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辉瑞重磅新药palbociclib专利分析及其创新思考
Palbociclib(又名 PD-0332991),商品名 Ibrance,化学名6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮,是一种口服的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4/6抑制剂,主要通过抑制 CDK4/6活性来阻止细胞由生长期(G1期)进展到 DNA复制期(S1期),进而阻断细胞 DNA的合成,是美国辉瑞公司近来备受关注的重要试验药物之一。2015年2月3日,辉瑞公司宣布美国食品和药品管理局(FDA)已经加速批准了 palbociclib联合来曲唑作为以内分泌治疗为基础的一线疗法用于治疗未曾接受过系统治疗的雌激素受体阳性(ER+)、人表皮生长因子受体2阴性(HER2-)绝经期女性晚期乳腺癌,为 palbociclib的终上市扫清了障碍。一旦 palbociclib获得批准上市,它将成为全球首个 CDK4/6激酶抑制剂,预计年销售值将达到30亿~50亿美元,辉瑞公司也将借此率先撬开 CDK4/6抑制剂市场[1-2]。本文通过对 palbociclib在全球及中国的专利申请及保护情况进行分析,探寻辉瑞公司对 palbociclib的专利申请策略,以及国内企业目前的研发方向,希望藉此能够为国内制药企业在 palbociclib相关产品或同类药物的研发提供一些创新思路。
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p57Kip2在完全性和部分性葡萄胎与流产伴绒毛水肿中的表达及意义
p57Kip2是细胞周期抑制因子和肿瘤抑制基因,定位于染色体11p15.5.其所编码产物是一种广泛的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的抑制蛋白.p57Kip2显示极强的父本基因组烙印,在母本等位基因中为优势,即该基因的表达是由母系来源的基因开放所致.我们利用免疫组织化学法检测p57Kip2蛋白在由组织学所诊断的完全性葡萄胎、部分性葡萄胎及流产伴绒毛水肿中的表达情况,试图探讨p57Kip2基因在完全性、部分性葡萄胎和流产伴绒毛水肿鉴别诊断中的临床意义.
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细胞周期蛋白依赖性激酶CDC2在不同级别胶质瘤和瘤细胞系中的表达
细胞周期蛋白依赖性激酶CDC2属于ser/thr蛋白激酶家族,在细胞周期G2至M期起关卡作用,无论是细胞进入还是走出增殖周期都与它的表达有关.文献报道,CDC2过度表达可使细胞周期进程紊乱,导致许多组织形成肿瘤.我们应用组织芯片和免疫组织化学技术检测了CDC2在人脑胶质瘤组织及其相关起源细胞中的表达,以探讨CDC2的表达与胶质瘤发生、发展的关系.
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P27蛋白在非小细胞肺癌中表达的预后意义
P27蛋白具有限制性调节细胞周期进程的作用,这一作用主要通过抑制细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKS)复合物的功能来实现。P27蛋白表达与预后的关系在乳癌、淋巴瘤、前列腺癌以及消化道肿瘤已有报道[1],而在肺癌中的研究甚少。我们运用免疫组化法检测P27在非小细胞性肺癌组织中的表达水平,从而探讨其在非小细胞性肺癌中的意义。 对象和方法 1.对象:56例非小细胞肺癌(NSCLC)病例均在本院接受治疗及随访。其中男42例,女14例,年龄39~77岁,平均60岁。中位随访时间2年(1~5年),56例NSCLC中,腺癌36例,鳞癌18例,腺鳞癌2例。高分化12例,中分化20例,低分化24例。第1、2年每3个月随访一次,以后每半年一次。2.方法:(1)试剂:鼠抗人P27单克隆抗体(G173-524)购自美国Pharmingen公司。羊抗鼠IgG、链菌素亲生物蛋白和过氧化物酶、3,3-二氨基联苯胺盐酸盐(DAB)均购自丹麦DAKO公司。(2)染色流程:5 μm石蜡切片脱蜡水化→过氧化氢室温处理20 min→甩干后微波抗原修复2次,每次10 min→鼠抗人P27单抗(1∶10)湿盒孵育过夜→生物素标记羊抗鼠IgG(1∶200),37 ℃湿盒温育40 min→DBA显色、复染、封片。用已知P27表达阳性的胰腺癌作阳性对照。用缓冲液(PBS)取代一抗作阴性对照。(3)染色结果判断:观察染色切片中10个具有代表性的高倍视野,其肿瘤细胞阳性数在50%以上为(+),低于50%为(-)。3.统计学方法:采用第二军医大学统计教研室统计软件SPSS软件包,运用Logistic逐步回归对P27表达与临床及病理指标的相关性进行分析;应用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析,时序检验(log rank test),根据寿命表各随访年份生存率作生存曲线。
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p21/WAF-1/CIP-1与宫颈癌放射敏感性的关系
已知凋亡受多种基因调控,其中p21/WAF-1/CIP-1是近年来研究较多的基因,又简称p21[1].它通过作用于周期蛋白-周期蛋白依赖性激酶(cyclin-CDK)复合物及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)引起肿瘤细胞生长抑制及调控细胞凋亡,从而影响肿瘤的放射敏感性.笔者搜集了30例宫颈癌病例,通过研究细胞凋亡与肿瘤放射敏感性以及p21与细胞凋亡的关系,探讨p21对宫颈癌放射敏感性的作用.
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胆脂瘤上皮细胞增殖及分子调控机制的免疫组化研究
近年来研究表明胆脂瘤细胞的过度增殖行为与信号传导相关的蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases,PTKs)异常激活有关[1],信号传导中涉及细胞周期,G1期的重要调控者周期蛋白依赖性激酶4(cyclin dependen kinase 4,CDK4)和其特异性抑制因子周期蛋白依赖性激酶抑制物p15调控结果对细胞周期产生重要影响,有决定细胞增殖还是凋亡的作用[2],因此,我们用超敏免疫组化技术(ultrasensitive immunohistochemistry,SP)检测胆脂瘤上皮细胞磷酸化PTKs、CDK4、p15的表达水平,报道如下.
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细胞周期调控因子在舌鳞癌中的表达与意义
恶性肿瘤的细胞周期调控机制常发生异常.通过测定细胞周期的调控因子如细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和它们的抑制剂(CDKIs)可显示该组织中的细胞是否处于正常的细胞周期,因而对临床诊治具有辅助作用.我们检测舌鳞癌中p27、cyclin D1和CDK4的表达,探讨它们在临床应用中的意义.
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p16抑癌基因敲除小鼠髓系细胞增殖特性的研究
近大量资料显示,周期蛋白依赖激酶抑制剂(CDKI)家族成员之一P16蛋白竞争性地与周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)结合,在细胞周期中起着重要的负调节作用[1].许多研究显示p16外显子纯合缺失在慢性粒细胞白血病(CML)淋巴细胞急变患者中阳性率为50%[2].我们对p16基因敲除(p16-/-)小鼠骨髓细胞所建立的细胞系进行了细胞增殖特性的研究.现将结果报告如下.
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p27蛋白在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及意义
真核生物的细胞周期受一系列调控因子的调节与控制,其正常与否和细胞以及个体的生长、分化、衰老和癌变密切相关.参与细胞周期调控的主要分子有:细胞周期蛋白(cyclin),细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependent kinases,CDKs)和CDK抑制蛋白(cyclin dependent kinase inhibitors,CDKI) .其中CDKI通过与cyclin,CDK或cyclin-CDK复合物的结合,抑制CDK的活性,导致细胞周期的停滞,阻断细胞的增殖过程.p27蛋白是Polyak等[1]于1994年发现的一种分子量为27KD的热稳定蛋白质.近年来研究表明,p27是一种非特异细胞周期抑制蛋白(CDKI),主要与Cyclin E-CDK2、Cyclin A-CDK2和Cyclin D1-CDK4紧密结合,并抑制其活性,从而抑制细胞由G1至S期转化2.应用免疫组化的方法检测卵巢浆液性囊腺癌组织中p27蛋白的表达情况,探讨其与卵巢浆液性囊腺癌的关系.
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走在世界研究前列的抗癌天然药物-紫龙金片
癌症是严重威胁人类健康的杀手,征服癌症一直是医药科学家们追求的理想. 近年来分子生物学领域在肿瘤研究方面取得突破性进展,癌症的难题得到了逐步破译,尤其是70年代中后期至90年代,一些意义重大而深远的细胞分子生物学研究相继取得重大进展,如不同癌基因与抑癌基因的发现,乃至2001年三位诺贝尔医学奖获得者所发现的细胞周期调控蛋白,特别是stat基因的发现,细胞周期蛋白(Cylin)、周期蛋白依赖性激酶(CDK)和周期蛋白激酶抑制因子(CKI)等家族分子问世,90年代中期,在众多科学的基础上,现代细胞分子生物学为肿瘤发生发展的理论提供了新的诠释,使人们对于分子在细胞周期中, 空间性与时间性的分布和功能都有了比较清晰的认识,这不仅对肿瘤的预防和治疗有重要意义,而且也给抗肿瘤药物的研制提出了新的方向.
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抑癌基因P21与P27研究进展
在生物体内,根据不同的基因在肿瘤演进过程中的作用可分为两大类:癌基因和抑癌基因.正常情况下,癌基因和抑癌基因功能相互协调,调控着细胞增殖、分化、凋亡等生命过程.一旦两者功能失调,细胞生命活动过程即细胞周期将发生异常,甚至导致肿瘤发生.P21、P27作为抑癌基因的侯选者,越来越受到人们的重视.从功能上讲,P21、P27是调控细胞周期的相关基因,同属于细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制因子(CKI),它们在氨基酸水平上有着明显的同源性,两者在N端的60个氨基酸区域内有44%的顺序一致,已证明此区域有一个广谱的cyclin/cdk结合位点并抑制cdk的活性.在近c末端都有一个双向核定位信号.二者与肿瘤发生发展的关系目前国内外已有较多报道.
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P27基因与膀胱癌
研究表明细胞周期是细胞周期蛋白(cyclin)-细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependend kinase,CDKs)-细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin-dependend.kinase inhibitors,CDKIs)共同调节下运行的[l].真核生物细胞周期失控是细胞增殖过度及癌变的重要原因.细胞周期蛋白依赖性激酶(cy-clin-dependend kinase,(CDKs),是细胞周期调控的核心装置,调节多种关键底物的磷酸化,激发G1期~s期、G2期~M期转换.即真核生物细胞周期调控有赖于细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependend kinase,CDKs)的活化.细胞周期蛋白(cyclin)是CDK的正性调控因子,激活CDK的活性;CDK的抑制蛋白因子(CDK inhibitors,CDKIs)是CDK的负性调控因子,使CDK失去活性.两者对CDK活性的改变调控着细胞周期各时期的转换.
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抑癌基因 P16、 Rb在甲状腺癌组织中的表达
P16(Multiple tumor suppressor I,MTS I),是一种新发现的抑癌基因,其表达产物为周期蛋白依赖性激酶 (CDKS)的抑制因子,直接参与细胞周期的调控。 Rb(retinoblastoma susceptibility gene)是第一个被成功克隆的人的抑癌基因, Rb蛋白在细胞核内能与控制 DNA的复制和转录的蛋白结合,控制细胞的增殖和分化。 P16、 Rb基因的缺失和突变与肿瘤发生、发展有着密切的关系 [1]。本研究采用免疫组织化学方法研究 P16、 Rb蛋白在甲状腺癌组织中的表达,旨在探讨 P16、 Rb蛋白在甲腺癌发生、发展中的作用及其相互关系。 1 对象与方法 1.1 对象收集白求恩医科大学第二临床学院病理科 1985~ 1996年手术切除的甲状腺癌标本 46例,男 6例,女 40例,平均年龄 42.3岁。其中乳头状腺癌 23例,滤泡状腺癌 16例,未分化癌 7例。标本经 10%福尔马林液固定,石蜡包埋切片。实验用 P16、 Rb兔抗人多克隆抗体及 SP免疫组化试剂盒均购自北京中山生物制品公司。
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p57kip2基因与肿瘤关系的研究进展
真核生物细胞周期失控是细胞增殖过度及癌变的重要原因.细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDKs)是细胞周期调控的的核心装置,调节多种关键底物的磷酸化,激发G1-S期、G2-M期转换.即细胞周期调控有赖于CDKs的活化.细胞周期蛋白(cyclins)是CDK的正性调控因子,激活CDK的活性;CDK的抑制蛋白因子(CDK inhibitors,CDKIs)是CDK的负性调控因子,使CDK失去活性.两者对CDK活性的改变调控着细胞周期各时期的转换.基于不同CDKIs的结构和功能特点,将它们分为两类:一类为INK4家族(inhibitor of CDK4),包括p16/INK4(p16),p15/INK4(p15),p18/INK4(p18)和p19/INK4(p19).另一类为cip/kip家族(CDK-interacting pro-tein/kinase inhibition protein),包括P21/WAF/Cipl(p21)、p27kipl(p27)和p57kip2(p57).新近发现的p57kip2对细胞的生长有着极其重要的调控作用,并且在某些肿瘤中存在基因异常和蛋白表达下降,提示p57kip2与肿瘤发生、发展有着密切的联系.
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细胞周期蛋白D与肿瘤
细胞周期蛋白(Cyclin)是一类对细胞周期起关键调控作用的蛋白。这些蛋白中包含一些同源区域,例如细胞周期素盒以及细胞周期素盒之外的其它同源区域[1]。在哺乳动物细胞中,细胞周期蛋白与细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK )结合形成复合物,参与不同细胞周期的调控过程。其中:CyclinD -CDK4/6复合物控制 G1期进程,CyclinE -CDK2复合物调控G1/S期转换过程,CyclinA -CDK2复合物对 S 期起关键调控作用, CyclinA/B -CDC2复合物则促进细胞由 G2期进入 M 期。除此之外,细胞周期蛋白还参与一些与细胞周期间接有关的过程。目前,学者们发现在各种人类肿瘤中都存在 Cyclin -CDK 复合物作用失调的现象,因此, Cyclin-CDK 复合物在细胞增殖中的重要性越来越受到重视[2]。 Cy-clinD已被证实在肿瘤的发病中起重要作用,鉴于此,本文将对 CyclinD 在肿瘤发展中的作用做一综述。
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细胞周期蛋白依赖性激酶及抑制因子与肿瘤
细胞周期(cell cycle)是细胞生命活动的基本过程,指从细胞分裂结束开始,到下一次细胞分裂结束为止的过程,DNA合成和细胞分裂是细胞周期的两个主要事件.
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cyclin D1基因异常表达、多态性与乳腺癌关系
对细胞周期调控机制的研究表明,细胞周期蛋白(cyclin)是细胞周期中短暂出现的基因表达产物,具有严格的顺序性,与特定的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)结合构成复合体,使CDK活化,完成各个时相的转换,然后降解.
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携带p16基因真核表达质粒载体的构建
p16基因定位于9p21,编码一个16kD的蛋白质,此蛋白质是一种细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的抑制因子(CDK4I).有研究者发现将全长p16基因的cDNA导入无p16基因的人类胶质瘤细胞中可显著抑制其生长.因此,构建p16真核表达载体,针对恢复p16基因功能的基因治疗策略,将对肿瘤的治疗产生积极的意义.
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P21WAF1在胃癌中表达及其意义
P21WAF1是细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂,它通过抑制多组cy clin/cdk复合物的活性而调节细胞周期。业已证实P21WAF1与肿瘤细胞生长、分化密切相关。为此,我们采用免疫组化方法研究P21WAF1在胃癌中表达,探讨其临床病理学意义。材料和方法 一、材料:所有标本均为两院手术切除标本,正常胃粘膜10例,胃粘膜肠化10例,胃癌 68例。Borrmann Ⅰ型18例,Ⅱ型20例,Ⅲ型19例,Ⅳ型11例。Lau ran’s分型:肠型胃癌38例,弥漫型胃癌30例,其中淋巴结转移组31例。鼠抗人 P21WAF1单抗为美国Santa Cruz公司产品,S-P免疫组化染色试剂盒购自北京中山生物技术公司。
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P27、Skp2与肿瘤
肿瘤的发生是正常细胞染色体严重损伤的复杂过程,包括抑癌基因的失活,原癌基因的不正常激活,DNA转录表达失控,DNA损伤等.不论何种原因造成的细胞转化其终表现均为细胞周期调控机制紊乱,分化受阻导致肿瘤发生.细胞周期受细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)以及其抑制剂(CKI)的共同调控.P27是一种新发现的CKI,P27的活性改变影响细胞周期过程,进而影响细胞的增殖.细胞s期激酶相关蛋白2(skp2),在许多细胞周期调控因子的泛素依赖性蛋白水解途径中起到特异性识别底物的作用,参与细胞周期的调控.大量研究发现,在一些恶性实体肿瘤中,P27常呈低表达,而skp2则高表达,且P27的表达与skp2呈负相关.因此推断P27的表达下调与Skp2的表达增加有关.