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干扰HERG钾通道表达可抑制成神经细胞瘤细胞增殖
目的:采用RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术抑制HERG基因的表达,探讨HERG基因编码钾通道对人成神经细胞瘤细胞(SH-SY5Y)存活及增殖的影响.方法:构建发卡状RNA干扰质粒(shRNA-HERG)转染SH-SY5Y细胞,再分别使用半定量RT-PCR和Western印迹方法观察shRNA-HERG 对SH-SY5Y细胞中HERG基因mRNA及其编码蛋白表达的干扰效果.利用SH-SY5Y细胞的生长曲线和集落形成实验,观察转染shRNA-HERG质粒对SH-SY5Y细胞存活及增殖能力的影响.结果:转染shRNA-HERG干扰质粒后,SH-SY5Y细胞中HERG基因的mRNA水平及其编码的钾通道蛋白表达水平显著下降.与对照组相比,shRNA-HERG使SH-SY5Y细胞生长曲线明显下压,细胞倍增时间延长136.8%.集落形成实验结果显示,无论接种细胞数为50,100或200,shRNA-HERG组克隆形成率均显著下降,与shRNA-control组和未干扰组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:所构建的shRNA-HERG表达质粒能有效抑制HERG基因编码钾通道蛋白的表达,明显抑制SH-SY5Y细胞的生长和增殖.
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乙醇通过激活JNK和p38K引起成神经瘤细胞死亡
目的 研究乙醇引起SK-N-SH成神经瘤细胞损伤的机制.方法 采用MTT法检测细胞死亡率.DNA片段分析法、DAPI核染色及caspase-3活性分析检测细胞凋亡.免疫印迹分析JNK和p38K的表达.结果 乙醇引起SK-N-SH细胞死亡率增加,该作用呈剂量依赖性.乙醇引起细胞发生凋亡样变化,表现为caspase-3激活、核DNA断裂及核碎裂.乙醇引起细胞死亡的机制部分与激活JNK和p38K通路有关.结论 乙醇通过激活JNK和p38K通路引起SK-N-SH成神经瘤细胞死亡.
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蛋白磷酸酶抑制剂对人成神经细胞瘤细胞钙瞬态的影响
应用荧光倒置显微镜系统,分别检测了蛋白磷酸酶PP-2A和PP-1 抑制剂岗田酸(Okadaic acid,OA)和PP-2B抑制剂三氟吡拉嗪(Trifluoperazine, Tri)处理的人成神经细胞瘤细胞(SH-SY5Y)胞浆钙瞬态变化.结果发现:1 nmol/L OA抑制PP-2A时,胞浆游离Ca2+浓度([Ca2+]i)瞬时波动明显增强,[Ca2+]i 在20 min内逐步轻微升高,后逐渐回复; 而用100 nmol/L OA同时抑制PP-2A和PP-1时,则引起[Ca2+]i 即刻持续升高,并同时伴有[Ca2+]i 瞬时波动明显增强;用100 μmol/L Tri抑制PP-2B时,则引起[Ca2+]i 即刻持续升高,[Ca2+]i 瞬时波动没有明显变化.提示:蛋白磷酸酶降低可能通过钙瞬态变化而参与Alzheimer病(AD)的发病过程.
