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环氧合酶-2抑制剂NS398对小鼠前列腺癌抑瘤作用的研究
为探讨环氧合酶(COX)-2选择性抑制剂氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺( NS398)抗前列腺癌的作用,我们建立了前列腺癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,观察NS398在动物体内的抑瘤作用.材料与方法人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3由青岛大学医学院病理生理教研室惠赠.培养于DMEM培养液中,5% CO,、37℃孵箱中扩增,每2~3天换液传代.NS398(美国Sigma公司),鼠抗人血管内皮生长因子(VEGF,美国SANTA CRUZ公司),CD34鼠单克隆抗体、P-V6000免疫组化试剂盒、DAB显色剂、兔抗鼠二抗、ECL发光剂(北京中杉生物技术有限公司).
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三氧化二砷抗肝癌及其肾毒性的实验研究
探讨三氧化二砷(As2O3)抗大鼠肝癌作用及其对肾脏的毒副作用.材料与方法1.药品及试剂:As2O3(Sigma公司),顺铂(齐鲁制药厂),二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine, DEN, Sigma公司),小鼠bcl-2(IgG1)单抗(1∶50,Santa Cruz)、小鼠抗大鼠增殖细胞核抗原(PCNA)单抗(1∶100,北京中山生物技术有限公司).HistostainTM-Plus免疫组化试剂盒(Zymed公司).APO-BRDUTM凋亡定量检测试剂盒(Becton Dickinson公司).
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髁突软骨的细胞分层及其功能研究
我们通过对髁突软骨细胞进行PCNA、FGFR3、Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚合体基因表达等研究,探讨髁突软骨的分层及其功能.1.材料和方法:成年日本大耳白兔共6只,雌雄各半.处死动物后,取TMJ标本, HE染色和免疫组化标本用多聚甲醛固定,EDTA脱钙,石蜡包埋.免疫组化采用超敏SP法.抗FGFR3多克隆抗体购自Santa Cruz 公司(美国), 抗PCNA单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒(购自福州迈新公司).基因序列、引物设计、RNA探针制备和原位杂交方法同以前的研究[1].
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前列腺特异性抗原免疫组化试剂盒的研制与初步应用
前列腺特异性抗原(PSA)是由前列腺上皮细胞分泌的糖蛋白,相对分子质量33 000,具有组织特异性[1],被认为是目前检测前列腺癌好的肿瘤标志物.PSA免疫组化方法检测前列腺癌具有特异性好、灵敏度高等优点,临床上广泛应用于对前列腺癌的诊断和鉴别诊断.我们在多年研究的基础上,从人体样品中纯化分离了电泳纯的PSA,以此免疫动物制备了抗PSA的单克隆抗体,建立了前列腺癌PSA免疫组化检测方法,在此基础上研制了PSA免疫组化试剂盒,并在临床上进行了初步应用.
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抑癌基因 P16、 Rb在甲状腺癌组织中的表达
P16(Multiple tumor suppressor I,MTS I),是一种新发现的抑癌基因,其表达产物为周期蛋白依赖性激酶 (CDKS)的抑制因子,直接参与细胞周期的调控。 Rb(retinoblastoma susceptibility gene)是第一个被成功克隆的人的抑癌基因, Rb蛋白在细胞核内能与控制 DNA的复制和转录的蛋白结合,控制细胞的增殖和分化。 P16、 Rb基因的缺失和突变与肿瘤发生、发展有着密切的关系 [1]。本研究采用免疫组织化学方法研究 P16、 Rb蛋白在甲状腺癌组织中的表达,旨在探讨 P16、 Rb蛋白在甲腺癌发生、发展中的作用及其相互关系。 1 对象与方法 1.1 对象收集白求恩医科大学第二临床学院病理科 1985~ 1996年手术切除的甲状腺癌标本 46例,男 6例,女 40例,平均年龄 42.3岁。其中乳头状腺癌 23例,滤泡状腺癌 16例,未分化癌 7例。标本经 10%福尔马林液固定,石蜡包埋切片。实验用 P16、 Rb兔抗人多克隆抗体及 SP免疫组化试剂盒均购自北京中山生物制品公司。
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促血管生成素2在妊娠期高血压疾病胎盘中的表达
1临床资料选取本院2006年正常产妇胎盘20例,年龄19~36岁,无内、外科及产科并发症;妊娠期高血压疾病患者胎盘25例,年龄18~40岁,其中妊娠期高血压5例,子痫前期轻度10例,重度8例,子痫2例.促血管生成素2(Ang-2)抗体、SP免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物公司,采用免疫组化SP法进行Ang-2检测.Ang-2阳性细胞胞浆有棕黄色颗粒沉着,根据染色的程度及染色细胞的百分率进行评分.结果以阴性(一)、弱阳性(+)、中等阳性(++)及强阳性(+++)表示.采用秩和检验对数据进行统计学处理.
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抗痫灵对戊四氮致痫大鼠海马区脑组织c-jun蛋白表达的影响
1 实验材料1.1 药物 中药抗痫灵:由穿山甲、龙骨、乳香、没药、珍珠、胆南星、石菖蒲等组成,各药混合为末,药材购于黑龙江中医药大学专家门诊;丙戊酸钠缓释片:江苏恒瑞医药股份有限公司生产,批号:081017;致痫药物戊四氮:购自美国Sigma公司.1.2 动物 健康雄性Wistar大鼠90只,体重180 ~ 220g(SPF级),由黑龙江中医药大学实验动物中心繁育提供.1.3 试剂 免疫组化试剂盒:武汉博士德生物工程有限公司.1.4 仪器 ND-97数字化脑电图仪:成都泰盟.
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红景天苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经可塑性的影响
1 实验材料红景天苷(中国药品生物制品检定所);氯化-2、3、5三氯苯基四氮唑(TTC);SYN和GAP-43免疫组化试剂盒(武汉博士德);DAB显色试剂盒;KCQ-Ⅰ型1200EX透射电镜;BI-2000医学图像分析摄像系统(成都泰盟公司).Wistar雄性大鼠,体重280~330g,二级动物,由佳木斯大学实验动物中心提供.
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卵巢癌患者血清TGFα、TNFα和CA125的联合检测
一、资料与方法 1. 对象。对照组为30例健康女性,年龄22~48岁。选取1998年7月~1999年8月间在本科收治的卵巢癌患者和卵巢良性肿瘤患者各30例,均经手术及病理检查证实。卵巢癌中浆液性囊腺癌16例,粘液性囊腺癌11例,混合性上皮癌3例。30例卵巢良性肿瘤患者中浆液性囊肿21例,粘液性囊肿9例。2组患者未合并其他感染。术前未经任何治疗时行上述3项指标检测。 2. 检测方法。TGFα放免试剂盒为北京东亚免疫技术研究所产品,TNFα放免试剂盒为Sigma公司产品,CA125免疫组化试剂盒为Centocor公司产品。操作严格按说明书进行。统计分析采用t检验。 二、结果与讨论 测定结果见表1。卵巢癌中28例TGFα、TNFα均升高;2例(病理检查均为卵巢浆液性囊腺癌,Ⅲ、Ⅳ期各1例)TGFα升高显著(分别为18.05和18.87 ng/L),而TNFα却升高不明显(分别为4.05和3.87 μg/L),此2例患者在上皮性卵巢癌COX模型预后评估因素及术后治疗相同的情况下,短期内(不足3个月)即出现腹水、贫血、纳差等恶病质状态,分别于术后4个月和7个月死亡。而另28例病程较平稳,出现腹水早为8个月。 TGFα和TNFα在同一个体肿瘤中表达水平的消涨,可反映机体与肿瘤相互斗争的情况,对肿瘤的生物学行为及肿瘤患者的预后判断可提供客观依据。82%的卵巢癌患者血清CA125浓度增高[1],其阳性检出率文献报道不一。
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寻常型银屑病皮损PCNA的表达及意义
我们采用免疫组化的方法检测30例寻常型银屑病患者皮损和12例正常人皮肤中PCNA的表达,以探讨PCNA在银屑病发病中的意义.现将结果报道如下.1 材料与方法1.1 材料所有标本均来自我院皮肤科存档的石蜡包埋标本(福尔马林固定),取临床和病理确诊为寻常型银屑病患者皮损共30例,其中男17例,女13例,平均年龄32岁,皆为进行期,病程8个月~29年,取材前均未系统或外用过糖皮质激素及免疫抑制药物.正常人皮肤组织12例,其中男5例,女7例,男性取自泌尿外科包皮环切术患者的包皮组织,女性取自整形外科行面部美容切除术者的皮肤,石蜡包埋作为对照组.PCNA免疫组化试剂盒为武汉博士德公司产品,即用型SP免疫组化染色试剂盒及浓缩型DAB显色试剂盒均为北京中杉生物技术有限公司产品.
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人胚胎肝脏褪黑素受体的鉴定
目的:应用免疫组织化和核酸原位杂交技术检测人胚胎肝脏的MEL受体及其亚型分布,为进一步研究MEL对肝脏功能的调节作用提供证据.方法:1.研究对象:中期水囊引产人胎儿,取出心脏和主动脉,立即用4%多聚甲醛+0.1%DEPC固定,石蜡包埋组织,4℃冰箱贮存待检测.2.MEL探针制备:培养含有MEL1A或MEL1B受体质粒的大肠杆菌,抽提质粒,酶切,地高辛标记探针(宝灵曼公司).3.核酸分子原位杂交:原位杂交检测试剂盒、APES、Poly-L-Lysine(多聚赖氨酸)和专用盖玻片均购自武汉博士德生物工程公司、APES与Poly-L-Lysine 联合应用处理载玻片.按原位杂交试剂盒的说明进行检测.实验设不加探针为阴性对照.4.免疫组织化学法:一抗为鼠抗人MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体,由香港大学生理系彭树勋教授馈赠.免疫组化试剂盒购自福建迈新公司.MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体的稀释浓度为1∶75,以缓冲液代替第一抗体作为阴性对照,下丘脑组织作为阳性对照.结果:1.肝脏MEL1A和MEL1B受体蛋白的检测:肝脏免疫组织化学染色结果显示,在人胚胎肝脏细胞存在MEL1A和MEL1B受体蛋白,分布于细胞膜和胞核,但以胞膜为主.2.肝脏MEL1A受体和MEL1B受体mRNA的检测:肝脏的核酸分子原位杂交结果显示,在肝细胞的胞核和胞浆均存在MEL1A和 MEL1B受体mRNA的表达,但以胞核为主.结论:肝细胞的胞膜和胞核存在MEL1A和MEL1B受体蛋白,同时在胞浆和胞核检测到MEL1A受体和MEL1A受体mRNA的表达,提示肝细胞存在MEL1A和MEL1B受体,从而证实了肝脏是MEL作用的外周靶器官.
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人胚胎心血管褪黑素受体的鉴定及其生物学特性
目的:应用免疫组织化学法和核酸分子原位杂交技术检测心脏和血管MEL受体蛋白及其mRNA的表达.方法:1.研究对象:中期引产人胎儿心脏和动脉血管,4%多聚甲醛+0.1%DEPC固定,石蜡包埋组织,置4℃冰箱贮存待检测.2.MEL控针制备:在LB培养基中分别培养含有MEL1A或MEL1B受体质粒的大肠杆菌,过液培养,离心,回收大肠杆菌.按照华舜公司质粒抽提纯化试剂盒说明抽提纯化质粒,酶切质粒(Xho内切酶和HindⅢ内切酶)地高辛标记探针(宝灵曼公司).3.核酸分子原位杂交:原位杂交检测试剂盒、Poly-L-Lysin(多聚赖氨酸)和专用盖玻片均购自武汉博士德生物工程公司.实验设不加探针为阴性对照.4.免疫组织化学染色:一抗为鼠抗人MEL1A和MEL1B受体单克隆抗体,由香港大学生彭树勋教授馈赠.免疫组化试剂盒购自福建迈新公司.微波修复抗原,MEL1A或MEL1B受体单克隆抗体稀释度为1∶75,以缓冲液代替第一抗体作为阴性对照,下丘脑组织作为阳性对照.结果:1.心脏和主动脉MEL1A和MEL1B受体蛋白的检测:免疫组织化学染色显示,心脏内皮细胞和心肌细胞均存在MEL1A和MEL1B受体,分布于细胞膜和胞核,但以胞膜为主;主动脉内皮细胞和平滑肌细胞MEL1A和MEL1B受体,见于细胞膜和细胞核,但以细胞膜为主.2.心脏和主动脉MEL1A和MEL1B受体mRNA的检测:心脏内皮细胞和肌细胞上均存在MEL1A和MEL1B受体mRNA的表达,分布于细胞浆和胞核,但以细胞核为主;主动脉内皮细胞和平滑肌细胞均有MEL1A和MEL1B受体mRNA的表达,见于细胞浆和胞核,但以细胞核为主.结论:心脏和主动脉血管存在MEL1A和MEL1B受体蛋白及其mRNA的表达,说明心脏和主动脉血管是MEL作用的靶器官,MEL通过位于心脏和主动脉血管的MEL1A和MEL1B受体发挥着对心脏和血管功能的直接调节作用,调节的具体机制尚需进一步阐明.
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一氧化氮及其合酶、同工酶在大鼠异种肝移植急性排斥中的免疫监测作用
一氧化氮(Nitric oxide,NO)在移植领域中的功能也越来越受到人们的普遍重视,本研究从多方面证实NO及其NO合酶在肝移植急慢性排斥反应中的免疫监测作用。一、材料与方法1. 材料:雄性健康Wistar大鼠,雌性健康金黄地鼠,体重150g~200g,购于上海市计划生育研究所。环胞素A,还原型β-辅酶Ⅱ四钠盐,硝基四唑氮蓝,Sigma公司产品;iNOS(NOSⅡ)兔抗大鼠多克隆抗体,cNOS(NOSⅢ)兔抗大鼠多克隆抗体,LSAB免疫组化试剂盒(Dako公司产品)。