首页 > 文献资料
-
针灸预处理对心肌缺血再灌注损伤兔不同时间热休克蛋白27、70、90表达的影响
目的:探讨针灸预处理诱导热休克蛋白(HSP)表达对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)兔延迟保护作用的机制.方法:新西兰大耳白兔随机分为假手术组、模型组、电针组和艾灸组,每组18只,各组按预处理后不同时相再分为0、24、48h3个亚组,每组6只.电针组及艾灸组造模前电针或艾灸“内关”,每次20 min,每日1次,共治疗5d.各组于预处理5d后0、24、48 h行冠脉结扎法复制心肌缺血再灌注模型.HE染色观察左心室肌病理变化,电镜观察左心室肌超微结构变化.免疫组化法检测兔心肌组织HSP 27、HSP 70、HSP 90的表达.结果:各组预处理家兔的HE染色及超微结构结果显示,与假手术组比较,模型组心肌损伤较严重,肌纤维紊乱,部分溶解,小血管扩张;与模型组比较,电针组及艾灸组心肌损伤较轻,肌纤维大多正常,肌丝间局灶性水肿减少,线粒体丰富.在不同时相,模型组心肌HSP 27、HSP 70、HSP 90表达与假手术组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).在0h时,各组兔心肌HSP 27表达差异均无统计学意义(P＞0.05);在24、48 h时,电针及艾灸组比模型组的心肌HSP 27表达均明显增强(P＜0.05,P＜0.01).在0、24 h时,艾灸组的HSP 70表达均高于模型组(P＜0.05,P＜0.01),而且在24 h时,艾灸组HSP 70的表达明显高于电针组(P＜0.05);在48 h时,艾灸组及电针组HSP 70的表达均明显高于模型组(P＜0.01).0、24、48 h各组的HSP 90表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:电针与艾灸“内关”对兔MIRI均有预保护作用,可减轻兔心肌组织病理改变,其作用与心肌组织HSP 27及HSP 70表达的增强有关,且这种预保护效应存在时间差异,体现在24、48 h时更为明显,提示电针与艾灸均具有延迟性保护作用.
-
难治性肾病综合征糖皮质激素受体及HSP90与中医证型的相关性研究
目的:探讨难治性肾病综合征(RNS)糖皮质激素受体α、β(GRα、GRβ)、热休克蛋白90(HSP90)的表达及其与中医证型的相关性.方法:选择原发性肾病综合征(PNS)患者80例,其中激素敏感组(SSNS)25例、RNS组55例,另设健康对照组15名,应用免疫细胞化学法检测外周血单个核细胞(PBMC)GRα、GRβ表达,流式细胞术测定HSP90含量,分析各组GRαt、GR β、HSP90的表达与激素敏感性的关系;进而将RNS组按辨证标准分为脾肾阳虚证21例,气阴两虚证19例,湿热证15例,分析上述指标与中医证型的相关性.结果:①与健康对照组比较,PNS组GRα显著下降(P＜0.05),GR β、HSP90均显著升高(P＜0.01,P＜0.05);②RNS组GRβ、HSP90高于SSNS组(P＜0.01,P＜0.05),GR α/GR β低于SSNS组(P.＜0.05);③RNS三个中医证型组中,GRα表达无显著性差异;GRβ的表达呈脾肾阳虚证＜气阴两虚证＜湿热证(P＜0.05);GRα/GR β呈脾肾阳虚证＞气阴两虚证＞湿热证(P＜0.05);3组中HSP90以湿热证组高(P＜0.05),气阴两虚证组、脾肾阳虚证组无显著性差异.结论:GRβ及HSP90参与了RNS的发生与发展;湿热证者易发展为RNS,气阴两虚证者次之.
-
基于HSP90-GR作用研究淫羊藿和女贞子对激素局部干预哮喘大鼠的影响
目的:研究淫羊藿和女贞子配伍对激素局部干预哮喘大鼠肺热休克蛋白90(HSP90)、糖皮质激素受体(GR)的影响作用.方法:SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组(N组)、哮喘模型组(A组)、布地奈德组(GC组),淫羊藿女贞子组(YN组),淫羊藿女贞子合布地奈德组(YN+GC组).卵蛋白致敏及激发建立大鼠哮喘模型,YN+GC组以布地奈德雾化4周治疗,同时配合灌胃淫羊藿女贞子煎液;GC组、YN组分别单用相应药物治疗.免疫细胞化学检测肺泡灌洗液(BALF)中HSP90蛋白表达,免疫组织化学法检测肺组织HSP90蛋白表达,实时定量PCR法检测肺组织HSP90及GR的mRNA表达.结果:与N组比较,A组大鼠肺组织HSP90蛋白、GR αmRNA及GR α/HSP90mRNA比值显著降低(P＜0.01,P＜0.05);与A组比较,YN组显著上调肺GR α mRNA表达(P＜0.01),YN+GC组上调肺HSP90蛋白及mRNA与GRα mRNA表达(P＜0.05,P＜0.01);与GC组比较,YN+GC组可显著上调BALF及肺组织中HSP90蛋白表达,肺HSP90及GR α mRNA表达及GR α/HSP90mRNA比值(P＜0.05,P＜0.01).结论:改善GR-HSP90作用可能是平补阴阳药对淫羊藿和女贞子协同激素局部给药发挥作用的机制之一.
-
日本三角涡虫热休克蛋白90基因克隆及其表达模式
目的 克隆日本三角涡虫热休克蛋白90(Djhsp90)基因,并对其在不同应激条件下表达模式进行分析.方法 采用PCR技术克隆日本三角涡虫hsp90 cDNA全长序列和基因组DNA序列,利用生物信息学软件对其序列进行分析,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测其在再生、饥饿和热激过程中的表达模式.结果 Djhsp90 cDNA全长2354 bp,含有2148 bp的开放阅读框(ORF),编码715个氨基酸,含有真核生物HSP90家族蛋白的5个标签序列和末端高度保守序列MEEVD.基因组DNA测序表明,该基因仅含有1个内含子(48 bp),内含子的5'-和3'-剪切位点符合经典的“GT-AG”法则.涡虫切断后1d Djhsp90的表达量显著增加,2d达到高峰,3d后逐步下降到正常水平.持久饥饿过程中Djhsp90的表达量维持在较高水平.提高培养温度能显著诱导Djhsp90的表达,且涡虫头部对热效应敏感.结论 我们成功克隆了日本三角涡虫hsp90基因,并证实切割、饥饿和热激能诱导其表达上调.
关键词： 热休克蛋白90 基因克隆 实时荧光定量聚合酶链反应 涡虫 -
HSP90抑制剂17-DMAG对白血病细胞株K562增殖及凋亡的影响
目的:通过HSP90抑制剂17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)作用于白血病K562细胞株,观察HSP90在白血病K562细胞增殖与凋亡中的作用.方法:收集K562细胞,应用HSP90抑制剂17-DMAG作用于K562细胞株,通过半定量PCR检测HSP90的基因表达,WST技术检测17-DMAG对细胞增殖的影响,An-nexin V流式细胞术检测细胞凋亡.结果:17-DMAG处理K562细胞不同时间后,K562细胞的生长明显受抑,且呈时间依赖性(48 h)(r=0.9918)和剂量依赖性(3.2 μmoL/L)(r=0.9999) (P ≤0.01);不同浓度17-DMAG处理K562细胞不同时间后,K562细胞明显凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.9903)(P≤0.01);不同浓度17-DMAG作用于K562细胞48 h后,HSP90 mRNA表达明显减少,17-DMAG下调HSP90 mRNA的表达,且呈剂量依赖性(r=0.9227)(P≤0.01).结论:HSP90抑制剂17-DMAG能够抑制白血病K562细胞的增殖,诱导K562细胞凋亡,这为17-DMAG用于白血病的治疗提供实验依据.
-
HSP90抑制剂17-DMAG对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖和凋亡的影响
目的:探讨热休克蛋白90 (HSP90)抑制剂17-二甲胺乙胺基-17去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖及凋亡的影响.方法:收集Jurkat细胞,应用HSP90抑制剂17-DMAG作用于细胞株,通过半定量PCR检测HSP90的基因表达,WST技术检测17-DMAG对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡.结果:不同浓度17-DMAG作用于Jurkat细胞48 h后,HSP90 mRNA表达明显减少,且呈剂量依赖性(r=0.9530,P≤0.01);17-DMAG处理Jurkat细胞48 h的IC5o为3.17 μmol/L,作用于Jurkat细胞后抑制Jurkat细胞增殖(r=0.9903,P≤ 0.01),促进Jurkat细胞凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.9876,P≤0.01).结论:HSP90抑制剂17-DMAG能够抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的增殖并诱导其凋亡.
-
PD-L1、HSP90及HSP90α在急性白血病患者中表达及其意义
目的:探讨PD-L1、热休克蛋白90(HSP90)和热休克蛋白α(HSP90α)在急性白血病(AL)患者不同类型及不同疾病阶段表达情况及其临床意义.方法:选取2013年1月至2016年10月医院收治的84例急性白血病患者和选择体检健康者20例作为对照组,收集他们的血清及骨髓样本,应用ELISA法测定HSP90、HSP90α蛋白水平,流式细胞术检测PD-L1表达,分析患者临床转归与PD-L1、HSP 90和HSP90α表达的关系.结果:各组AL患者PD-L1阳性率、HSP90和HSP90α蛋白表达水平均显著高于对照组(P＜0.05),缓解期患者的PD-L1阳性率、HSP90和HSP90α蛋白水平均低于初治期患者(P＜0.05),复发患者的PD-L1阳性率和HSP90及HSP90α蛋白水平均高于初治及缓解期患者(P＜0.05),初治AML与初治ALL患者的PD-L1阳性率、HSP90蛋白水平无显著性差异(P＞0.05),初治AML患者HSP90α蛋白水平低于初治ALL患者(P＜0.05);患者经治疗后,未缓解患者PD-L1阳性率、HSP90及HSP90α蛋白水平显著高于完全缓解患者(P＜0.05);未复发患者化疗过程中HSP90α蛋白表达逐渐降低,造血干细胞移植术后患者HSP90α蛋白表达低,复发前HSP90α蛋白表达增加,复发后水平达高峰.结论:PD-L1、HSP90和HSP90α在急性白血病发展过程中发挥重要作用,可作为评估患者临床疗效及预后的参考指标.
-
热休克蛋白90与戊型肝炎病毒重组衣壳蛋白P239相互作用的初步研究
目的 对前期研究中所筛选出的能够与戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)重组衣壳蛋白颗粒P239存在特异性的相互作用的蛋白进行分析验证.方法 使用pull-down、MALDI-TOF-MS、免疫共沉淀技术及免疫荧光技术对与P239有潜在相互作用的蛋白进行鉴定和进一步分析.结果 MALDI-TOF-MS及免疫共沉淀技术,均表明该蛋白为热休克蛋白90(HSP90)并与P239相互作用.随后,对P239进入细胞的过程中胞内HSP90蛋白量及其分布的变化做了初步研究.发现虽然HSP90在蛋白总量上并没有发生明显的变化,但其定位却伴随着P239在胞内的迁移发生了由细胞膜向细胞核核周的转移.结论 HSP90可能参与了P239入胞后的转运并介导了HEV入胞后向效应细胞器的转运,为研究HEV的感染机制及对HEV的预防和控制提供了有益的线索.
-
热休克蛋白90在急性肺栓塞患者血浆刺激内皮细胞一氧化氮表达中的作用
目的 探讨急性肺血栓栓塞(PTE)患者血浆刺激人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达过程中热休克蛋白90(Hsp90)的作用.方法 分别用正常人血浆和PTE患者血浆孵育HUVEC,另设哥尔德霉素干预组,硝酸还原酶法测定各组细胞培养上清NO浓度,RT-PCR检测eNOS及Hsp90 mRNA的表达,放射免疫法测定cGMP的浓度.免疫共沉淀方法检测各组Hsp90和eNOS蛋白的共表达状况.结果 PTE血浆处理组eNOS及Hsp90 mRNA表达水平较正常血浆对照组增强;NO浓度亦明显高于正常对照组及哥尔德霉素处理组[(16.62±3.14)μmolL/ vs(5.16±1.98) μmol/L,(9.34±1.09) μmol/L],差异均具有统计学意义(t=13.2,P＜0.01;t=15.6,P＜0.01);PTE血浆处理组cGMP浓度亦明显高于正常对照组及哥尔德霉素处理组[(3.76±1.04) pmol/L vs (2.01±0.98) pmol/L,(1.87±0.99) pmol/L],差异均具有统计学意义(t=11.6,P＜0.01;t=12.1,P＜0.01);免疫共沉淀检测结果显示Hsp90和eNOS蛋白共表达.结论 PTE患者血浆可以刺激血管内皮细胞Hsp90 mRNA及eNOS表达上调,抑制Hsp90可下调eNOS生物活性从而减少NO的产生.
-
金黄色葡萄球菌对U937细胞HSP90蛋白表达的影响
目的 探讨金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡以及热休克蛋白90(HSP90)在这一过程中的作用.方法 当U937:金葡菌分别为0,1:5,1:10,1:20,1:50和1:100时,培养30min;当U937:金葡菌为1:20时,分别培养0,15,30,60和90 min.采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测U937细胞凋亡率;采用Western blot方法检测HSP90蛋白的表达.结果 U937细胞凋亡率随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐增高;HSP90的表达随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐升高.结论 金葡菌诱导的U937的凋亡可能与HSP90蛋白表达的改变有关,并且具有感染时间及细菌浓度依赖性.
-
胰岛素依赖型糖尿病大鼠心肌对缺血再灌注的耐受性
目的 研究胰岛素依赖型糖尿病大鼠心肌对缺血再灌注损伤的耐受性及其机制.方法 健康雄性SD大鼠以链脲佐菌素一次性腹腔注射破坏胰岛β细胞,造成胰岛素缺乏及高血糖,对照组腹腔注射等容积溶剂.注射链脲佐菌素4周后取心脏进行体外灌注,心脏缺血30 min后再灌注30 min,记录心功能及心律失常变化.实验分为对照组、糖尿病组、糖尿病一氧化氮合酶(NOS)抑制剂组,热休克蛋白90(hsp90)抑制剂组.一氧化氮合酶及hsp90抑制剂于心脏平衡灌注时加入灌注液中实验全程连续灌注.收集冠脉流出液测定肌酸激酶(CK),实验结束时测定心肌一氧化氮代谢产物(NOx)、热休克蛋白70(hsp70)及hsp90.结果 与正常大鼠相比,糖尿病大鼠心脏基础收缩功能减弱,但缺血再灌注后心脏收缩及舒张功能较对照组显著增强.糖尿病心脏再灌注时心律失常及冠脉流出液CK含量较对照组显著减少,心肌NOx含量及hsp90显著增高,hsp70无显著变化.Hsp90抑制剂完全逆转了糖尿病心肌对缺血再灌注的耐受性,一氧化氮合成酶抑制剂使再灌注早期心律失常增加但对心脏功能无显著影响.结论 早期胰岛素依赖型糖尿病大鼠心脏对缺血再灌注损伤的耐受性增强,其机制可能与心肌hsp90与NO合成增加有关.
关键词： 胰岛素依赖型糖尿病 心肌缺血/再灌注损伤 心律失常 心功能 热休克蛋白90 -
产前缺氧降低7月龄子鼠心脏舒张功能及其相关分子机制
目的 研究产前缺氧对7月龄子鼠心脏舒张功能影响及其相关分子机制.方法 同期怀孕的SD孕鼠随机分为对照组(21％O2,n=5)、缺氧组(10％ O2,n=5),于妊娠第7天开始相应的干预、记录,至妊娠第21天结束,自然分娩.每窝随机留2只雄性新生鼠饲养,每组共10只雄性新生鼠(n=10),饲养至7月龄.测定7月龄子鼠心脏舒张功能,利用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测7月龄子鼠心肌组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、热休克蛋白90(Hsp90)表达,利用同位素方法测定内皮型一氧化氮合酶活性.结果 与对照组比较,产前缺氧组7月龄子鼠左心室舒张末压(LVEDP)[(7.02±0.68)比(6.05土0.97)mm Hg]升高,左心室收缩末压(LVESP)[(60.72±7.76)比(69.37±6.38) mm Hg]、左心室内压大上升速率(+dp/dtmx)[(5462±77)比(5545±62)mm Hg/s]和左心室内压大下降速率(-dp/dtmax)[(4202±83)比(4285±41)mm Hg/s]降低(均P＜0.05);心肌组织eNOS(0.41±0.21比1.00±0.25)、Hsp90(0.60±0.22比1.00±0.27) mRNA表达降低(均P＜0.05);心肌组织eNOS(0.030±0.002比0.050±0.003)、Hsp90 (0.015±0.001比0.030±0.002)蛋白表达降低(均P＜0.05);心肌组织eNOS活性[(3059±309)比(4431±357)计数/(min·μg)]降低(P＜0.05).结论 产前缺氧通过降低7月龄子鼠心肌组织eNOS和Hsp90表达及活性,降低心脏舒张功能.
-
HSP90抑制剂17-DMAG对胃癌细胞株SGC-7901增殖及凋亡的影响
目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响.方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,以不同浓度的17-DMAG处理后采用MTT法检测SGC-7901细胞的生长抑制情况,流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布,流式细胞仪及Annexin V-FITC试剂盒监测17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.结果:不同浓度的17-DMAG对人胃癌细胞SGC-7901有明显的生长抑制作用,各组之间比较(P＜0.01),且呈时效量效依赖关系(F=241.313,246.856,均P＜0.001).17-DMAG作用24 h后胃癌细胞株SGC-7901呈现G2/M期阻滞,试验组与对照组比较(F=231.991,P＜0.001),呈浓度依赖关系.17-DMAG处理胃癌细胞SGC-7901 24 h早期凋亡细胞增加,48 h晚期凋亡细胞增加.结论:17-DMAG可明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,使胃癌细胞SGC-7901阻滞于G2/M期,诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡.
-
阿托伐他汀通过促进热休克蛋白90表达减少急诊经皮冠状动脉介入治疗术后对比剂肾病的发生率
目的：探讨高剂量阿托伐他汀通过促进热休克蛋白90（HSP90）表达，减少急诊经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后患者对比剂肾病的发生及可能的机制。方法：入选158例急性ST段抬高型心肌梗死行急诊PCI的患者，随机分为高剂量组（80例，术前给予阿托伐他汀40 mg）和对照组（78例，术前给予安慰剂），比较阿托伐他汀治疗后两组患者血清肌酐、尿素氮、肌酐清除率，对比剂肾病发病率，尿a1微球蛋白、血浆丙二醛、超氧化物歧化酶、一氧化氮、HSP90及其mRNA表达量的变化。结果：与对照组比较，高剂量组术后血清肌酐[（68.92±8.80）μmol/L vs (77.25±13.36)μmol/L]、血浆丙二醛[(3.88±0.53) nmol/L vs (4.08±0.52) nmol/L]、尿α1微球蛋白水平[（1.38±0.36） mg/dl vs (1.89±1.13）mg/dl]均降低；血清肌酐清除率[(89.71±9.85) ml/min vs (77.28±13.78) ml/min]、血浆超氧化物歧化酶[(129.52±30.63) U/ml vs (117.66±27.98) U/ml]、一氧化氮水平[(66.23±29.26)μmol/gprot vs (55.12±27.43)μmol/gprot]均升高，差异均有统计学意义（P均<0.05）；高剂量组术后血浆HSP90的浓度[(1259.83±121.17) pg/ml vs (1195.0±127.65) pg/ml]和血浆HSP90的mRNA相对表达量(0.466±0.158 vs 0.224±0.278)均较对照组升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。高剂量组对比剂肾病发生率（2.5%）低于对照组（10.3%），两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：急诊PCI术前强化阿托伐他汀治疗可减少对比剂肾病的发生；阿托伐他汀可能通过促进HSP90表达，增加一氧化氮产生，改善血管内皮细胞功能、抗氧化应激来保护肾功能，减少对比剂肾病的发生。
关键词： 经皮冠状动脉介入治疗 阿托伐他汀 对比剂肾病 热休克蛋白90 一氧化氮 -
哮喘患者外周血单个核细胞中热休克蛋白90和糖皮质激素受体mRNA的表达
目的探讨热休克蛋白90(HSP 90)和糖皮质激素受体(GR)mRNA在糖皮质激素敏感型(SS)、依赖型(SD)和抵抗型(SR)哮喘中的表达及其在SR哮喘发病中的作用.方法采用逆转录-聚合酶链(RT-PCR)的方法分别测定正常组(10名)、SS哮喘组(10例)、SD哮喘组(5例)和SR哮喘组(6例)患者的外周血单个核细胞(PBMC)中GR和HSP 90 mRNA的表达,并在体外用白细胞介素2(IL-2)、IL-4分别和联合刺激上述细胞观察其受刺激后GR和HSP 90 mRNA表达的改变情况.结果 SR哮喘组患者的GR和HSP 90 mRNA表达水平高,分别为0.730±0.171、1.122±0.165,SS哮喘组次之,分别为0.359±0.350、0.885±0.250,SD哮喘组低,分别为0.017±0.008、0.078±0.039.正常组有一定表达,分别为0.052±0.013、0.362±0.101.GR和HSP 90 mRNA的表达在各组间作相互比较,差异有显著性(P均<0.05).正常组、SS、SD和SR哮喘组HSP 90/GR的比值分别为7.15±1.84、8.39±7.95、5.51±3.30、1.57±0.18,SR哮喘组HSP 90/GR比值与前三组比较,差异有显著性(P<0.05).IL-2和IL-4联合刺激可使SS、SD和SR哮喘组GR mRNA表达增强和SS、SD哮喘组HSP 90 mRNA表达增强,却不能使SR哮喘组HSP 90 mRNA表达增强.结论 SR哮喘组中HSP 90 mRNA表达相对不足造成HSP 90/GR比值降低可能是SR哮喘组形成的原因之一,IL-2和IL-4联合应用对GR和HSP 90 mRNA表达的不同调节作用可能是形成SR哮喘组HSP 90/GR比值降低的原因之一.
-
17-DMAG体外对结肠癌HT-29细胞增生和凋亡的影响
目的 观察17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamyein,17-DMAG)对人结肠癌HT-29细胞增生抑制及诱导其凋亡的作用.方法 用CCK-8检测17-DMAG对结肠癌HT-29细胞增生的影响；DAPI染色在倒置荧光显微镜下观察17-DMAG作用于HT-29细胞24 h后细胞核的形态；AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞检测细胞凋亡率；免疫印迹实验分析Caspase-3蛋白表达水平变化.结果 17-DMAG呈时间-剂量-依赖性抑制HT-29细胞增生.0.1μmol/L、0.25μmol/L 、0.5μmol/L、1.0μmol/L、2.5μmol/L和0.5μmol/L作用于HT-29细胞24 h后,细胞增生抑制率分别为(14.36±0.95)％、(22.17±1.15)％、(28.45±1.16)％、(35.04±1.58)％、(46.85±2.44)％和(57.19±2.06)％；作用48h后,细胞增生抑制率分别为(20.80±1.17)％、(27.55±0.65)％、(33.33±1.23)％、(46.20±4.76)％、(55.45±4.47)％和(61.75±2.72)％；作用72h,细胞增生抑制率分别为(29.62±2.27)％、(39.19±1.74)％、(44.29±2.00)％、(50.66±2.17)％、(58.84±3.18)％和(70.74±2.65)％.DAPI染色倒置荧光显微镜观察0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L与2.5μmol/L的17-DMAG作用HT-29细胞24h,均可见到细胞凋亡的改变.AnnexinV-FITC双染法检测结果显示,正常对照组HT-29细胞24h的自然总凋亡率(早期+晚期)为(2.72±0.57)％,0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L和2.5μmol/L 17-DMAG干预24 h后细胞总凋亡率分别为(5.38±0.46)％、(6.88±0.52)％、(10.44±0.32)％与(17.87±4.66)％,不同浓度组的细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P＜0.05).17-DMAG药物作用HT-29细胞24h,随着药物剂量的增加,cleaved Caspase-3的表达有增加趋势.结论 17-DMAG体外呈时间-剂量依赖性抑制HT-29细胞增生,诱导其通过Caspase-3途径凋亡.
-
卡马西平促进乳腺癌SKBR-3细胞中人表皮生长因子受体-2的降解
目的 探讨卡马西平对乳腺癌细胞SKBR-3中人表皮生长因子受体-2(HER-2)表达的影响及其机制.方法 分别用卡马西平、赫赛汀、17烯丙胺-17脱甲氧格尔德霉素(17-AAG)处理乳腺癌细胞SKBR-3,通过Western blot检测HER-2蛋白的表达;通过RT-PCR检测HER-2 mRNA的表达;通过免疫沉淀检测热休克蛋白90(HSP90)的分子伴侣功能及乙酰化水平;通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性.结果 10μmol/L卡马西平处理即可降低乳腺癌细胞SKBR-3中HER-2蛋白水平,100μmol/L卡马西平则在蛋白和mRNA水平均抑制HER-2的表达.卡马西平处理可以使HSP90乙酰化水平升高,并且破坏HSP90的分子伴侣功能.卡马西平对赫赛汀的促HER-2降解作用有协同作用.100 μmol/L卡马西平+290μg/ml赫赛汀处理组、100μmol/L卡马西平+1μmol/L17-AAG处理组的细胞增殖率分别为27.8%±3.0%和26.9%±2.8%,分别明显低于单独赫赛汀或17-AAG处理组(P均＜0.01).结论 卡马西平可能通过破坏HSP90的分子伴侣功能、提高HSP90的乙酰化水平,降低了乳腺癌细胞SKBR-3中HER-2的表达水平,并且与赫赛汀和17-AAG有协同作用.卡马西平在肿瘤治疗中有潜在的应用价值.
-
细胞表面热休克蛋白90在人前列腺癌细胞中的表达及其对侵袭能力的影响
目的 观察细胞表面热休克蛋白90(HsPgo)在高侵袭性人前列腺癌细胞PC3中的表达,及其对细胞侵袭能力的影响,探讨其可能的作用机制.方法 采用免疫荧光染色和膜蛋白生物素标记法,检测HSPgO在PC3细胞表面的表达;采用Boyden小室侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变;采用Western blot和免疫共沉淀法,检测局部黏着斑激酶(FAK)、c-Src蛋白磷酸化水平及其两者相互作用的变化;采用RNA干扰技术下调FAK蛋白表达,应用抑制剂PP2抑制Src激酶活性,观察细胞FAK/Src信号通路及其侵袭能力的改变.结果 PC3细胞表面表达HSP00.HSPg0特异性抗体可显著降低PC3细胞体外侵袭能力,且伴有FAK tyr 397、576、577、925及c-Src tyr 416磷酸化水平的显著下降,以及FAK与c-Src蛋白相互结合的明显减弱.经小分子干扰RNA(siRNA)有效干扰FAK表达,或采用PP2抑制Src激酶活性,均可显著抑制PC3细胞的侵袭性,但同时联合应用抗HSPg0抗体,未有协同作用.小室侵袭实验结果显示,PC3细胞经抗HSPg0抗体作用后,穿膜细胞数为(39.57 4±7.54)个,而对照组和lgG对照组分别为(105.70±12.16)个和(110.60 4±11.61)个,差异均有统计学意义(P<0.001).结论 细胞表面HSP90可经FAK/c-Src信号通路促进体外培养前列腺癌细胞的侵袭,提示其可能是潜在的对肿瘤转移实施防治的一个靶点.
关键词： 前列腺肿瘤 热休克蛋白90 细胞侵袭 FAK/c-Scr信号通路 -
格尔德霉素和环孢素联合常用抗真菌药对阿萨希毛孢子菌临床株体外药敏研究
目的 研究格尔德霉素和环孢素(热休克蛋白90与钙调磷酸酯酶抑制剂)抗阿萨希毛孢子菌活性,及联合常用抗真菌药物后的体外药物敏感性.方法 通过美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的M27-A3肉汤稀释法检测格尔德霉素和环孢素对21株阿萨希毛孢子菌临床株的体外抗真菌活性,棋盘微量液基稀释法检测上述2种抑制剂与5种常用抗真菌药(氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B和卡泊芬净)的相互作用.结果 格尔德霉素对阿萨希毛孢子菌临床株有较好的体外抗真菌活性,而环孢素作用较弱.此外,格尔德霉素和环孢素与5种常用抗真菌药联合使用,均显示具有良好的体外抗阿萨希毛孢子菌协同作用.结论 格尔德霉素和环孢素可以提高常用抗真菌药对阿萨希毛孢子菌的敏感性,提示一种针对侵袭性毛孢子菌病的潜在治疗策略.
-
热休克蛋白90与肿瘤
热休克蛋白90作为分子伴侣参与细胞中众多信号蛋白的构象成熟和功能稳定的调控,而这些信号蛋白的过度表达或突变能促进肿瘤细胞的增殖及存活.抑制热休克蛋白90的功能可促进其底物蛋白通过泛素-蛋白酶体通路降解,从而发挥其抗肿瘤的功效.研究表明,热休克蛋白90抑制剂有明确的抗肿瘤活性,并与肿瘤细胞有更高的亲和力,可选择性地杀伤肿瘤细胞,因而热休克蛋白90已成为肿瘤治疗的一个新靶点.
