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三七皂苷Ft1抑制乳腺癌细胞增殖、迁移及促进凋亡的机制研究
研究三七皂苷Ft1抑制乳腺癌细胞增殖、迁移,促凋亡的作用及分子机制.CCK-8法、EdU染色、Hoechst 33258染色和单细胞迁移实验分别检测细胞活力、增殖、凋亡和迁移能力;Western blot检测凋亡相关蛋白、HIF-lα、PI3K/Akt/mTOR/p70S6K和MAPK通路蛋白表达.结果表明,Ftl能降低乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的活力,抑制MDA-MB-231和BT-549细胞的增殖.Ftl也可诱导MDA-MB-231细胞核DNA高度聚集,并且在作用12 h后,下调HIF-lα和Bcl-2,上调cleaved caspase 3蛋白表达.进一步研究发现,Ftl在降低HIF-lα蛋白表达的同时,显著减少p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K及p-ERK l/2的蛋白表达,但增加p-JNK蛋白水平.Ftl能够显著抑制EGFR的Tyr1068和Ser 1046/1047两个位点的磷酸化.在不影响HS578T细胞活力的浓度下,Ftl能够显著抑制其迁移路径长度和速度.因此,Ftl具有抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和促进凋亡作用,其作用可能与其调控Akt/mTOR/p70S6K和MAPK通路,下调HIF-lα,抑制Bcl-2和上调cleaved caspase 3蛋白有关.
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胃癌中缺氧诱导因子-1α与Survivin表达的相互关系及临床病理意义
目的 研究缺氧诱导因子.1d(HIF-lα与Survivin在胃癌及正常胃组织中表达的相互关系,探讨其在胃癌的发生、浸润和转移中的作用. 方法 应用免疫组化SP法检测54例胃癌中HIF-lα、Survivin的表达情况,分析HIF-1α、Survivin与胃癌,临床病理因素的关系. 结果 HIF-lα在胃癌中的表达率74.1%,明显高于正常胃组织(0)(P
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49例宫颈鳞癌患者组织中HIF1α的表达及在放疗中的意义
目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在中晚期宫颈癌组织中的表达,了解放射抵抗性机制,为宫颈癌的临床个体化治疗,预后判断提供参考指标.方法:采用免疫组化二步法检测49例中晚期宫颈癌组织(其中20例为放疗后完全缓解组,29例为放疗后末控组)中的HIF-1α的阳性表达.结果:1.HlF-1α在宫颈癌放疗后未控组的阳性表达率为89.66%,放疗后完全缓解租的阳性表达率为65%,两组之间表达有差异性,差异性有统计学意义(c2=8.036,P<0.05).结论:HIF-1α可能在宫颈癌放射治疗过程中起主要的作用,可作为宫颈放射治疗疗效的预测指标及预测预后指标,同时HIF-1α也可能成为宫颈癌治疗的新参考指标.
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乙肝病毒X蛋白上调肝癌细胞缺氧诱导因子-1α的作用和机制研究
背景与目的：乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein，HBx)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)在肝癌发生、发展过程中起重要作用。有研究显示，两者在肝癌组织中的表达呈正相关，但相关机制尚不明确。本研究拟进一步在细胞水平上探讨HBx对HIF-1α的调控作用及机制。方法：用LipofectemineTM 2000包裹HBx表达质粒转染到肝癌Huh7细胞。蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Huh7细胞中HIF-1α和HIF-1β蛋白的表达；特异性试剂盒检测HIF-1α转录活性；实时定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)检测HIF-1α及其靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和多药耐药基因1(multi-drug resistance gene 1，MDR1)mRNA表达变化；免疫共沉淀法检测HIF-1α、HBx和希佩尔林道病肿瘤抑制蛋白(protein von Hippel-Lindau，pVHL)间的相互作用。结果：转染HBx质粒后，Huh7细胞中HIF-1α蛋白表达、转录活性及其靶基因VEGF和MDR1的mRNA表达水平明显上调(P<0.05)，然而HBx对HIF-1α mRNA表达水平没有明显影响(P>0.05)。同时，HBx显著削弱pVHL介导的泛素化水解蛋白酶降解HIF-1α的活性。免疫共沉淀法检测进一步提示，HBx可直接结合pVHL，而对HIF-1α没有结合作用。结论：HBx可能通过直接结合pVHL，抑制其与HIF-1α的相互作用，从而增强HIF-1α蛋白的稳定性及转录活性。
关键词： 肝细胞癌 缺氧诱导因子-lα 乙肝病毒X蛋白 希佩尔林道病肿瘤抑制蛋白 -
HIF-1α、HSP90在胰腺癌组织芯片中的表达及其临床意义
背景与目的:胰腺癌是预后差的恶性肿瘤之一,因此胰腺癌的基础研究对指导临床诊治具有重要意义.本研究旨在探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)与热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌临床病理参数的相关性,并探讨其作为预后指标的意义.方法:应用高通量的组织芯片技术和免疫组织化学方法检测88例无术前放化疗史的胰腺癌手术标本和11例非肿瘤性胰腺组织中HIF-1α和HSP90蛋白的表达情况,运用Spearman秩相关分析两者的相关性,并对随访2个月～6年的53例患者进行生存分析.结果:88例胰腺癌组织中,HIF-1α和HSP90高表达率分别为76.1%(67例)、73.9%(65例).HIF-1α高表达与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移相关(P
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HIF-lα、Caspase-3、Survivin蛋白的表达与食管鳞癌发生关系的研究
目的 研究缺氧诱导因子-lα(HIF-la),Caspase-3,Survivin在食管癌的发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测49例食管鳞癌中HIF-lα、Caspase-3、Survivin蛋白的表达.结果 HIF-lα蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为51.0%(25/49),显著高于正常食管黏膜0(0/32)(P＜0.05);Caspase-3蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为34.7%(17/49),显著低于癌旁正常黏膜100%(32/32)(P＜0.05);Survivin蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率为57.1%(28/49),显著高于癌旁正常黏膜6.3%(2/32)(P＜0.05).结论 HIF-lα蛋白Survivin蛋白的高表达和Caspase-3蛋白的低表达,在食管鳞癌发生、发展中起重要作用,HIF-lα蛋白的阳性表达可能下调下Caspase-3蛋白的表达,使Survivin蛋白的表达增加.联合检测HIF-lα、Caspase-3与Survivin可作为判断食管癌生物学行为的客观指标,对判断食管癌的预后具有重要意义.
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缺氧诱导因子-1α分子构成、转录活化与肝细胞癌变关系
肝癌(HCC)多伴有病毒性肝炎和肝硬化,癌组织血供丰富,易发生肝内转移和门静脉、肝静脉、胆管癌栓形成,且术后易复发,预后差[1].在慢性肝炎、肝硬化、肝癌的多步骤发展过程中,肝血供也发生特征性的变化,门静脉供血减少,肝动脉供血增加.
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食管鳞状细胞癌组织中HIF-1α、CCR7和VEGF-C蛋白的表达
目的:检测食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中缺氧诱导因子-lα(HIF-1α)、趋化因子受体7(CCR7)及血管内皮生长因子C(VEGF-C)蛋白的表达.方法:采用免疫组化SP法检测45例ESCC组织及癌旁正常食管黏膜组织中HIF-1α、CCR7及VEGF-C蛋白的表达,并分析ESCC组织中3者的表达与临床病理特征的关系.结果:ESCC组织中HIF-1α、CCR7及VEGF-C蛋白的阳性表达率分别为55.6％、71.1％和64.4％,高于癌旁正常食管黏膜组织的11.1％、17.8％和35.6％ (X2=16.409、17.633和6.261,P均＜0.05).HIF-1 α、CCR7及VEGF-C蛋白的表达与ESCC患者的病理分期和淋巴结转移有关(P＜0.05).ESCC组织中H1F-1α的表达与CCR7的表达呈正关联(rp=0.303,P=0.033),CCR7的表达与VEGF-C的表达呈正关联(rp =0.409,P=0.003).结论:ESCC组织中HIF-1α、CCR7及VEGF-C蛋白的表达上调可能促进了ESCC的侵袭与淋巴结转移.
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HIF-1α、MMP-1和 VEGF-C 在喉鳞癌组织中的表达及其与颈转移的相关性研究
目的：比较声门上型喉鳞状细胞癌与癌旁正常组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达，探讨其与临床病理参数、颈淋巴转移之间的关系以及三者之间的相关性。方法免疫组化 SP 法检测30例声门上型喉鳞状细胞癌及其癌旁正常组织中 HIF-1α、MMP-1和VEGF-C 的表达情况，并对喉癌组织按年龄、T 分期、病理分级、淋巴转移进行分组，探讨三者与各临床病理参数、颈淋巴转移之间的关系。结果喉鳞状细胞癌组织中 HIF-1α、MMP-1、VEGF-C 高表达明显高于癌旁正常组织，差异有统计学意义（P <0.05），在癌组织中，三者表达均与病理分级、TNM 分期有关（ P <0.05），与年龄无关（ P >0.05），三者在淋巴结转移组中的高表达率明显高于未转移组，HIF-1α和 VEGF-C、HIF-1α和 MMP-1、MMP-1和VEGF-C 均呈正相关。结论喉鳞癌中 HIF-1α、MMP-1、VEGF-C 的高表达与颈淋巴转移密切相关，三者可能成为预测喉鳞癌转移和预后的生物学指标。
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雌激素对失血性休克犬肾功能的影响
目的：观察雌激素(Estradiol,E2)对失血性休克(Hemorrhagic shock,HS)犬肾功能的影响。方法：健康成年雄性犬10只，随机分为2组：HS模型组（HS组）、雌激素治疗组（E2组），每组5只，采用股动脉放血复制失血性休克犬模型，休克60min后行液体复苏，E2组同时给予雌激素治疗。连续监测血流动力学参数，检测血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）和肾组织缺氧诱导因子-lα(HIF-lα)水平，HE染色后观察肾组织病理学改变，并采用Paller评分法评估肾小管损伤程度。结果：与HS组比较，E2组血清SCr、BUN水平和肾小管Paller评分均下降，E2组肾组织HIF-lα表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：E2能减轻HS犬肾脏的病理损害，对肾功能有一定的保护作用，其机制可能与E2上调HIF-lα表达水平有关。
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金雀异黄酮对体外培养成骨细胞抗缺氧的机制研究
目的:观察金雀异黄酮对缺氧成骨细胞的抗缺氧作用.方法:以大鼠成骨细胞为材料,用三气培养箱建立缺氧模型.设常氧对照组、缺氧对照组和含不同浓度金雀异黄酮的缺氧加药组.比较各组缺氧36 h后细胞活力、ROS含量、细胞凋亡、细胞周期、PCNA表达、iNOS活性和钙化结节面积等,荧光定量PCR检测HIF-1α、BCL-2及Caspase-3 mRNA的表达.结果:金雀异黄酮显著提高缺氧成骨细胞存活率、G1期细胞百分比、钙化结节面积、HIF1α和BCL-2 mRNA的表达水平,降低凋亡、ROS含量、PCNA表达量、iNOS酶活性和Caspase-3 mRNA表达.结论:金雀异黄酮能保护缺氧成骨细胞并促进其分化.
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缺氧诱导因子-1α和血管生成拟态在宫颈癌中表达的变化及其意义
目的 探讨缺氧诱导因子-lα(HIF-lα)和血管生成拟态(VM)在宫颈癌中的表达及其临床意义.方法 收集2016年1~12月深圳市妇幼保健院收治的宫颈癌患者,其中宫颈上皮内瘤变(CIN)20例,宫颈鳞癌Ⅰ期20例(Ⅰ期组),宫颈鳞癌Ⅱ期15例(Ⅱ期组),正常宫颈组织16例作为对照组,免疫组化法检测各组宫颈组织中HIF-lα和VM的表达,分析HIF-lα和VM在不同期别和临床病理特征宫颈癌中的表达.结果 HIF-lα和VM在对照组、CIN组、Ⅰ期组和Ⅱ期组宫颈组织中表达阳性率逐渐升高,分别为0、5.0%、30.0%、73.3%和0、15.0%、45.0%、80.0%,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05);癌栓阳性和肿瘤直径>4 cm患者的HIF-lα阳性率分别69.20%和76.9%,明显高于癌栓阴性和肿瘤直径<4 cm患者(分别为27.3%和31.8%),差异均具有统计学意义(P<0.05);癌栓阳性和肿瘤直径>4 cm患者VM的阳性率分别83.3%和53.8%,明显高于癌栓阴性和肿瘤直径<4 cm患者(分别为24.1%和18.2%),差异均具有统计学意义(P<0.05);淋巴结阳性和癌细胞中低分化患者的HIF-lα和VM表达均高于淋巴结阴性和癌细胞高分化患者,但其差异无统计学意义(P>0.05).结论 HIF-lα和VM表达随宫颈癌分期逐渐升高,并与癌栓阳性和肿瘤直径>4 cm相关,检测HIF-lα和VM对提高宫颈癌的诊治具有重要的临床意义.
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缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白1在子宫内膜腺癌中的表达与临床意义
目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-lα)及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)在子宫内膜腺癌中的表达,分析临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法,分别检测14例正常子宫内膜组织、15例子宫内膜不典型增生组织及56例子宫内膜腺癌组织中HIF-lα和GLUT1的表达.结果 HIF-lα和GLUT1在正常子宫内膜组织不表达和少量表达,而在子宫内膜不典型增生组织及子宫内膜腺癌均有表达,三者比较差异有统计学意义(均P＜0.05);HIF-lα和GLUT1的阳性表达强度有随FIGO手术病例分期、肌层浸润、淋巴结转移增加而增加的趋势(P＜0.05).HIF-lα蛋白与GLUT-1的表达呈正相关(r=0.874,P＜0.05).结论 HIF-lα和GLUT1在正常子宫内膜到子宫内膜不典型增生再发展到子宫内膜腺癌的过程中表达逐渐增高,并具有相关性,推测二者可能在子宫内膜病变由良性到恶性的过程中,以及恶性肿瘤的进展过程中起了一定的协同作用.
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SDF－1α通过 p38MAPK－HIF－1α通路加强卵巢癌细胞转移的机制探讨
目的：明确缺氧诱导因子－lα（ HIF－1α）在基质细胞衍生因子－1α（ SDF－1α）调控的卵巢癌细胞迁移中的作用及其机制。方法采用免疫组化分析HIF－1α在卵巢癌组织中的表达水平；将HIF－1αsiRNA转染SKOV3卵巢癌细胞，分别用SDF－1α和SDF－1α＋SB203580处理，用RT－PCR及western blotting分析HIF－1α、p38MAPK的表达水平。结果免疫组化分析表明，HIF－1α在卵巢癌组织中高表达，同时SDF－1α可明显诱导HIF－1α的mRNA及蛋白水平的表达；当用HIF－1αsiRNA转染后，细胞中HIF－1α的表达水平明显下降。当用通路抑制剂SB203580处理后，SDF－1α诱导的HIF－1α水平明显降低。结论 SDF－1α可通过p38MAPK－HIF－1α通路来调控卵巢癌细胞的迁移。因此，该研究将为卵巢癌的防治提供新的研究方向。
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胎盘组织中HIF-1α的表达与血清sFlt-1,sEng水平在子痫前期的作用研究
目的 探讨胎盘组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达和血清中可溶性Endoglin(sEng)、可溶性血管内皮细胞生长因子受体-1(sFlt-1)水平在子痫前期发病机制中的作用.方法 采用免疫组化SABC法检测20例正常晚期妊娠孕妇(对照组)和35例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度16例、重度19例)胎盘组织中HIF-1α的表达;采用酶联免疫吸附实验的方法检测其血清中sEng和sFlt-1水平.结果 ①轻、重度子痫前期组中HIF-1α在合体滋养细胞的表达显著高于对照组(H=19.3,P<0.05;H=23.1,P<0.01).②轻、重度子痫前期组血清sEng,sFlt-1浓度分别为(4.39±0.48) ng/ml,(5.61±0.66) ng/ml;(22.69±5.38) μg/L,(30.15±5.43) μg/L,均显著高于对照组(1.71±0.27) ng/ml,(6.61±2.43) μg/L,差异具有统计学意义(t=21.25,P<0.01;t=24.47,P<0.01);(t=11.96,P<0.01;t=17.63,P<0.01).重度组高于轻度组(t=6.17,P<0.01;t=4.06,P<0.01).③子痫前期胎盘组织中HIF-1α表达与血清sEng,sFlt-1水平呈正相关(r=0.76,P<0.01;r=0.87,P<0.01).结论 HIF-1α和sEng,sFlt-1共同参与子痫前期的病理生理过程,并与病情严重程度有一定关系.
