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酪氨酸激酶抑制剂研究进展
随着生命科学研究的飞速进展,恶性肿瘤细胞内的信号转导、细胞周期的调、细胞凋亡的诱导、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正在被逐步阐明.以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号转导通路的关键酶作为药物筛选靶点,发现选择性作用于特定靶点的高效、低毒、特异性强的新型抗癌药物-酪氨酸激酶抑制剂已成为当今抗 肿瘤药物研究开发的重要方向.
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汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序功能的研究
汉滩病毒(HTNV)的G1蛋白胞质区尾段包含保守的免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)样基序,该基序与许多重要的免疫受体胞质区ITAM基序同源性较高.为了研究HTNV的G1 ITAM样基序的免疫信号转导功能,首先人工合成了一段保守的酪氨酸残基磷酸化的G1 ITAM样基序多肽,应用体外蛋白激酶共沉淀实验,分别从Jurkat细胞和Raji细胞裂解物中初筛到5~9种与该基序相互作用的磷酸化蛋白或激酶;然后通过突变体分析、体外磷酸化实验和体外激酶共沉淀-免疫印迹分析,进一步确证了G1 ITAM样基序在体外可以与Src家族蛋白酪氨酸激酶(PTK)Lyn、Fyn及其下游Syk家族激酶Syk、ZAP-70相互作用,而这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在.上述研究表明,HTNV G1蛋白胞质区包含一个高度保守的功能性ITAM样基序,该基序在体外可以与TCR和BCR信号转导中关键的PTK相互作用,为进一步探讨HTNV G1蛋白ITAM样基序在肾综合征出血热(HFRS)免疫信号传递中的作用奠定了基础.
关键词: 汉坦病毒 囊膜糖蛋白类 免疫受体酪氨酸活化基序 蛋白酪氨酸激酶 信号转导 -
蛋白激酶C对鼻咽癌CNE-2Z细胞蛋白酪氨酸磷酸化的影响
利用细胞培养、蛋白激酶C(PKC)的抑制剂和免疫细胞化学法,探讨PKC对人低分化鼻咽癌细胞CNE-2Z中磷酸化酪氨酸蛋白分布的影响.结果发现:磷酸化酪氨酸蛋白主要在胞膜(65.2%)与胞浆(85%)表达.作用于PKC调节区的抑制剂sphingosine(SS)(2×10-5 mol/L)与作用于催化区的staurosporine(ST)(2×10-6 mol/L)使其表达减弱、胞膜阳性率分别降低至12.8%和9.0%.提示PKC对CNE-2Z细胞蛋白酪氨酸磷酸化具有调控作用.
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蛋白酪氨酸激酶可能参与胃粘膜损伤后的胃酸分泌变化
胃酸分泌抑制是胃粘膜损伤后的一个重要现象,可能是促进胃粘膜对损伤后快速修复的一个重要因素,研究这一现象的机理有助于加深对胃粘膜损伤后修复病理生理的认识,对提高胃粘膜屏障具有重要的实践意义.
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白细胞介素2致痫与蛋白酪氨酸激酶/信号转导子和转录激活子信号转导途径的关系
目的 研究白细胞介素2(IL-2)致痫与蛋白酪氨酸激酶(Jak)/信号转导子和转录激活子(Stats)信号转导途径的关系.方法用免疫细胞化学方法研究IL-2致痫大鼠脑内蛋白酪氨酸激酶Jak1的表达变化,及预先应用Jak1抑制剂和糖皮质激素干预后,再用IL-2致病后脑内N-甲基-D天门冬氨酸型受体-1(NMDAR-1)和谷氨酸(Glu)的表达变化.结果侧脑室注射IL-2后大鼠出现明显的癫痫发作,其Jak1的表达较对照组明显增强(P<0.01),免疫抑制剂环孢霉索可部分抑制此效应;Jak1抑制剂植物异黄酮和免疫抑制剂糖皮质激素可明显抑制IL-2致痫大鼠的癫痫行为,其NMDAR-1和Glu的表达较IL-2组显著降低(P<0.05).结论在IL-2致癌中,Jak1在其信号转导途径中发挥重要作用.
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黏着斑激酶反义寡核苷酸抑制人胃癌在裸鼠体内生长
黏着斑激酶(FAK)是一种相对分子质量为125 000的非受体型蛋白酪氨酸激酶,具有独特的结构功能特征,在细胞内信号转导中起关键性的作用[1],有胞内第一信号之称. 我们以FAK 基因为靶点,设计其两条反义寡脱氧核苷酸,通过直接注射瘤体的方法,观察其在动物实验中的抑瘤效果.
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Ezrin蛋白及其在妇科恶性肿瘤中的研究进展
Ezrin蛋白又称cytovillin、p81或villn-2,是1981年首先作为表皮生长因子受体蛋白酪氨酸激酶的底物被发现的,于1983年被Bretscher[1]鸡的小肠上皮细胞刷状缘中分离纯化出来并于2004年分别被Khanna等[2]和Yu等[3]利用生物芯片技术证实了其与骨肉瘤及横纹肌肉瘤的转移有关.
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黏着斑激酶与纤维化疾病关系的研究进展
黏附斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是一种胞质非受体蛋白酪氨酸激酶,与酪氨酸激酶2( proline 2 rich tyrosine kinase 2,PYK2)及细胞黏着激酶β(cellular adhesion kinase β,CAKβ)组成黏附斑复合物家族( focal adhesion complex family)[1] ,主要分布在胞质中,在介导细胞黏附、迁移、生存及细胞周期调控等过程中起重要作用.组织和器官的纤维化是一个涉及细胞、细胞因子、细胞外基质及其降解酶类等多个复杂因素的病理生理过程.包括肝纤维化、肺纤维化、增生性瘢痕等.本文将综述近年来其相关研究进展,对FAK 的分子结构及其在纤维化疾病发生过程中的作用加以概括.
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蛋白酪氨酸激酶与一氧化氮合酶活性的变化在胃粘膜损伤修复中的作用和意义
胃粘膜损伤后可迅速修复,及时维持了胃粘膜上皮的完整性,从而避免了损伤向深层发展,研究这一过程的分子机制对提高胃粘膜屏障以及防治胃粘膜病变具有重要的意义.
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乙型和丙型肝炎病毒蛋白对蛋白酪氨酸激酶信号转导的影响
0引言生物细胞每时每刻都在接触着来自细胞内或者细胞外的各种各样信号.信号只是个诱因,生理反应是信号作用于细胞的终结果.相同的信号作用于不同的细胞可以引发完全不同的生理反应;不同的信号作用于同一种细胞却可以引发出相同的生理反应.
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乙型和丙型肝炎病毒蛋白对蛋白酪氨酸激酶信号转导的影响
0引言生物的细胞每时每刻都在接触着来自细胞内或者细胞外的各种各样信号.信号只是个诱因,生理反应是信号作用于细胞的终结果.相同的信号作用于不同的细胞可以引发完全不同的生理反应;不同的信号作用于同一种细胞却可以引发出相同的生理反应.细胞的一切生命活动都与信号有关,信号是细胞一切活动的始作俑者.因此,对信号转导的研究非常重要,非常有用.由于肝炎病毒可以影响细胞信号转导,引起细胞的病变及恶性转化[1],而蛋白酪氨酸激酶是重要的细胞信号转导激酶,因此深入研究二者的相互关系对肝炎病毒的发病机制会有进一步的了解.
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酵母双杂交技术筛选肝细胞中与乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白C-12相互作用蛋白的研究
目的:筛选并克隆人肝细胞中与HBcAg肝细胞结合蛋白C-12新基因相互作用蛋白的基因,进一步探讨HBcAg结合蛋白C-12新基因的生物学功能.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增C-12基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出C-12基因并在酵母细胞中表达,配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-gal的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落21个,其中含金属硫蛋白A2基因的菌落有3个、组织蛋白酶B基因1个、载脂蛋白M基因1个、细胞色素C氧化酶Ⅱ基因3个、人类受体蛋白酪氨酸激酶变异因子基因1个、KH型剪接调控蛋白基因1个、磷脂酰肌醇脱酰酶聚糖Q转录变异因子1基因1个、铁蛋白轻链基因2个、鸟氨酸脱羧酶1基因1个、血液凝固因子Ⅸ基因1个、乙酰乳酸合酶基因1个、钙激活蛋白酶基因1个、核外三磷酸盐双磷脂酰水解酶5基因1个、血浆α-球蛋白抑制因子H4基因1个和未知蛋白基因2个.结论:成功克隆出乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白C-12新基因相互作用蛋白的编码基因,为进一步研究HBcAg在病毒装配、损害肝细胞、感染致病等方面的具体作用提供了新线索.
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血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移与胞浆蛋白酪氨酸激酶的激活
目的探讨血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移与胞浆蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性变化的关系.方法用不同浓度的血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)刺激培养的VSMCs,利用γ-32P同位素参入法测定细胞胞浆PTK活性变化;自制改良的Boyden Chamber检测VSMCs迁移.结果基础状态下可观测到很少量的VSMCs迁移.AngⅡ浓度为1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7和1×10-6mol/L时细胞迁移数分别比对照组升高了3.7、4.6、5.9、6.6和6.3倍,存在组间差异,峰值浓度为1×10-7mol/L.AngⅡ浓度为1×10-10,1×10-9,1×10-8,1×10-7和1×10-6mol/L时胞浆PTK活性分别增高了1.0、1.7、2.4、3.2和2.4倍,峰值浓度为1×10-7mol/L.统计分析显示AngⅡ诱导的VSMCs迁移与胞浆PTK激活效应显著正相关(r=0.96,P<0.01).25 μmol/L、40 μmol/L的PTK抑制剂Genistein均可显著地减少AngⅡ诱导的VSMCs迁移(与单纯1×10-7mol/L AngⅡ组比较,P<0.01).结论激活酪氨酸激酶信号链可能是AngⅡ诱导VSMCs迁移的胞内信号转导机制之一.
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用组织芯片法检测肺癌组织中EphB4、HIF-1α和IGF-Ⅱ的表达状况
Eph家族是蛋白酪氨酸激酶受体家族中的大分支,此家族的许多成员,尤其是EphB4与肿瘤的发生和进展关系密切.缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与机体内缺氧环境的适应有关.胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)是一种促细胞增殖因子.这3种物质在肿瘤的发生、浸润和转移方面扮演了重要的角色.本研究检测了三者在肺癌中的表达情况,以探讨它们与肺癌的关系.
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β1转化生长因子刺激兔耳皮肤瘢痕增生中蛋白酪氨酸激酶活性的变化
目的观察β1转化生长因子(transforming growth factor β1, TGF-β1)对兔耳皮肤瘢痕组织酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性的影响,探讨受体PTK在TGF-β1刺激瘢痕增生中的信号作用.方法在兔耳腹侧伤口外用或瘢痕内注射TGF-β1(5 μg/L),观察瘢痕变化.用32P掺入法测定伤口伤前皮肤、上皮化及其后14、30、45、60 d非增生性瘢痕组织的PTK活性. 结果增生性瘢痕组织的PTK活性[(4.40±1.31)~(4.91±1.32)pmol·min-1·mg-1]高于正常皮肤组织[(2.87±0.96)pmol.min-1·mg-1](P<0.001或0.01),而非增生性瘢痕仅在上皮化时[(2.81±0.87)pmol·min-1·mg-1]高于伤前[(4.35±1.26)pmol·min-1·mg-1](P<0.01),上皮化后,增生性瘢痕的PTK活性均高于非增生性瘢痕(P<0.001或0.01).上皮化前后使用TGF-β1不改变PTK活性(P>0.05),但显著刺激瘢痕增生(P<0.05或0.01).结论TGF-β1没有改变PTK活性,提示TGF-β1不经活化PTK刺激瘢痕增生.
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γ-干扰素对银屑病角质形成细胞蛋白酪氨酸激酶活性的影响
目的 研究γ-干扰素(IFN-γ)对银屑病表皮角质形成细胞蛋白酪氨酸激酶(PTK)的活性的影响,以及PTK(在银屑病发病中的意义.方法 采用无刺激或加入不同浓度IFN-γ刺激后的膜蛋白在催化γ-32P后用闪烁计数仪检测PTK活性.结果 正常表皮组织角质形成细胞膜PTK活性为(1.39±0.46)fmol/mg protein/rain、银屑病皮损为(3.36±1.29)fmol/mg protein/min,两者之间存在显著差异(P<0.01).同时,表皮角质形成细胞膜在不同浓度IFN-γ刺激后,角质形成细胞膜的PTK活性呈剂量依赖性增高,但银屑病组的反应明显高于正常人对照组.结论 银屑病皮损角质形成细胞中PTK活性较正常人为高,且在IFN-γ的刺激下活性均增加,说明IFN-γ对PTK有明显促进作用.
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胆脂瘤上皮细胞增殖及分子调控机制的免疫组化研究
近年来研究表明胆脂瘤细胞的过度增殖行为与信号传导相关的蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)异常激活有关[1],信号传导中涉及细胞周期,G1期的重要调控者周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependen kinase 4,CDK4)和其特异性抑制因子周期蛋白依赖性激酶抑制物p15调控结果对细胞周期产生重要影响,有决定细胞增殖还是凋亡的作用[2],因此,我们用超敏免疫组化技术(ultrasensitive immunohistochemistry,SP)检测胆脂瘤上皮细胞磷酸化PTKs、CDK4、p15的表达水平,报道如下.
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类风湿性关节炎滑膜细胞蛋白酪氨酸激酶的RNA表达水平分析
根据已知的PTKs的氨基酸序列保守区设计简并引物,采用3′快速末端扩增法(3′RACE)扩增了滑膜细胞中PTKs cDNAs的3′末端,然后通过RNA点杂交方法分别观察了这些PTKs在类风湿性关节炎(RA)和骨性关节炎(OA)病人滑膜细胞中的表达水平。结果从RA FLS细胞中共克隆到6种已知PTKs cDNA片段,分别为血小板衍生生长因子受体A (PDGFRA)、胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)、含盘状(discoidin)结构域的受体型酪氨酸激酶(DDR2)、Lyn、Janus激酶1(JAK1)和TYK2。RNA点杂交结果显示,在4例RA病人和2例OA病人的滑膜细胞中都表现为:PDGFRA、IGF-1R 和DDR2在RA滑膜细胞中的表达水平高于OA滑膜细胞,其它几种激酶在两种细胞中的表达水平无明显差别,说明 RA滑膜细胞中至少表达PDGFR、IGF-1R、Lyn、DDR2、JAK1和TYK2等6种PTKs,其中PDGFRA、IGF-1R和DDR2可能与RA滑膜细胞的过度增殖和对软骨的侵蚀性相关。
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运动训练中细胞凋亡研究进展
细胞凋亡是广泛存在于组织细胞的基本生物学现象,是细胞应答不同有害刺激或疾病而发生的一种特殊的细胞自杀行为。通过这种细胞自杀行为,机体消除损伤、衰老、突变的细胞,以维持生理平衡。这是完全不同于坏死的一种死亡途径,通常对机体是有利的。细胞凋亡也存在于发育、成熟和衰老过程之中,同时,在众多的现代疾病中,如肿瘤、AIDS、心肌梗塞等心血管疾病、某些神经疾病等等也可见到。1 细胞凋亡的一般特征[1-6] 当细胞所处环境变化时,外部刺激因素通过一些特殊的信息通路启动凋亡程序。这些信号传导系统涉及到受体的刺激、蛋白激酶/磷酸酶级联的激活、抑制特别基因转录的第二信使的释放等等。Fas家族、蛋白酪氨酸激酶(PTKs)、Ras信号通路、蛋白激酶C(PKC)和Ca、神经酰胺、cAMP、氧自由基和氧化应激等参与了凋亡过程。
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钙离子内流参与利妥昔单抗增强辐射诱导的Raji细胞凋亡
钙离子是细胞生命活动的重要信使,刺激B细胞受体可诱导细胞内钙库的损耗,导致质膜上调控钙库的钙通道激活。已经发现,随着游离钙离子稳态被打破以及CD20与其单克隆抗体(利妥昔单抗)偶联,可导致细胞凋亡。细胞转染CD20后,可增加钙离子通过质膜进入细胞内,证明CD20具有调节细胞周期进程和作为钙离子通道平衡细胞内外钙浓度的功能。在Ramos B细胞中,src家族蛋白酪氨酸激酶的CD20调节刺激提高了细胞内钙离子浓度,并且诱导了Caspase 3的活性。除此之外,利妥昔单抗诱导的CD20和脂筏的高亲和性是钙进入细胞和激活下游凋亡信号的先决条件,与B细胞抗原受体的表达密切相关。在淋巴瘤细胞系中,利妥昔单抗联合辐射能显著提高辐射诱导细胞凋亡,利妥昔单抗通过改变细胞程序性死亡相关蛋白的表达、提高细胞内ROS水平、调节细胞周期等提高淋巴瘤细胞的辐射敏感性。然而,钙离子是否参与辐射和CD20靶向诱导细胞死亡尚不明确。闵凤玲等的“Influx of extracellular calcium participates in rituximab-enhanced ionizing radiation-induced apoptosis in Raji cells”一文,研究了利妥昔单抗和X射线照射后,淋巴瘤细胞内钙离子水平变化与DNA双链断裂和辐射诱导细胞死亡的关系,探讨了利妥昔单抗在辐射诱导细胞死亡中的作用机制。