癫痫大鼠进行0、6、12、24Gy的X线放射或用0、低、中、高强度的VNS刺激后,利用氨基酸分析仪测定不同照射或刺激剂量后癫痫大鼠及照射或曹操后1h、24h、1周时癫痫大鼠额叶皮层内的谷氨酸含量变化,利用免疫组织化学的方法观察抗GS阳性细胞率.结果:12Gy、24Gy组较对照组Glu含量低,GS含量增高,12Gy照射后1h、24h、1周后与对照组间有GS的进行性增高,Glu含量在照射后1h和1周含量较对照对下降.VNS各刺激组GS和Glu无著性差异.结论:放射治疗癫痫产生抗痫作用可能与GS在关,而VNS治疗与GS无关,GS含量与Glu呈反向变化,是可能是影响其代谢的主要因素.
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左乙拉西坦对癫痫模型大鼠海马组织中GFAP及PSD95表达的影响
目的:研究左乙拉西坦对癫痫模型大鼠海马组织中胶质纤维性蛋白(GFAP)及突触后致密物(PSD95)表达的影响.方法:选取清结级Wistar大鼠104只作为研究对象,随机分为4组:生理盐水组(NS组)23只,左乙拉西坦对照组(LEV组)24只,模型组(Li-pilo组)27只,模型+左乙拉西坦组(Li-pilo+LEV组)30只,LEV组与Li-pilo+LEV组的大鼠每日给予左乙拉西坦200mg/kg进行灌胃,连续给药4周.分别于第7d、14d、28d采用RT-PCR方法动态检测大鼠海马组织中GFAP及PSD95表达情况.结果:经治疗后,与NS组相比,Li-pilo+LEV组第7d、14d、28dGFAP的表达水平明显升高,PSD95的表达量明显降低(P<0.05);与Li-pilo组相比,Li-pilo+LEV组第7d、14d、28dGFAP的表达水平明显降低,PSD95的表达水平明显升高(P<0.05).结论:左乙拉西坦的抗癫痫作用可能与通过上调PSD95的表达及抑制GFAP的表达有关,具体作用机制还需进一步研究.
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植入式迷走神经刺激器对红藻氨酸诱导兔癫痫模型的影响
目的 研究植入式迷走神经刺激器(VNS)对实验兔癫痫模型的影响.方法 实验兔大脑皮层下注射红藻氨酸,诱导癫痫模型.将螺旋电极安装在实验兔迷走神经上,VNS植入左侧背部皮下.将18只实验兔随机分为3组,A组(n=6)仅造模,假手术不植入VNS;B组(n=6)和C组(n=6)在安装VNS 1周后进行如下操作:B组在造模前2h开启迷走神经刺激;C组造模后立即开启刺激.分别观察以上3组兔临床反应及脑电波,后病理学观察VNS与相邻肌肉的生物相容性.结果 癫痫模型诱导成功,癫痫临床表现明显;VNS植入后实验兔存活率100%,未见明显异常.B组癫痫波减少,脑电图逐渐平稳,癫痫临床表现缓解;而C组癫痫症状有一定改善,病理学观察未见VNS相邻的肌肉组织异常.结论 植入式VNS对实验兔癫痫模型具有一定的干预效果,且提前开启迷走神经刺激效果较好,植入式VNS生物相容性良好.
关键词: 迷走神经刺激器(VNS) 兔 癫痫模型 -
光遗传学技术在癫痫治疗中的探索
光遗传学技术原理的初应用是源于2002年Zemelman等将ChARGe导入靶细胞从而进行神经活动调控的研究[1]。2005年Boyden和Deisseroth等共同报道了应用一种光敏蛋白控制神经细胞活性的技术[2]。而光遗传学的概念是2006年由Deisseroth等所提出的[3],是指遗传学(重组DNA技术)与光学技术相结合的一种细胞生物学研究技术方法[4]。该方法将对光敏感的蛋白表达在所选择的细胞上,然后应用相应波长的光线照射激活光敏蛋白,从而实现对细胞、组织、器官及动物生理功能的精细调控。光遗传学技术现已应用到许多疾病的研究中,如心血管系统疾病、神经系统疾病等[5]。首次在癫痫治疗领域探索是2009年 T宝nnesen 等将Halorhodopsin ( NpHR)导入海马的主细胞中,观察到在培养的大鼠脑片癫痫模型上,光遗传学技术可以成功抑制癫痫发作。于是提出今后光遗传学技术或许可以成为癫痫治疗的一种新方法[6]。随后不断有应用光遗传学技术控制癫痫发作的报道[7-9]。现对光遗传学技术的基本原理,其在癫痫治疗中的研究进展及未来在癫痫治疗领域的应用前景做一简要的综述。