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大鼠迷走神经刺激的启动时间与抗痫效果
目前迷走神经刺激术(vagus nerve stimulation,VNS)在临床应用中存在的主要问题是怎样实施才能大限度地发挥其应有的作用.为此,我们用海人藻酸复制大鼠癫痫模型,以ECoG、行为学表现为观测指标,探讨VNS的启动时间是否与癫痫治疗的效果有关.
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芍药苷对培养小鼠皮层神经元的保护作用
目的探讨芍药苷是否促进培养皮层神经细胞的存活,并对抗兴奋性氨基酸海人藻酸(KA)所致的神经损伤.方法解剖分离15 d胚胎小鼠皮层神经细胞,接种于24孔板中加药培养,台盼蓝染色细胞,相差显微镜及免疫组织细胞化学方法进行形态学观察.结果①加入芍药苷 20.8和41.6 mg*L-1培养4 d增加神经细胞存活数量,降低死亡率.②加入KA 50 μmol*L-1作用30 min,神经元肿胀,失去折光性,核偏位,死亡率增高.预先加入芍药苷20.8和41.6 mg*L-1培养4 d,可对抗KA所致的神经损伤.结论芍药苷可增加神经细胞存活数量,降低死亡率,对抗KA所致的兴奋性神经损伤.
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NMDA受体NR2B亚基在药物依赖过程中的作用
谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统中重要的兴奋性神经递质,在突触传递和神经元可塑性方面具有非常重要的作用.其受体可分为代谢型和离子型两大类,离子型受体主要有:α-氨基羟甲基异唑丙酸(AMPA)、海人藻酸(kainic acid,KA)及N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA).NMDA 受体是一种配体门控型阳离子通道,由基本亚基 NR1 和至少一个NR2 调节亚基组成异聚体.编码 NR1 的基因只有一种,但可通过 mRNA 剪接产生多种变异体;编码 NR2 的基因有4种,即 NR2A、NR2B、NR2C 和 NR2D[1].NMDA 受体的功能特性主要由组成异聚体的 NR2 亚基的特异性决定.
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胡椒碱对海人藻酸致惊作用的影响
[目的]观察胡椒碱的致惊作用并分析其机制.[方法]小鼠和家兔的实验性癫痫模型;利用氨基酸自动分析仪检测小鼠脑内氨基酸含量;大鼠脑片谷氨酸释放实验.[结果]胡椒碱对小鼠脑室注射(icv)海人藻酸(KA)引起的阵挛性惊厥有较强的对抗作用,其半数有效量(ED50)为24.0(18.7～33.7)mg/kg.对家兔海马注射KA引起的异常脑电放电有一定的抑制作用.明显降低小鼠脑内谷氨酸(Glu)和天冬氨酸(Asp)含量,并且能够降低Glu+Asp/γ-氨基丁酸(GABA)的比值.10-6mol的胡椒碱对大鼠大脑皮质脑片预载的3H-Glu的释放有明显的抑制作用.[结论]胡椒碱有较强的抗实验性癫痫作用,其机制可能与降低了中枢神经系统兴奋性氨基酸(EAA)的功能有关.
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缺血性脑血管病神经保护剂治疗的现状
急性脑梗死(ACI)半暗带血流降到正常血流的25%以下,或缺血再灌注时,突触前谷氨酸(Glu)大量释放,激活2-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异口恶唑丙酸(AMPA)、海人藻酸(KA)受体过度兴奋介导的神经细胞急性渗透性肿胀,激活N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体过度兴奋介导的神经细胞迟发性损害,以及一氧化氮合酶(NOS)途径.使Na+、Ca2+内流,神经元反复去极化,ATP耗竭,Na+-K+泵功能丧失,Ca2+超载,有过量NO、氧自由基(OFR)生成,细胞内水肿、酸中毒以及凋亡基因激活,黏附分子和细胞因子异常表达,白细胞也参与了缺血/再灌注损伤诱发的炎性反应过程.这一系列的级联反应形成的瀑布效应加重了神经细胞的损伤.
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癫痫清颗粒对海人藻酸致痫大鼠海马内肿瘤坏死因子及白细胞介素-4表达的影响
目的:研究癫痫清颗粒对海人藻酸(KA)致痫大鼠海马内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-4(IL-4)表达的影响.方法:大鼠海马CA1区注射KA建立KA癫痫大鼠模型.观察癫痫清颗粒对KA癫痫大鼠模型行为学的影响;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠海马内TNF-α及IL-4蛋白的表达.结果:癫痫清颗粒可延长癫痫大鼠发作潜伏期,降低其癫痫大发作分级;可抑制由癫痫发作引起的大鼠海马内TNF-α及IL-4蛋白表达下降.结论:癫痫清颗粒可延长KA致痫大鼠的癫痫发作潜伏期,并降低发作分级,同时具有增加海马内TNF-α及IL-4蛋白表达的作用.
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获得性免疫反应与海人藻酸引起的C57BL/6小鼠海马损伤的关系
背景:海人藻酸引起在啮齿类动物的海马损伤是用于研究人类神经退行性病变的优质模型.虽然许多研究已证实炎症分子和反应参与并且促进了疾病的进程,但是否获得性免疫反应,尤其是免疫活性细胞,如T细胞和B细胞是否参与了神经退行性病变尚不清楚.目的:观察B和T细胞亚型在海人藻酸引起的海马神经元退行性病变中的作用.设计:随机对照动物实验.单位:吉林大学第一医院耳鼻喉头颈科和神经内科,瑞典卡若林斯卡医学院Huddinge医院神经医学系老年科.材料:实验于2000-06/09在瑞典Karolinska Institute医学院神经医学系完成.选用20只的雄性C57BL/6小鼠(野生型),同样基因背景的雄性CD4(-/-),CD8(-/-),CD4/CD8(-/-)和Igh-6(-/-)基因敲除C57BL/6小鼠分别为17,19,15,14只,鼠龄5～6周,体质量18～20 g.3只鼠龄和体质量相匹配的C57BL/6小鼠经鼻给水作为对照.试剂和仪器:海人藻酸购自Sigma,USA.双色流式细胞仪和CellQuest购自Becton Dickinson,CA,USA.方法:①所有小鼠经麻醉后,按48 mg/kg剂量将7.69 g/L海人藻酸滴入85只小鼠双侧鼻孔中.3只对照小鼠鼻内滴入等量水.②观察小鼠临床症状,临床症状分级如下:0～6分,0分:正常;6分:死亡.③给予海人藻酸4.0～5.0 h后,采用流式细胞术测定脾细胞表面标记的表达.④给药7 d后,麻醉所有小鼠,取脑,固定,包埋.采用尼氏染色方法评估(海马)切片神经元形态,判断神经细胞和神经退行的严重程度.应用半定量系统,即病理评分判断神经细胞和神经退行性病变的严重程度:0～6分,0分:正常;6分:重度神经元脱失(CA3区有＞40%神经元脱失).⑤多组间差异比较采用单因素方差分析,两组间差异比较采用t检验.主要观察指标:各组小鼠临床级别、海马神经病理学改变和脾细胞表面细胞分子表达.结果:小鼠85只均进入结果分析.①临床级别:所有CD4(-/-)小鼠表现出严重癫痫发作,其临床级别明显高于野生型小鼠(P＜0.01).CD4/CD8(-/-)小鼠临床级别明显低于野生型小鼠(P＜0.01).而CD8(-/-)and Igh-6(-/-)临床级别与野生型小鼠无明显差异.对照小鼠无临床症状.②海马神经病理变化:CD4/CD8(-/-)小鼠病理变化轻(病理级别低),而Igh-6(-/-)小鼠海马CA3区病理损害较CD8(-/-)小鼠和野生型小鼠更为严重.③脾细胞亚群变化:CD8(-/-)鼠和野生型鼠CD4+T细胞百分比明显升高(给药前后分别为8.4%,14.2%;18.2%,31.5%);Igh-6(-/-)小鼠CD8+T细胞升高(给药前后分别为2.1%和7.4%);CD4(-/-)鼠B细胞升高(给药前后分别为22.7%,32.8%).结论:获得性免疫反应参与海人藻酸引起的小鼠海马神经元退行性病变,B细胞和T细胞亚型在海人藻酸引起的海马损伤中起到不同作用.
关键词： 海人藻酸 获得性免疫反应 海马神经元退行性病变 -
B细胞和T细胞亚型在海人藻酸引起的鼠海马神经元损伤过程中起到了不同的作用
目的应用海人藻酸(Kainic acid,KA)在C57BL/6免疫缺陷小鼠建立了神经退行性病变并观察了免疫活性B细胞和T细胞亚型在病变过程中的作用.方法经鼻滴入海人藻酸观察其临床和病理变化,细胞流式仪检测和分析脾细胞表面标记.结果海人藻酸引起了CD4(CD4-/-)、CD8(CD8-/-)、CD48(CD48-/-)和B细胞(Igh6-/-)基因敲除鼠的临床抽搐症状和海马损伤.其临床症状在CD4(-/-)鼠重,CD8(-/-)、Igh6(-/-)以及野生型鼠次之,而CD4CD8双重基因缺陷鼠轻.病理变化大约和临床症状相平行,脾细胞表面标记的表达也证实了上述发现.结论获得性免疫反应参与了海人藻酸引起的海马损伤,CD4T细胞和B细胞在病变过程中可能起到了保护作用,而CD8T细胞则加重神经退行性病变.
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海人藻酸致急慢性癫痫模型中Nrf2的变化及其对神经元的影响
目的 探讨海人藻酸致急慢性癫痫模型中Nrf2的变化及其对神经元的影响.方法 大鼠海马内注射浓度为(1 μg/μl)海人藻酸(KA)1.0 μl后,随机分为模型24 h组(急性模型组)及模型28 d组(慢性模型组),假手术组注射等体积的生理盐水,每组10只.尼氏染色法观察神经元的变化;免疫组化及免疫印迹法测定Nrf2的表达.结果 尼氏染色结果显示,与假手术组相比,模型24 h组与模型28 d组尼氏小体均减少,但以模型28 d组减少显著;免疫组化及免疫印迹结果表明,模型24 h组的表达增加,模型28 d组表达则减少.结论 Nrf2在急性模型表达上调,具有抗氧化作用,进而保护神经元;慢性模型中则不具有抗氧化作用,神经元受损.
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经鼻滴入海人藻酸引起C57BL/6小鼠嗅球和海马区神经元的退行性病变
目的应用海人藻酸(KA)在C57BL/6小鼠建立神经退行性病变动物模型并观察其对嗅球神经元的影响.方法经鼻滴入KA应用尼氏和嗜银染色观察海马及嗅球的病理变化,免疫组化检测Cyclooxygenase 2(COX-2)的表达.结果经鼻滴入KA成功地在C57BL/6小鼠建立了神经退行性病变动物模型,KA通过嗅神经引起双侧嗅球和海马损伤,其病变程度与小鼠体重和滴入KA剂量有关,同时KA引起了脑内明显的胶质细胞增生和炎症因子COX-2在嗅球部的表达.结论经鼻滴入KA能够引起嗅球和海马的损伤.
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GABA受体基因转染对癫痫大鼠皮层脑电的影响
目的 探讨在下丘脑乳头体上核内转染γ-氨基丁酸(GABA)受体基因后对海人藻酸(KA)致痫大鼠皮层脑电产生的影响,从而为难治性癫痫的治疗开辟新的途径.方法 在右侧杏仁核内注射KA制备癫痫动物模型作对照,GABA基因转染组则利用仙台病毒(HVJ)-脂质体转染法预先在下丘脑的乳头体上核内转染被脂质体包被的GABA受体基因,48h后在杏仁核内注射KA,两组大鼠分别进行皮层脑电测定.结果 KA致痫组大鼠脑电在尖波的背景上出现持续性放电,GABA转基因组大鼠则以散发的尖波、棘波以及阵发性放电为主,出现持续性放电的时间明显缩短.结论 下丘脑内转染GABA受体基因后可以抑制癫痫发作的程度.
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B细胞和T细胞亚型在海人藻酸引起的C57BL/6鼠海马神经元损伤过程中不同的作用
目的 应用海人藻酸在C57BL/6免疫缺陷小鼠建立了神经退行性病变并观察了免疫活性B细胞和T细胞亚型在病变过程中的作用.方法 经鼻滴入海人藻酸观察其临床和病理变化、细胞流式仪检测和分析脾细胞表面标记.结果 海人藻酸引起了CD4基因敲除(CD4-/-)、CD8(CD8-/-)、CD48(CD48-/-)和B细胞(Igh6-/-)基因敲除鼠的临床抽搐症状和海马损伤.其临床症状在CD4(-/-)鼠重,CD8(-/-),Igh6(-/-)以及野生型鼠次之,而CD4、CD8双重基因缺陷鼠轻.病理变化大约和临床症状相平行,脾细胞表面标记的表达也证实了上述发现.结论 获得性免疫反应参与了海人藻酸引起的海马损伤.CD4T细胞和B细胞在病变过程中可能起到了保护作用,而CD8T细胞则加重神经退行性病变.
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Caspase及细胞色素C在海人藻酸所致海马组织兴奋性毒性损伤中的作用
目的探讨Caspase及细胞色素C的蛋白质在兴奋性毒性损伤中的表达,并探讨其作用机制.方法制备大鼠海马脑片 ,利用Western印迹分析法,检测海人藻酸(KA)兴奋性损伤后大鼠海马组织Caspase和细胞色素C的表达.结果正常对照组Caspase-3和Caspase-9及细胞色素 C有较低水平的表达,加用KA后可见Caspase-3和Caspase-9及细胞色素C的表达显著增加. 结论 (1)正常脑组织Caspase-3和Caspase-9的表达水平较低.(2 )Caspase-3和Caspase-9及细胞色素C参与KA毒性损伤神经细胞凋亡的调控,KA可能通过增加细胞色素C的蛋白质表达,而进一步提高Caspase-3和Caspase-9的含量,促进细胞凋亡.
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Clenbuterol对海人藻酸所致大鼠海马组织培养损伤的保护作用研究
目的探讨β-肾上腺素能受体协同剂Clenbuterol是否可保护海马神经组织对抗兴奋性氨基酸-海人藻酸(KA)所致的神经损伤.方法应用培养的海马组织切片模型,将14d的海马脑片在高钙离子浓度的培养液中加用50μmol/L的KA 3h,在应用KA前2h、应用的同时及之后的18h内,加用100μmol/L的Clenbuterol.KA所致的神经损伤由Propidium Iodide (PI)的吸收量、乳酸脱氢酶(LDH)的释放量来评价.结果 Clenbuterol可以保护海马神经组织由KA所致的损伤,表现在Clenbuterol和KA同时用药组比KA单独用药组LDH释放量及PI吸收量均降低25%～30%左右.并证明Clenbuterol的神经保护作用,是通过β2-肾上腺素能受体的激活来完成.结论 Clenbuterol可保护海马神经组织对抗KA所致的兴奋性损伤,这种神经保护作用可以使它成为一种治疗缺血性卒中很有潜力的药物.
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不同剂量海人藻酸致痫鼠海马各亚区病理变化的比较
目的:通过观察海人藻酸(KA)致痫鼠在KA不同剂量条件下其海马各亚区病理变化特点,探讨癫痫的信号传导通路及发病机制.方法:Wistar雄性大鼠30只,随机分为正常对照组、小剂量KA组(0.025 μg)和大剂量KA组(0.100 μg)(每组10只),用微管注射法在右侧杏仁核内注射KA制备癫痫模型,观察不同剂量KA引起的海马各亚区病理变化特点.结果:与正常对照组比较,大剂量KA组大鼠海马区表现为以CA3区细胞脱落为主,CA1区锥体细胞及齿状回颗粒细胞大小形态正常,排列整齐.小剂量KA注射则使CA1和CA3区细胞均受损,而齿状回细胞始终保持完好.结论:KA致痫鼠海马各亚区病理变化随KA剂量不同而不同,可能与癫痫信号传导的顺序及海马自身的特性有关.
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坎地沙坦干预KA致痫大鼠心肌细胞ERK1/2的表达及其机制
目的:探讨坎地沙坦干预后海人藻酸(KA)致痫大鼠心肌细胞细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的表达及其机制.方法:雄性Wistar大鼠(n=105)随机分为3组:A对照组(n=35);B1-5致痫组(n=35);C1-5坎地沙坦组(n=35),1-5分别表示癫痫后0、0.5、2.0、4.0及6.0h.采用立体定位仪下杏仁核内注射KA方法制备大鼠癫痫模型,于致痫后不同时程进行灌流固定、心肌组织的石蜡包埋、切片及免疫组织化学染色,检测不同时程心肌细胞ERK1/2表达的灰度值.结果:与对照组比较,致痫组及坎地沙坦组心肌细胞于致痫后0.5h ERK1/2表达均开始增加(P<0.05),致痫后2h两组大鼠心肌组织ERK1/2的表达均达到高峰(P<0.01),随后逐渐下降,致痫后6h,两组大鼠心肌组织ERK1/2表达均回到对照组水平(P>0.05).即致痫组及坎地沙坦干预两组大鼠心肌ERK1/2蛋白表达组间比较,坎地沙坦组ERK1/2表达较低(P<0.05).结论:ERK1/2在KA致痫大鼠心肌细胞中表现为短时程表达增加,坎地沙坦可使心肌ERK1/2表达降低.
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雷公藤甲素对KA损伤大鼠星形胶质细胞的影响
目的:观察海人藻酸(Kainic acid,KA)海马内注射后星形胶质细胞的变化及雷公藤甲素(TRP)对其的影响.方法:90只SD大鼠(200～220g)随机分为3组:右侧海马注射生理盐水后生理盐水灌胃作为对照组(NS+NS),右侧海马注射海人藻酸后生理盐水灌胃干预组(KA+NS),右侧海马注射海人藻酸后雷公藤甲素灌胃干预组(KA+TRP).动物存活1天,3天,5天,7天,14天后免疫组织化学结合图像分析技术观察海马内星形胶质细胞形态和数目的变化.结果:(KA+NS)组海马内星形胶质细胞数目明显增多,胞体明显增大,突起变短,变粗,与(NS+NS)组相比差别具有显著性(P＜0.05);(KA+TRP)组星形胶质细胞数量明显减少,胞体变小,突起变细长,与(KA+NS)组相比差别具有显著性(P＜0.05).结论:KA注射后可导致大鼠海马内星形胶质细胞的激活,雷公藤甲素对KA诱导的星形胶质细胞的活化有抑制作用.
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雷公藤甲素对KA损伤大鼠星形胶质细胞的影响
目的:观察海人藻酸(Kainic acid,KA)海马内注射后星形胶质细胞的变化及雷公藤甲素(TRP)对其的影响.方法:90只SD大鼠(200～220g)随机分为3组:右侧海马注射生理盐水后生理盐水灌胃作为对照组(NS+NS),右侧海马注射海人藻酸后生理盐水灌胃干预组(KA+NS),右侧海马注射海人藻酸后雷公藤甲素灌胃干预组(KA+TRP).动物存活1天,3天,5天,7天,14天后免疫组织化学结合图像分析技术观察海马内星形胶质细胞形态和数目的变化.结果:(KA+NS)组海马内星形胶质细胞数目明显增多,胞体明显增大,突起变短,变粗,与(NS+NS)组相比差别具有显著性(p＜0.05);(KA+TRP)组星形胶质细胞数量明显减少,胞体变小,突起变细长,与(KA+NS)组相比差别具有显著性(P＜0,05).结论:KA注射后可导致大鼠海马内星形胶质细胞的激活,雷公藤甲素对KA诱导的星形胶质细胞的活化有抑制作用.
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KA海马注射对大鼠学习和记忆的影响及雷公藤甲素的保护作用
目的:观察海人藻酸(Kainic acid,KA)海马内注射后大鼠学习记忆的变化及雷公藤甲素(TRP)对其的影响.方法:采用Morris水迷宫筛选空间学习记忆能力正常的SD雄性大鼠90只(200-220g).将实验动物分为:右侧海马注射生理盐水后生理盐水灌胃对照组(NS+NS)、右侧海马注射海人藻酸后生理盐水灌胃干预组(KA+NS)、右侧海马注射海人藻酸后雷公藤甲素灌胃干预组(KA+TRP).动物分别存活1天、3天、5天、7天、14天,用Morris水迷宫检测各组动物空间位置记忆能力:尼氏染色法观察海马CA1区神经元数目和形态.结果:与NS组(NS+NS)比较,KA组(KA+NS)大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05).跨越原平台次数减少(P<0.05);CA1区的神经元出现胞体肿胀、排列散乱等形态改变及神经元的丢失(P<0.05);TRP组(TRP+KA)与KA组比较,大鼠的平均逃避潜伏期从第5天起缩短(P＜0.05),跨越原平台次数增多(P<0.05),神经元形态好转,数目增多.结论:KA 海马内注射,可以导致大鼠学习记忆功能障碍及神经元形态的改变;雷公藤甲素干预治疗,能够改善动物的学习和记忆能力,保护海马神经元.
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海人藻酸致痫大鼠海马Caspase-3酶活性变化
目的检测KA致痫后鼠海马Caspase-3酶活性动态变化.方法运用FIENA法特异性体外检测Caspase-3的活性.结果 KA致痫后6h,鼠海马即有Caspase-3活性显著增高,一周内保持高水平,10天开始下降;而正常鼠海马几乎无活性Caspase-3检出.结论 Caspase-3参与癫痫后神经细胞的凋亡损害,特异性Caspase-3酶抑制剂能预防癫痫后凋亡的发生.
