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5-脱氧氮杂胞苷逆转食管鳞癌细胞系p16基因转录表达研究
目的:探讨5种食管鳞癌细胞株中p16基因转录失活以及去甲基化药物对其作用的机制.方法:采用细胞培养、PCR、DHPLC、MSP、Northern印迹、MTT等方法,检测EC1,EC18,EC109,TE1,TE10食管鳞癌细胞株中p16基因的缺失、突变、甲基化状态和p16的转录表达,观察去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷对p16基因转录表达和细胞增殖能力的影响.结果:除了EC1,其余4种食管鳞癌细胞株均检测出p16基因的不同变化:纯合缺失(EC18),纯合型甲基化(EC18,EC109),杂合型甲基化(TE1,TE10),且纯合缺失的发生率较低(20%),甲基化的发生率较高(80%),经过5-Aza-CdR处理,可见2株发生了杂合型甲基化的TE1和TE10细胞p16基因的转录表达得到了逆转.结论:不同食管鳞癌细胞株p16基因转录失活的原因是不同的,启动子区甲基化为主要原因,其中杂合型甲基化可以被去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷逆转,使p16的转录表达上调.
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p16抑癌基因敲除小鼠髓系细胞增殖特性的研究
近大量资料显示,周期蛋白依赖激酶抑制剂(CDKI)家族成员之一P16蛋白竞争性地与周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)结合,在细胞周期中起着重要的负调节作用[1].许多研究显示p16外显子纯合缺失在慢性粒细胞白血病(CML)淋巴细胞急变患者中阳性率为50%[2].我们对p16基因敲除(p16-/-)小鼠骨髓细胞所建立的细胞系进行了细胞增殖特性的研究.现将结果报告如下.
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急性白血病MTS1/P16基因缺失的研究
急性白血病是我国常见的造血系统恶性疾病.其病因及发病机理目前还不完全清楚,病毒、遗传因素及染色体异常与它的发生都有关系.现已证实,MTS1/P16基因在人类多种恶性肿瘤中存在着不同形式的改变[1,2],但有关MTS1/P16基因在急性白血病中的研究国内报道少[3].我们采用差别 PCR技术对MTS1/P16基因在急性白血病中纯合缺失进行检测,以了解MTS1/P16基因缺失与急性白血病的关系.
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白血病白细胞p16基因纯合缺失的检测和临床意义
目的探讨p16基因纯合缺失与白血病发病的关系。方法用聚合酶链反应(PCR)检测73例白血病患者白细胞p16基因纯合缺失情况。结果 73例白血病患者中有5例p16基因纯合缺失。其中，21例慢性粒细胞性白血病患者未见p16基因纯合缺失。27例急性非淋巴细胞性白血病(急非淋)患者有1例缺失，缺失率为3.7%(1/27)。25例急性淋巴细胞性白血病患者有4例缺失，缺失率为16%(4/25)。20例正常对照未发现p16基因缺失。结论 p16基因在急性淋巴细胞性白血病(急淋)中有较高的缺失率。
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原发性肝细胞肝癌发生发展中p16基因的遗传学改变
目的研究人原发性肝细胞肝癌中pl6基因DNA水平上发生的遗传学改变.方法采用聚合酶链反应(PCR)和全自动序列分析的方法,研究84例肝癌和癌旁肝组织中pl6基因第1、 2外显子纯合缺失和点突变的情况.结果 84例肝癌标本中p16基因第1外显子缺失9例,第2外显子缺失23例,其中有3例第1、 2外显子共同缺失,总缺失率为34.5%.未发生基因缺失的病例,经过全自动序列分析,未发现点突变.结论原发性肝细胞肝癌中p16基因失活的主要机制是基因纯合缺失,点突变发生率可能非常低.而未发生基因缺失和突变的肝癌,以及发生p16蛋白阴性表达的癌旁肝组织, p16基因失活的原因可能是包括基因甲基化在内的其他遗传学改变引起的.
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ALL病人P16基因的失活与mRNA表达的关系
目的:探讨ALL 和各亚型中 P16 基因失活和纯合缺失的发生率及mRNA 表达. 方法:对40例ALL (B-ALL28例,T-ALL7例,前B-ALL5例)和15例对照组骨髓标本,采用PCR 法检测P16 基因的纯合缺失,REP 法检测P16 基因的高度甲基化, RT-Nest-PCR 法检测其mRNA的表达.结果:ALL P16 基因高度甲基化或纯合缺失发生率为80%,而对照组无一例P16基因失活;T-ALL 中P16 基因纯合缺失高于高度甲基化 ;B-ALL 中高度甲基化多于纯合缺失.5例P16 基因高度甲基化尚有mRNA表达,其余均无表达.结论:P16 基因的异常是 ALL 的主要发病机制之一.T-ALL P16 基因的纯合缺失为主要表现,而B-ALL P16 的高度甲基化为主要表现.同时,无论P16 基因纯合缺失或高度甲基化,均能高度抑制mRNA 的表达.
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胃癌中p16基因缺失的研究
目的调查胃癌患者p16基因的改变。方法采用PCR方法，对23例胃癌患者肿瘤组织标本进行p16基因外显子3的缺失研究。结果发现2例弥漫型胃癌有p16基因的纯合缺失，缺失频率为8.70%。结论证明p16基因的改变与胃癌的发生和发展有一定的联系。
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p16基因和地塞米松对人胶质瘤细胞的影响
p16基因是一个多种肿瘤抑制基因,也是细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4的抑制因子,它参与细胞周期的调控,并在人类多种肿瘤中有缺失和突变.在胶质瘤中仅纯合缺失就高达90%[1].为了研究外源性p16基因对胶质瘤的影响,我们采用聚合酶链反应(PCR)、逆转录-PCR(RT-PCR)和免疫组织化学方法确定了人脑胶质瘤细胞系SHG-44 p16基因缺失并将人p16基因cDNA哺乳动物细胞表达载体转染SHG-44,观察外源性p16基因对胶质瘤细胞的作用,探讨地塞米松对转染p16基因肿瘤细胞有无更为明显的促分化作用.
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谷胱苷肽硫转移酶Mu 1-1(GSTMl)纯合缺失基因型的.种族分布及其与肺癌易感性的关系
谷胱苷肽硫转移酶(Glutathione S - transferases , GSTs)是一组具有多种生理功能的蛋白质,主要存在细胞液中,能催化还原型的谷胱苷肽(GSH)的巯基(-SH)结合到疏水的化合作者单位:广东省暨南大学流行病教研室广州 510632物上,使亲电子的化合物变成亲水的物质,易于从胆汁或尿液中排泄[1],通过这种方式将体内各种致癌物和断裂剂产生的亲电子试剂、有潜在毒性的物质及亲脂性化合物降解排出,因此GSTs在机体代谢有毒化合物、保护细胞免受急性毒性化学物质攻击和抑制细胞癌变中起着重要的作用[2].GSTM1是GSTs超基因家族中Mu家族的成员之一,近年来的研究表明编码GSTM1的基因存在基因缺失的多态性,并存在显著的种族差异,GSTM1纯合缺失基因型在肺癌病因学研究中具有重要的意义,因此本文对GSTM1纯合缺失基因型的种族分布及其与肺癌易感性的关系作一简要综述.
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应用基因组测序技术诊断缺失型脊肌萎缩症
目的 评价基因组测序技术在诊断缺失型脊肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)中的应用.方法 应用聚合酶链反应扩增100例SMA临床确诊患儿和110名对照样本的运动神经元存活基因(spinal muscular atrophy,SMN),基因组测序技术通过识别扩增片段中SMN1和SMN2的4个差异位点用来诊断SMN1的纯合缺失,并以多重连接探针扩增进行验证.结果 100例SMA样本中基因组测序显示差异位点仅有SMN2基因特有碱基峰,多重连接探针扩增检测示SMN1与SMN2拷贝数为0∶2或0∶3,表明SMN1基因纯合缺失.对照组中5例样本的差异位点仅为SMN1基因特有碱基峰,SMN1与SMN2拷贝数为2∶0,为SMN2纯合缺失.105例样本的差异位点均为杂合峰,SMN1与SMN2拷贝数为2∶2,未显示SMN1和SMN2的缺失.所有测序结果与MLPA检测结果一致.结论 基因组测序技术在进行缺失型脊肌萎缩症的分子诊断中具有特异、准确、实用的特点.
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脑胶质瘤p16基因纯合缺失、点突变及表达的研究
目的:从分子水平上探索胶质瘤的发生机理.方法:应用复合PCR法,单链构象多态性(SSCP)分析及免疫组化的标记抗生蛋白连菌素法(LSAB)对脑胶质瘤p16基因第3外显子的纯合缺失,点突变以及p16基因的表达进行了检测.结果:27例胶质瘤中发现14例有p16基因不同程度的表达,但未发现纯合缺失点突变.结论:胶质瘤中未发现p16基因第3外显子的纯合缺失和点突变,说明其在胶质瘤的发病中不是主要因素.胶质瘤中存在p16基因的表达缺失,并且其表达的缺失与胶质瘤的恶性程度相关.
关键词： 胶质瘤 PCR 纯合缺失 单链构象多肽性 标记抗生蛋白连菌素法 -
乳腺癌中P16基因缺失与突变的研究
背景与目的:了解乳腺癌与p16基因的关系.材料与方法:采用PCR和DNA测序方法,对33例乳腺癌患者肿瘤组织标本的p16基因进行检测,研究p16基因的缺失和突变情况.结果:所有标本均未检出纯合缺失,10例标本进行了外显子2的序列测定,也未发现点突变.结论:p166基因的纯合缺失和点突变可能与乳腺癌的发生无关.
