首页 > 文献资料
-
5-脱氧氮杂胞苷逆转食管鳞癌细胞系p16基因转录表达研究
目的:探讨5种食管鳞癌细胞株中p16基因转录失活以及去甲基化药物对其作用的机制.方法:采用细胞培养、PCR、DHPLC、MSP、Northern印迹、MTT等方法,检测EC1,EC18,EC109,TE1,TE10食管鳞癌细胞株中p16基因的缺失、突变、甲基化状态和p16的转录表达,观察去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷对p16基因转录表达和细胞增殖能力的影响.结果:除了EC1,其余4种食管鳞癌细胞株均检测出p16基因的不同变化:纯合缺失(EC18),纯合型甲基化(EC18,EC109),杂合型甲基化(TE1,TE10),且纯合缺失的发生率较低(20%),甲基化的发生率较高(80%),经过5-Aza-CdR处理,可见2株发生了杂合型甲基化的TE1和TE10细胞p16基因的转录表达得到了逆转.结论:不同食管鳞癌细胞株p16基因转录失活的原因是不同的,启动子区甲基化为主要原因,其中杂合型甲基化可以被去甲基化药物5-脱氧氮杂胞苷逆转,使p16的转录表达上调.
-
5-Aza-CdR对CEM/C1白血病细胞KLF4基因的去甲基化作用
目的 探讨启动子甲基化对CEM/C1白血病细胞KLF4基因的作用及5-Aza-CdR干预对启动子甲基化的影响.方法 使用不同浓度的5-Aza-CdR处理急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞,采用噻唑蓝(MTT)检测去甲基化药物5-Aza-CdRa对CEM/C1细胞增殖的影响,并利用半定量逆转录聚合反应(RT-PCR)检测去甲基化药物处理后CEM/C1细胞中KLF4基因mRNA的表达水平.结果 5-Aza-CdR抑制体外培养的人急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖,呈浓度依赖性.经5-Aza-CdR处理CEM/C1细胞后,RT-PCR检测KLF4 mRNA恢复了表达.结论 启动子区高甲基化是急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞中KLF4基因失活的主要原因,5-Aza-CdR能逆转KLF4基因甲基化状态,从而调控KLF4基因表达并抑制细胞生长.
-
罗格列酮5-Aza干预乳腺癌MCF-7细胞系体外培养的效应
目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(罗格列酮)联合甲基转移酶抑制剂5-脱氧氮杂胞苷(5-Aza-cdR)对雌激素受体阴性的人乳腺癌细胞株MCF-7体外培养的抑制作用,为临床靶向治疗乳腺癌提供基础试验依据.方法:取对数生长期生长良好的乳腺癌MCF-7细胞株,按2.0×106细胞/孔接种24孔板,按析因试验设置试验组.采用MTT比色法观察罗格列酮和5-氮胞苷对体外培养的MCF-7细胞株生长的抑制作用;用倒置光学显微镜观察MCF-7细胞用药前后的形态学变化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化.结果:罗格列酮组、5-氮杂胞苷组和联合组均能有效的抑制MCF-7细胞生长(P<0.05).3组的细胞抑制率随着时间的延长而增加.在72h时点,罗格列酮组、5-氮杂胞苷组、联合组和对照组的早期凋亡百分率分别为36.9%、22.7%、35.5%、24.1%,晚期凋亡百分率分别为16.0%、43.7%、37.7%、40.2%;3组的G0、G1期(DNA合成前期)细胞分别为81.3%、67.3%、74.5%和6.0%;S期(DNA合成期)细胞分别为2.5%、17.1%、0和38.5%.G2期(DNA合成后期)细胞分别为16.3%、15.6%、25.5%和55.4%.与对照组相比3组G0、G1期的阻滞作用均较强(P<0.05),联合用药未增强G0、G1期的阻滞作用(P<0.05).结合分析细胞凋亡实验结果,联合用药既不增强周期阻滞效果未增强凋亡效果(P<0.05).结论:体外培养抑制试验证明罗格列酮、5-Aza均能有效的抑制乳腺癌细胞株MCF-7的生长.罗格列酮对MCF-7细胞株的干预作用是通过周期阻滞完成的,5-氮胞苷能干预细胞周期,其可能的机制是诱导细胞成熟分化.
-
雷帕霉素联合5-脱氧氮杂胞苷干预乳腺癌MCF-7细胞株体外培养效应
背景与目的:靶向治疗是乳腺癌等实体瘤治疗的又一有效手段,靶向药物的开发是临床治疗的需要.本文探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性抑制剂雷帕霉素和甲基转移酶抑制剂5-脱氧氮杂胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-cdR)对雌激素受体阴性人乳腺癌细胞株MCF-7体外培养的抑制作用,为临床靶向治疗提供实验依据.方法:取对数生长期生长良好的乳腺癌MCF-7细胞株,按2.0×106细胞/孔接种于24孔板,按析因试验设置4个组:雷帕霉素组(R组)、5-Aza-cdR组(hza组)、两药联合组和对照组.采用MTT法观察雷帕霉素,5-Aza-cdR对体外培养的MCF-07细胞系生长的抑制作用;应用流式细胞仪检测凋亡细胞和细胞周期.结果:与对照组相比,R组和Aza组均有一定的抑制乳腺癌细胞MCF-7细胞体外培养生长的作用(P<0.05),联合组对乳腺癌细胞生长的抑制作用与R组相同(P>0.05).在干预48 h时,R组和联合组即达到有效抑制率.Aza组干预120 h达到有效抑制率.Aza组细胞抑制率低于联合组(P<0.05),R组与联合组细胞抑制率差异无显著性(P>0.05).在72 h时间点,R组、Aza组、联合组、对照组的早期凋亡细胞百分率分别为40.9%、22.7%、37.3%、24.1%;晚期凋亡细胞分别为17.8%、43.7%、27%、40.2%;与对照组相比,R组、联合组均能有效地诱导MCF-7早期细胞凋亡(P<0.05).Aza组早期细胞凋亡率均较R组和联合组低(P<0.05),但晚期细胞凋亡率较R组和联合组高(P<0.05);与对照组相比差异无显著性(P>0.05).雷帕霉素4.0×10-5mg/L与5-Aza-cdR 25 μmol/L干预无明显交互作用(P>0.05).联用组与R组比较,细胞早期凋亡率下降(P<0.05).在72 h时间点,4组的G0、G1期细胞分别为60.1%、67.3%、66.8%和6%;S期细胞分别为34.2%、17.1%、22.2%和38.5%;G2期细胞分别为5.8%、15.6%、11.1%和55.4%.与对照组比较,R组、Aza组、联合组对乳腺癌MCF-7细胞均有较强的G0、G1期阻滞作用(P<0.05).与联合组相比联合用药不增强G0、G1期周期阻滞作用(P>0.05).雷帕霉素4.0× 10-5mg/L与5-Aza-cdR 25 μmol/L干预在细胞G0、G1期无明显的交互作用(P>0.05).结论:体外培养抑制试验证明,雷帕霉素、5-Aza-cdR均能抑制乳腺癌细胞株bICF-7的生长.西药无交互作用,临床无联合用药价值.雷帕霉素联合5-Aza-cdR不增加细胞凋亡.5-Aza-cdR能干预细胞周期,其可能的机制是诱导细胞成熟分化.联合用药不增强MCF-7细胞的周期阻滞和凋亡.
-
5-脱氧氮杂胞苷上调肺癌细胞p16INK4A基因表达的作用观察
肺癌细胞SPC-A1经5-脱氧氮杂胞苷（5-Aza-cdR）处理后，应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫细胞化学检测其在mRNA和蛋白质水平的变化，同时MTT法观察肺癌细胞SPC-A1增殖能力的改变。结果表明经5-Aza-cdR处理后，肺癌细胞SPC-A1中p16INK4A基因的mRNA及蛋白质表达都有所上调，MTT法亦显示处理后的SPC-A1细胞增殖速率减缓。说明5-Aza-cdR通过对p16INK4A基因5`CPG岛的去甲基化作用，上调p16INK4A基因的mRNA转录及蛋白表达，从而恢复其抑制肺癌细胞增殖的作用。
关键词： 5-脱氧氮杂胞苷 肺癌 p16INK4A基因 甲基化
