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转染mFas配体的COS-7细胞诱导Fas+淋巴瘤细胞系(Yac-1)凋亡
本研究探讨通过Fas配体(Fasligand,FasL)-Fas途径进行免疫治疗淋巴瘤的可能性.常规转化pBillneo-mFasL至大肠杆菌DH5α,经扩增、质粒抽提和纯化后,进行限制性内切酶酶切、mFasL基因PCR及其产物DNA测序,以鉴定pBillneo-mFasL内mFasL基因一级结构及插入方向;用脂质体法转染pBillneo-mFasL至猴肾COS-7细胞,G418选择培养后,Western印迹分析外源性mFasL cDNA基因表达水平,将高表达mFasL的COS-7细胞与Fas+小鼠淋巴瘤细胞系Yac-1以不同比例混合培养,5J时后收集悬浮的Yac-1细胞,用膜联蛋白(annexin)V/PI标记后,借助FCM观察细胞凋亡率.结果表明,质粒pBillneo-mFasL的EcoRI酶切获得920bp和7 227bp产物,HomdⅢ酶切获得1 293bp和6 807bp产物,初步证实插入mFasL cDNA片段与理论预计大小一致,并系正向插入;PCR扩增出自起始密码子(ATG)至终止密码子(TAA)后+36bp的mFasL cDNA全长890bp序列,DNA测序结果与基因库已知序列完全一致;pBillneo-mFasL转染COS-7细胞,并经G418选择培养后,Western印迹检测到明显mFasL蛋白质表达;当用这种高表达mFasL蛋白质的COS-7细胞与Fas+Yac-1细胞以1:1,5:1和10:1混合培养5 小时后,用annexin V/PI标记悬浮Yac-1,结果后者凋亡率分别为(22±4.8)%,(32.18±7.8)%和(51.8±5.4)%,与对照转染空质粒pBillneo的COS-7细胞组存在显著差异(P<0.01).结论:通过FasL-Fas抗原途径体外具有明显杀伤高表达Fas抗原的淋巴瘤细胞的作用.
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TCR独特型DNA疫苗诱导抗淋巴系统肿瘤免疫反应的实验研究
本研究观察TCR独特型DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗肿瘤免疫反应的情况.用CEM淋巴瘤细胞系和BALB/c小鼠作模型,RT-PCR扩增CEM细胞系特异性重排的TCR Vβ基因,克隆到真核表达载体pcDNA3中作为DNA疫苗.用肌内注射法免疫小鼠,间接免疫荧光法检测小鼠抗体生成和用MTT法测定CTL活性以检测抗独特型的细胞免疫.结果发现,接种DNA疫苗后第4周开始小鼠血清中即可检测到特异性抗独特型抗体,抗体滴度在第6周达高峰,应用IL-6为免疫佐剂可使抗体滴度明显增高.上述结果表明,TCR独特型DNA疫苗可以诱导小鼠产生抗淋巴瘤细胞的独特型特异性抗体,应用IL-6为免疫佐剂可使这种反应明显增强.
关键词: TCR独特型DNA疫苗 淋巴系统肿瘤 淋巴瘤细胞系 抗肿瘤免疫反应 -
CD30+间变性大细胞淋巴瘤细胞系的建立及其生物学特性
由1例非霍奇金淋巴瘤患者的胸水标本通过液体培养法建立了1株CD30+间变性大细胞淋巴瘤细胞系,并对其生物学特性进行研究.所建立的细胞系可以在含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中持久增殖,倍增时间约为36小时,目前已传代120余次,生长良好,暂命名为SH-1.光镜下细胞形态与典型的CD30+间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma, ALCL)细胞的形态十分类似,电镜下可观察到胞浆内存在较多病毒颗粒.细胞组织化学染色:光镜下过氧化物酶POX阴性,糖原染色PAS阳性,酸性磷酸酶(ACP)呈强阳性;电镜下髓过氧化物酶(MPO)阴性,血小板过氧化物酶(PPO)阴性.EB病毒核心抗原-1(EBNA-1)呈阳性.细胞免疫表型为CD30+、CD45+、HLA-DR+,而EMA、CD34、CD38、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD15、CD19、CD20均呈阴性.染色体分析示SH-1细胞系核型为二倍体或四倍体核型,并具有明显的结构和数量异常,但未见典型t(2;5).结论:所建立的细胞系为CD30+ALCL细胞系.
关键词: CD30+细胞 CD30+间变性大细胞 淋巴瘤细胞系 非霍奇金淋巴瘤 -
结外NK/T细胞淋巴瘤细胞系及其应用
结外NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T cell lymphoma,Nasal type)是一种独立的淋巴瘤类型,由1994年国际病理学会研讨会讨论提出,1997年WHO关于恶性淋巴瘤分类草案命名,2001年出版的WHO关于淋巴造血组织肿瘤新分类正式命名 [1-3].
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人鼻型NK/T细胞淋巴瘤表达谱基因芯片的筛查研究
Ko等[1]对7例鼻型NK/T细胞淋巴瘤进行了比较基因组杂交和杂合性缺失分析,发现在染色体2q、3q、5q、10q、13q、17q和21q等处有DNA拷贝数增加;而在1p、17p、6q、12q和13q有基因缺失.Oka等[2]对NK/T细胞淋巴瘤细胞系NK-YS作了初步的基因芯片检测,发现蛋白酪氨酸蛋白磷酸酶SHP-1基因表达下调.本研究旨在初步筛选和观察部分肿瘤相关基因差异性表达的情况.
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先天性EB病毒感染研究进展
EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是英国病毒学家Epstein、Barr等人于1964年从Burkitt淋巴瘤细胞系中分离到的病毒,属于疱疹病毒科R亚科,DNA病毒.
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钙离子内流参与利妥昔单抗增强辐射诱导的Raji细胞凋亡
钙离子是细胞生命活动的重要信使,刺激B细胞受体可诱导细胞内钙库的损耗,导致质膜上调控钙库的钙通道激活。已经发现,随着游离钙离子稳态被打破以及CD20与其单克隆抗体(利妥昔单抗)偶联,可导致细胞凋亡。细胞转染CD20后,可增加钙离子通过质膜进入细胞内,证明CD20具有调节细胞周期进程和作为钙离子通道平衡细胞内外钙浓度的功能。在Ramos B细胞中,src家族蛋白酪氨酸激酶的CD20调节刺激提高了细胞内钙离子浓度,并且诱导了Caspase 3的活性。除此之外,利妥昔单抗诱导的CD20和脂筏的高亲和性是钙进入细胞和激活下游凋亡信号的先决条件,与B细胞抗原受体的表达密切相关。在淋巴瘤细胞系中,利妥昔单抗联合辐射能显著提高辐射诱导细胞凋亡,利妥昔单抗通过改变细胞程序性死亡相关蛋白的表达、提高细胞内ROS水平、调节细胞周期等提高淋巴瘤细胞的辐射敏感性。然而,钙离子是否参与辐射和CD20靶向诱导细胞死亡尚不明确。闵凤玲等的“Influx of extracellular calcium participates in rituximab-enhanced ionizing radiation-induced apoptosis in Raji cells”一文,研究了利妥昔单抗和X射线照射后,淋巴瘤细胞内钙离子水平变化与DNA双链断裂和辐射诱导细胞死亡的关系,探讨了利妥昔单抗在辐射诱导细胞死亡中的作用机制。
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高迁移率族蛋白1对Jurkat细胞肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β表达的影响
研究表明细胞因子失衡是白血病细胞免疫逃逸的重要机制之一.核蛋白高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)是新发现的一种重要细胞因子,参与各种炎症反应.我们以淋巴瘤细胞系Jurkat细胞为研究对象在细胞水平观察HMGB1对TNF-α和IL-1β表达的影响,以探讨HMGB1 在白血病细胞因子网络失衡中的作用.
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Rituximab体外直接诱导Daudi细胞凋亡
抗CD20抗体Rituximab(中文商品名美罗华)是第一个应用于临床的抗肿瘤单克隆抗体(单抗),目前主要用于治疗低度恶性B细胞非霍奇金淋巴瘤及滤泡性淋巴瘤,总有效率约50%[1].目前认为美罗华抗淋巴瘤的机制主要是通过抗体依赖的细胞介导性细胞毒作用(ADCC)及补体介导的细胞毒作用(CDC).对美罗华是否可以直接杀伤淋巴瘤细胞报道不一.我们用激光共聚焦技术及流式细胞术观察了美罗华在体外对Burkitt淋巴瘤细胞系Daudi细胞的诱导凋亡作用.
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小儿EB病毒感染致神经系统疾病的研究进展
EB病毒(EBV)系首先由Epstein和Barr于1963年应用电镜观察法从非洲儿童淋巴瘤体外培养的淋巴瘤细胞系中发现的一种新的人类疱疹病毒.世界各地均有分布,为90%以上的成人所携带.被列为可能致癌的人类肿瘤病毒之一.
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IL-22:Th17细胞的重要效应分子
IL-22先于1999年由Dumoutier等[1]用IL-9刺激一株T淋巴瘤细胞系所发现,该分子由180或179个氨基酸组成,与IL-10有22%的氨基酸相似性;他们把该新型分子称为白细胞介素10相关的T细胞衍生的可诱导因子(IL-10-related T cell-derived inducible factor,IL-TIF).
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先天性EB病毒感染诊断与治疗:附3例报告
EB病毒(EBV)是由Epstein、Barr于1964年从Burkitt淋巴瘤细胞系中分离到的DNA病毒,主要与传染性单核细胞增多症、鼻咽癌等有关,在成人和儿童研究较多.而有关先天性EBV感染,国外报道不多,国内未见报道.我院新生儿科自2001年9月~2002年9月收治3例,经治疗取得一定效果,现报告如下.
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推荐一套免疫学及相关学科的参考丛书
英国科学出版社 (Academic press)出版了一套免疫学以及免疫学相关学科的丛书,不仅提供系统、翔实的资料 (FactsBook),而且有高度概括的总论。该丛书目前有 17本,包括细胞因子 (Cytokine), G蛋白连接受体 (G-protein linked receptor),细胞外基质 (extracellular matrix),蛋白激酶 (Protein Kinase)、离子通道 I:细胞外配体门控的通道 (Ion Channel I:extracellular ligand-gated channels ),离子通道 II: 细胞内配体门控的通道 (Ion Channel II: intracellular ligand-gated channels),离子通道 III:电压门控通道 (Ion channel III: Voltage-gated Channels), 趋化性细胞因子 (Chemokine),粘附分子 (adhesion molecules),血型抗原 (Blood group antigen), 白细胞抗原 (Leucocyte antigen),癌基因和抑癌基因 (oncogene and tumour suppressor gene),运转蛋白 (transporter),基因敲除 (Gene knockout),补体 (complement), HLA和白血病淋巴瘤细胞系 (Leukemia-lymphoma cell line)。出版社的网址是 www.hbuk.co.uk/ap. (金伯泉供稿 )