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雌激素对去势大鼠髁突软骨雌激素受体基因表达的影响
目的 探讨不同浓度的雌二醇(E2)对去势大鼠髁突软骨雌激素受体(ER)基因ERα和ERβ表达的影响.方法 将SD大鼠分为对照组(control)、假手术组(sham)、去势组(ovx)、及时和延迟替代治疗组(OVX/17β-E2),每天静脉注射不同浓度雌二醇(5×l0、5×102和5×103μg/kg),阴道上皮脱落细胞涂片监测雌激素水平,用Western blot和real-timePCR法检测大鼠颞下颌关节髁突软骨ERα和ERβ的蛋白及mRNA表达.结果 去势大鼠阴道上皮细胞MI指数180/12/8,表明雌激素水平低下(P＜0.05).及时补给生理浓度雌二醇(5×102μg/kg)能维持髁突软骨ER于正常范围,延迟补给生理浓度雌二醇不能恢复或改善ER表达;及时和延迟补给高浓度(5×103 μg/kg)及低浓度(50μg/kg)E2均抑制ER蛋白和mRNA合成(P＜0.05),且高浓度效应显著.结论 及时补充合理浓度的雌激素对去势大鼠颞下颌关节的正常生理功能具有重要意义.
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下颌髁突软骨雌激素受体的测定
目的:对大鼠髁突软骨中雌激素受体(ER)进行了检测和分析,探讨ER与髁突软骨增生、分化的关系.材料和方法:选用25只4周龄、雌性SD大鼠,随机分成5组,分别于3天、1周、2周、3周、4周后将动物处死,应用葡聚糖-活性炭吸附法(DCC法)进行髁突软骨的雌激素受体的测定.结果:大鼠髁突软骨中存在雌激素受体,且其含量与髁突软骨的生长周期有关,增生旺盛期时受体含量较高,而分化期时含量较低.结论:研究表明,雌激素受体与髁突软骨的增生与分化密切相关;本研究证实了髁突软骨中存在雌激素受体的作用机制.
关键词： 髁突软骨 雌激素受体 葡聚糖-活性炭吸附法 -
兔颞下颌关节盘前移位的透射电镜研究
我们采用透射电镜观察手术造成兔颞下颌关节盘前移位后，髁突与关节盘的超微结构改变。 1.材料与方法：4～6个月龄日本大耳白兔10只，体重2～3 kg，随机分为正常对照组(2只)，手术和手术对照组(8只)。实验动物一侧颞下颌关节为手术组，另一侧为手术对照组。手术组动物用缝线拉关节盘前移，实验方法已报道。对照组的手术步骤与手术组相同，但不将关节盘拉向前方。2只正常对照组动物和8只实验组动物分别于术后2周(2只)、4周(2只)、8周(2只)、12周(2只)处死。取出关节盘和髁突固定24 h，髁突用5% EDTA脱钙2～3周。关节盘本体、双板区和脱钙后的髁突分别切成1 mm×1 mm×3 mm的组织块。标本固定，梯度脱水，包埋，切片，染色，透射电镜观察。 2.结果：手术对照组与正常对照组无明显差异。手术组肉眼见7侧为关节盘前移位，1侧为关节盘后带穿孔。透射电镜观察发现，关节盘前移位标本术后2周组髁突表层胶原纤维溶解，软骨细胞胞浆内有大量扩张的粗面内质网，线粒体肿胀，存在大量微丝。软骨细胞周围有大量的胶原纤维包绕，软骨陷窝消失。术后4周见髁突表层细胞成分减少，未分化间充质细胞比术后2周组增多，软骨细胞的细胞突起减少，胞浆内有大量粗面内质网，有大的空泡，部分软骨细胞出现核固缩，软骨陷窝消失。关节盘软骨细胞样细胞边界不清，细胞核异染色质凝集，胞浆细胞器模糊，甚至出现细胞核溶解。术后8周组见髁突深层的软骨细胞增多，胞浆内粗面内质网扩张，大量的微丝，空泡以及电子密度增高的小体，大量软骨细胞核固缩甚至溶解。关节盘胶原纤维排列紊乱，软骨细胞样细胞溶解，出现变性胶原纤维以及弹力纤维的断面。术后12周组见髁突未分化间充质细胞及软骨细胞明显增多，软骨陷窝消失，细胞内外有大量的电子密度增高的小体，部分软骨细胞核固缩。关节盘软骨细胞样细胞电子密度明显增高，胶原纤维束界限模糊，组织中可见弹力纤维的断面。 关节盘穿孔的标本见髁突部分软骨细胞核染色质变深，甚至出现核固缩。关节盘胶原纤维排列紊乱或断裂，其内有大量电子密度增高的物质。软骨细胞样细胞边界不清，粗面内质网增多、胞浆内出现空泡，细胞周围的陷窝消失。 3.讨论：我们用手术造成关节盘前移位的动物模型，经透射电镜观察，早期髁突纤维层胶原纤维溶解，细胞破坏。未分化间充质细胞消失。软骨细胞胞浆内，粗面内质网扩张，线粒体肿胀并出现大量微丝，软骨陷窝消失，说明关节软骨出现了早期的退行性改变。由于髁突软骨的未分化间充质细胞有修复潜力，所以早期的退行性改变是可逆的。术后4周见髁突软骨内未分化间充质细胞及软骨细胞增多，软骨细胞胞浆内有大量的粗面内质网。粗面内质网与高尔基复合体的出现，可产生蛋白多糖和胶原，表明关节软骨有修复反应。但同时由于存在软骨细胞坏死，电子密度增高的小体与空泡增多说明有退行性改变。Toller等认为髁突软骨细胞成团，粗面内质网扩张，出现电子密度增高的溶酶体样小体，细胞内微丝集聚，细胞坏死增多，细胞外基质小泡增加，胶原纤维退行性改变并出现巨大胶原纤维和弹力纤维，均是骨关节病变的表现。本项研究关节盘穿孔和关节盘前移位后期的动物标本超微结构改变与其相似。
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髁突软骨的细胞分层及其功能研究
我们通过对髁突软骨细胞进行PCNA、FGFR3、Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚合体基因表达等研究,探讨髁突软骨的分层及其功能.1.材料和方法:成年日本大耳白兔共6只,雌雄各半.处死动物后,取TMJ标本, HE染色和免疫组化标本用多聚甲醛固定,EDTA脱钙,石蜡包埋.免疫组化采用超敏SP法.抗FGFR3多克隆抗体购自Santa Cruz 公司(美国), 抗PCNA单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒(购自福州迈新公司).基因序列、引物设计、RNA探针制备和原位杂交方法同以前的研究[1].
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转化生长因子β对白细胞介素1β诱导髁突软骨细胞凋亡的调控作用
关节软骨进行性破坏是骨关节炎(osteoarthoritis,OA)的主要病理改变之一.近来发现OA关节软骨有异常的软骨细胞凋亡,这可能与OA关节软骨的破坏有关.我们就TGF-β在人重组白细胞介素-1β(rhIL-1β)诱导髁突软骨细胞凋亡中的作用进行了研究.1.材料和方法:(1)rhIL-1β诱导软骨细胞凋亡:将髁突软骨细胞接种于培养瓶中,密度为3×104/ml,培养至对数生长期,实验组分别加入含有rhIL-1β(1、10、20 ng/ml)及二甲基亚砜(DMS0,15μl/ml)的DMEM培养液,处理8、16、24 h后收集细胞.分别用流式细胞仪、透射电镜、DNA电泳检测细胞凋亡.对照组不加rhIL-1β.
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Ⅱ型胶原在颞下颌关节骨关节病髁突软骨的表达
目的:观察Ⅱ型胶原(CⅡ)在颞下颌关节骨关节病(TMJOA)髁突软骨的变化特征,探讨CⅡ在TMJOA髁突软骨破坏中的作用.方法:采用部分切除关节盘的方法诱发TMJOA动物模型,应用免疫组织化学的方法检测CⅡ在不同病变时期髁突软骨的表达.结果:关节盘部分切除后,CⅡ在不同病变时期髁突软骨的表达均有所增强.结论:CⅡ可能在骨关节病髁突软骨的破坏过程中起代偿作用.
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Ⅲ类矫形治疗对下颌髁突细胞PCNA表达影响的研究
目的 观察Ⅲ类矫形治疗对下颌髁突软骨细胞增殖的影响.方法 选取青春发育期的雄性恒河猴6只,随机分为1.5月组和3月组.实验组各2只,对照组各1只.实验组戴用Ⅲ类铸造式磁力矫治器,对照组不戴.运用免疫组织化学检测PCNA,分别计算软骨各层PCNA的平均阳性细胞率.结果 实验组较对照组前斜面PCNA阳性细胞率增大,而后斜面PCNA阳性细胞率减小.1.5月组较3月组变化明显.结论 Ⅲ类矫形力使髁突软骨前斜面细胞增殖活跃,后斜面细胞增殖受到抑制,提示临床在进行Ⅲ类矫形治疗时,选择力的性质、加力方式和大小是非常重要的.
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IGF-1、IGF-1R及Bcl-2,Bax在大鼠髁突软骨发育中的表达及作用
目的 探讨大鼠髁突软骨发育过程中IGF-1、IGF-1R及凋亡相关因子Bcl-2、Bax的表达、分布以及可能发挥的作用.方法 获取出生后1、7、14、28d SD大鼠髁突,甲苯胺蓝染色观察软骨结构.免疫组化染色检测IGF-1、IGF-1R、Bcl-2、Bax在各年龄组SD大鼠髁突软骨的分布.Western blot及real-time PCR分别检测各年龄组软骨细胞内IGF-1、IGF-1R、Bcl-2、Bax蛋白及mRNA的表达.结果 甲苯胺蓝染色结果显示随年龄递增,大鼠髁突软骨逐渐变薄,宽度增加.免疫组化染色显示IGF-1、IGF-1R、Bcl-2在增殖层至肥大软骨细胞浅层分布明显,Bax主要表达在成熟层及肥大层.Real time PCR及Western blot结果表明出生后的IGF-1 mRNA的表达逐渐降低,至28d时表达开始增强,IGF-1R蛋白及mRNA出生后稍有波动但表达相对平稳,Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达逐渐增强,至出生14d时表达开始下降(P＜0.05).结论 IGF-1、IGF-1R及凋亡相关因子Bcl-2、Bax的表达及分布相关,共同参与调控髁突软骨的发育.
关键词： 胰岛素样生长因子-1 胰岛素样生长因子-1受体 Bcl-2 Bax 髁突软骨 -
应力作用于髁突软骨细胞信号转导的可能机制
应力作用下,髁突软骨细胞发生一系列的生物学改变[1～5],如影响细胞的增殖、分化以及凋亡过程.对于外源性机械力学信号,髁突软骨细胞是如何识别并作出相应的生物学反应呢?研究表明,应力作用下,髁突软骨细胞的信号转导机制复杂交叉,涉及多种生物分子,影响因素众多.本文就髁突软骨应力信号转导的可能机制做一综述.
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微支抗种植体及不同矫治力作用下髁突软骨中核心结合因子a1的表达
背景:近年来微支抗种植体以其操作简单、创伤小、支抗强等优点被正畸医生广泛应用于口腔正畸临床,但鲜见用于Ⅱ类颌间的牵引.目的:以微种植体为支抗,探讨不同矫治力促兔下颌前导后髁突软骨中核心结合因子a1 蛋白的表达及与髁突改建的影响.方法:8 周龄健康新西兰大耳白兔随机分为实验组和对照组,实验组根据矫治力的不同分为100 g、200 g、300 g 和400 g 组.实验组动物以微型螺钉种植体为支抗,对兔下颌进行Ⅱ类颌间牵引.实验后4 周取材,检测髁突软骨中Cbfa1的表达.结果与结论:下颌持续牵引后,髁突后区各层的厚度明显高于髁突中前部.与对照组相比随矫治力的增加髁突各层厚度增加,髁突软骨中Cbfa1 表达也明显增加,至200 g 时达到峰值,而后随矫治力的增加,髁突各层厚度逐渐变薄,髁突软骨中Cbfa1 表达也逐渐降低(P < 0.05),提示矫治力能影响髁突软骨中Cbfa1 的表达,说明适宜的矫治力作用有利于髁突软骨的改建.
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山羊下颌骨牵张成骨中髁突软骨表面应力分布的三维有限元研究
目的:分析山羊下颌骨牵张成骨中下颌骨牵张延长后髁突软骨表面的应力分布规律.方法:实验于2005-01/12在四川大学华西口腔医院动物手术中心和四川大学生物力学工程实验室完成.对1只山羊右下颌骨行骨皮质切开术后进行牵张,每日加力4次,牵张频率为每6小时0.2 mm,每天共延长下颌骨0.8 mm,牵张速率为0.8 mm/d,连续加力12 d后固定牵张器进入牵张固定期,牵张完成后第4周处死动物,采用SIMENSSOMATOM 16型螺旋CT对其颅面骨行CT扫描后,将CT影像导入专用三维图像重建软件mimics进行三维模型的重建,并采用有限元分析软件Patran对所建下颌骨模型的颢下颌关节髁状突软骨表面的应力分布进行分析计算.结果:①术侧髁突软骨表面各部位的应力值远高于对侧[术侧范氏力(MPa)/对侧范氏力(MPa):髁突前内斜面为14.6/0.92,髁突前中斜面为2.3/0.17,髁突前外斜面为4.5/0.9,髁突横嵴内1/3为5.7/0.6,髁突横嵴中1/3为2.6/0.8,髁突横嵴外1/3为1.8/0.11,髁突后内斜面为1.7/1.1,髁突后中斜面为0.9/0.2,髁突后外斜面为1.4/0.3].②术侧髁突前斜面为主要受压区域,髁突横嵴区和髁突后斜面为主要受拉区域.③术侧髁突前后向观察,髁突前斜面的范氏力平均值大,髁突横嵴区域其次,髁突后斜面区域应力平均值低;从髁突内外向观察,髁突内侧的平均范氏力大于髁突中份和外侧.结论:下颌骨牵张成骨中由于牵张力的作用会导致术侧髁突软骨表面产生一定的应力,应力的产生可能导致关节结构改变.
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功能性下颌偏斜青春期模型大鼠髁突软骨中血管内皮细胞生长因子的表达
背景:对于功能性下颌偏斜是否会导致骨性的下颌偏斜以及发生功能性下颌偏斜后下颌骨的生长方式是否会发生改变,目前尚存在争议.血管内皮细胞生长因子能够使内皮细胞的渗透性增加、刺激血管内皮细胞的有丝分裂、促进血管生成以及调节骨的形成.目的:探索大鼠功能性下颌偏斜对其髁突软骨中血管内皮细胞生长因子表达的影响及意义.方法:选4周龄雄性SD大鼠60只,随机分为对照组(n=20)和实验组(n=40).实验组大鼠佩戴作者所在课题组自制镍铬合金上前牙冠套,使下颌发生功能性左偏(2.1±0.3) mm,模拟功能性下颌偏斜.结果与结论:造模后7-28 d功能性下颌偏斜模型大鼠髁突软骨矢状向后部区域偏斜侧血管内皮细胞生长因子的阳性细胞数量较非偏斜侧减少;造模后14-28 d功能性下颌偏斜模型大鼠髁突软骨矢状向中部及冠状向中部区域偏斜侧血管内皮细胞生长因子的阳性细胞数量较非偏斜侧减少,但与对照组接近;造模后14-28 d功能性下颌偏斜模型大鼠髁突软骨冠状向外部区域偏斜侧血管内皮细胞生长因子的阳性细胞数量较非偏斜侧和对照组减少.说明青春期大鼠发生功能性的下颌偏斜后,双侧髁突软骨中的血管内皮细胞生长因子表达存在差异,导致软骨内的成骨活动发生变化,进而可能使大鼠下颌骨的正常生长发育受到影响,提示应尽早矫治功能性下颌偏斜.
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牙本质基质蛋白-1参与下颌功能前伸过程中髁突软骨增殖的实验研究
目的 探讨牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein,DMP-1)对功能矫治前伸下颌过程中髁突骨软骨增殖的作用,为临床骨性Ⅱ类错(牙合)矫形提供实验依据.方法 选用4周龄健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠70只,随机等量分为实验组和对照组,实验组大鼠全天佩戴下颌前伸斜面导板,对照组不做任何处理.于实验第1、3、7、14、21、28和35天每组分别处死大鼠5只,取双侧髁突,采用免疫组织化学方法及细胞图像分析系统检测DMP-1的表达变化.结果 实验组大鼠髁突软骨中DMP-1表达于第3天开始增强,至第14天达到高峰,强度-色调-饱和度(IHS)值(85.67±4.51)与对照组(10.67±1.53)相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DMP-1参与大鼠下颌前伸过程髁突软骨适应性改建,促进髁突软骨增殖和软骨内成骨.
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应用Herbst矫治器前伸成年大鼠下颌后髁突软骨RUNX2蛋白表达变化的实验研究
目的 通过研究Herbst矫治器引导成年大鼠下颌前伸后髁突软骨RUNX2蛋白表达水平的变化,探讨Herbst矫治器应用于成年患者的可行性.方法 60只14周龄雄性SD大鼠,根据实验周期(3、7、14、21和30 d)分为5组,每组内随机分为实验组(6只)和对照组(6只).实验组大鼠全天佩戴Herbst矫治器引导下颌前伸,对照组大鼠不佩戴矫治器.实验后3、7、14、21和30 d分别处死各组大鼠,取右侧髁突组织,免疫组化检测髁突软骨中RUNX2蛋白的表达水平.结果 随着观测时间的延长,对照组中大鼠髁突软骨RUNX2表达的IOD值呈现递减趋势,但各时间点差异并无统计学意义(P＞0.05)；除3d组外,其余各时间点实验组大鼠髁突软骨RUNX2表达的IOD值均较对照组高(P＜0.05),且在21d时,其IOD值与对照组相差幅度大.结论 Herbst矫治器能够诱导成年大鼠髁突发生适应性改建.
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成长期大鼠下颌侧方偏位对髁突及下颌骨形态的影响
目的:观察下颌侧方偏位对成长期大鼠髁突及下颌骨形态的影响,阐明下颌侧方偏位与下颌骨不对称畸形的关系.方法:选用健康雄性4周龄Wistar大鼠48只,随机分为实验组24只和对照组24只.于实验组大鼠上颌切牙上黏固有侧方诱导斜面的超硬树脂冠,并于下颌切牙上黏固自制的金属冠,大鼠咬合时下颌被诱导向左侧约2 mm(偏位侧).于实验开始2、4、8和12周后处死实验组及对照组大鼠,游离大鼠双侧下颌骨.用游标卡尺测量髁突的长度和宽度,通过软X线片定点进行下颌骨形态的测量.结果:实验组大鼠偏位侧髁突软骨长度明显大于对侧(P<0.05),而髁突软骨宽度两侧无明显差别.实验组大鼠下颌骨不对称,偏位侧下颌骨长度明显小于非偏位侧,高度大于非偏位侧(P<0.05).实验组大鼠下颌骨的生长方向也受到影响,偏位侧更向前上方生长.结论:下颌侧方偏位导致双侧髁突形状及生长方向的不同,进而导致下颌骨不对称畸形.
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慢性睡眠限制状态下大鼠髁突软骨MMP-1, MMP-13表达的变化
目的:探讨MMP-1,MMP-13在慢性睡眠限制引起大鼠髁突软骨结构变化中的表达变化及作用.方法:180只雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=60):慢性睡眠限制组(CSR)、大平台组(LC)、茏养组(CON).每组根据试验时间不同分别分为3个亚组(n=20):7天(7D)、14天(14D)、21天(21D)组.参考改良多平台法(MMPM)建立大鼠的慢性睡眠限制模型.通过HE染色观察大鼠髁突软骨的结构变化.通过免疫组化和实时定量PCR分别检测MMP-1和MMP-13的蛋白水平及mRNA水平的表达变化.结果:HE染色和扫描电镜结果显示,CSR组的大鼠髁突软骨出现了病理性的改变.与CON和LC组比较,CSR组MMP-1和MMP-13的mRNA转录和蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).结论:慢性睡眠限制能够引起大鼠颞下颌关节髁突软骨的病理性变化.MMP-1和MMP-13的表达水平的变化可能在大鼠髁突软骨病理性改变中起关键作用.
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慢性睡眠剥夺对颞下颌关节微结构的影响
目的:研究慢性睡眠障碍对大鼠颞下颌关节微结构的影响.方法:采用改良多平台法(MMPM)建立睡眠剥夺模型,将90只Wistar大鼠随机分为3组(n=30),分别为小平台组、网格组和对照组.小平台组和网格组大鼠接受每天18h的睡眠剥夺和6h间歇期(10:00-16:00),间歇期大鼠正常笼养.实验第7、14和21天时分别行动物行为学观察、旷场试验和动物血浆检测,并通过HE染色和扫描电镜观察颞下颌关节微结构的变化.结果:与对照组和网格组相比,小平台纽大鼠血清促肾上腺激素(ACTH)和皮质醇(CORT)水平均增高(P＜0.05),髁突软骨HE染色显示软骨细胞层次及厚度改变;扫描电镜结果显示关节盘表面纤维排列松散.结论:慢性睡眠障碍可能导致颞下颌关节微结构发生病理性改变.
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不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响
目的:就不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响进行探讨.方法:加载压力分别为36kPa、24kPa、12kPa、0kPa,持续静压1h,在加力后立即(0h)收集细胞进行检测,并且开展流式细胞术检测.结果:当加载压力分别为36kPa、12kPa时,与0kPa相比,髁突软骨细胞的各个增殖、凋亡指数都呈现出明显的下降趋势,具有统计学意义(P＜0.05).当加载压力为12kPa时,细胞凋亡指数减幅大;当加载压力为36kPa时,细胞增殖指数减幅大.结论:不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡有一定的影响,但并非线性关系,值得深入研究.
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静张应力对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节研究
目的:就静张应力对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节进行研究.方法:对SD大鼠下颌髁突软骨细胞予以培养,分别在小牛血清浓度为15％、5％的DMEM培养基中培养第4代髁突软骨细胞0h、6h、12h后,对其DNA含量予以测定;分别在静张应力为10kPa、5kPa的DMEM培养基中培养第4代髁突软骨细胞0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h后,对其DNA含量予以测定.结果:当静张应力为15kPa时,随着培养时相的延长,大鼠髁突软骨细胞的PI指数也同样呈现出“先逐步上升、后又下降”的趋势,但是下降的起始时间要比静张应力为5kPa时更早,在4～12h时的PI指数与对照组存在着较为明显的差异,具有统计学意义(P＜0.05).结论:髁突软骨细胞的增殖活性能够被静张应力所调节,值得推广应用.
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机械压力及细胞内钙释放通道阻滞对颞下颌关节髁突软骨细胞骨架影响的研究
目的探讨颞下颌关节髁突软骨细胞(mandibular condylar cartilage,MCC)的骨架系统随机械力的变化过程及其是否受到细胞内钙及其IP3通道的影响.
