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SD乳鼠窦房结细胞原代分散培养的光电镜研究
目的探索体外窦房结细胞原代纯化培养方法,观察培养的窦房结细胞生长状况及光电镜形态学特征. 方法 (1)用差速贴壁和Brdu处理作细胞培养;(2)观察和记录各类型培养细胞的生长状况;(3)HE染色和Heidenhain苏木素染色;(4)透射电镜观察. 结果在培养的窦房结细胞中,至少有3种自发性收缩细胞及少量的星状和不规则细胞.收缩性细胞中,多的是多边形细胞,其次是梭形,少的是三角形细胞,且多边形细胞收缩频率低(75.27±1.73/min( )±s),细胞染色和电镜观察结果显示:多边形细胞的细胞器相似于原位窦房结组织中的起搏(P)细胞,梭形细胞相似于移行(T)细胞,P细胞核旁较易见到电子致密颗粒和中心粒,也常见细胞核染色体正处于细胞周期的分裂期的前、中期. 结论多边形细胞很幼稚,具有不断分裂增埴的能力.
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不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响
目的:就不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响进行探讨.方法:加载压力分别为36kPa、24kPa、12kPa、0kPa,持续静压1h,在加力后立即(0h)收集细胞进行检测,并且开展流式细胞术检测.结果:当加载压力分别为36kPa、12kPa时,与0kPa相比,髁突软骨细胞的各个增殖、凋亡指数都呈现出明显的下降趋势,具有统计学意义(P＜0.05).当加载压力为12kPa时,细胞凋亡指数减幅大;当加载压力为36kPa时,细胞增殖指数减幅大.结论:不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡有一定的影响,但并非线性关系,值得深入研究.
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新生SD大鼠细菌性脑膜炎动物模型的建立
目的 建立新生SD大鼠细菌性脑膜炎(BM)动物模型.方法 11日龄新生SD大鼠分为实验组(n=30)、正常对照组(n=10)和生理盐水对照组(n=10).实验组经小脑延髓池分别接种不同浓度B组链球菌Ⅲ(GBSⅢ)10μL,生理盐水对照组用生理盐水替代GBSⅢ,正常对照组不作处理.观察发绀、呼吸困难等临床症状及早出现的症状和时间点.采用Loeffler的评分方法作行为评分.根据Racine的抽搐分级标准进行抽搐评价.脑脊液(CSF)作WBC计数、细菌培养,作心血细菌培养.观察脑组织病理学改变,作细胞凋亡检测.结果 实验组出现所观察的全部临床症状,早于感染后6h出现发绀;神经行为学评分低于对照组(P＜0.01);多数出现抽搐(21/30),其分级均在Ⅳ级以上;CSF的WBC计数高于对照组(P＜0.05);CSF和心血培养出的细菌与接种细菌相同;神经细胞出现坏死和凋亡,凋亡指数为15.92±5.36%.对照组均无临床症状,细菌培养阴性,脑组织病理学检查正常.结论 11日龄SD新生大鼠经小脑延髓池接种GBSⅢ,可成功地制作BM动物模型.
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葛根素对成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响
目的:探讨葛根素(Pue)对高糖培养的成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原mRNA (Coll Ⅰ mRNA)表达的影响,为临床治疗糖尿病骨质疏松症提供实验依据.方法:取出生24h内的SD大鼠的颅骨,体外分离培养成骨细胞,待细胞形态稳定后,取对数生长期的成骨细胞,随机分为正常组、高糖组(葡萄糖浓度22 mmol/L)、葛根素各浓度组(葛根素浓度分别为10-8 mol/L、10-7moFL、10-6 mol/L)、高糖加葛根素各浓度组,每组设8个复孔,分别培养48 h,隔天换液并加药.测定成骨细胞的增殖能力、细胞内ALP活性以及Coll Ⅰ mRNA表达情况.结果:与正常组比较,葛根素各浓度组细胞增殖、细胞ALP活性、细胞Coll Ⅰ mRNA表达均显著增高,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜0.01);高糖组、高糖+葛根素各浓度组明显低于正常组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜ 0.01).与高糖组比较,高糖+葛根素各浓度组细胞增殖、细胞ALP活性、细胞Coil Ⅰ mRNA表达均显著增高,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜ 0.01).结论:高糖情况下抑制成骨细胞的增殖、分化和Ⅰ型胶原表达,但加入葛根素后能提高成骨细胞的增殖、分化和Ⅰ型胶原表达,说明葛根素对糖尿病骨质疏松症有治疗作用.
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新生大鼠心肌细胞体外原代培养及鉴定
目的 探讨一种较为理想的体外原代心肌细胞培养的方法.方法 取新生SD大鼠心脏心尖部,冷胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶-BSA消化分离单细胞,二次差速贴壁法纯化心肌细胞,倒置相差显微镜和流式细胞仪检测细胞存活率、活力及纯度.结果 获得的心肌细胞存活率为90％,纯度达94％以上,自发搏动明显,频率为80～ 120次/min,且培养前15 d细胞搏动频率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本方法可获得较高存活率及纯度的心肌细胞,可满足实验要求.
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哺乳期阻断JAK2/STAT3信号通路对新生鼠青年期、成年期的影响
目的:观察哺乳期阻断JAK2/STAT3信号通路对新生SD大鼠青、成年期的影响.方法:通过限制妊娠期饮食建立小于胎龄鼠(SGA)新生鼠模型;在哺乳期予新生鼠皮下注射AZD1480,观察新生鼠在青、成年期体质量、鼻尾长、腹围、体重指数(BMI>值的变化.结果:正常出生体重鼠(AGA)新生雌鼠在各个日龄检测时间点皮下注射AZD1480各项指标均小于对照组,SGA雌鼠在出生后30d体质量及BMI大于对照组(P＜0.05).AGA雄鼠在出生后90d日龄BMI值大于对照组(P＜0.05),SGA雄鼠在出生后90 d体质量、腹围及BMI值大于对照组(P＜0.05).结论:阻断JAK2/STAT3通路,SGA雌鼠在青年期BMI值增高,SGA及AGA雄鼠在成年期BMI值增高,AGA雌鼠在观察日龄无BMI值增高.脂质代谢存在其他作用通路.
关键词： AZD1480 JAK2/STAT3 新生SD大鼠 肥胖 -
博莱霉素制备新生SD大鼠慢性肺部疾病模型
目的 探索合适剂量的博莱霉素(BLM)腹腔注射导致新生SD大鼠肺发育不良,肺间质纤维化,建立一种新的慢性肺部疾病(CLD)动物模型.方法 30只2日龄新生SD大鼠随机分为3组,每组10只,分别予BLM 5.0、7.5 mg/(kg·d)及等体积生理盐水连续5 d腹腔注射,分别于第14、30天各处死5只.观察新生大鼠的存活状况,肺组织病理改变、Masson染色和羟脯氨酸(HYP)含量的变化.结果 给予5.0 mg/kg BLM后大鼠可存活4周以上,肺组织病理主要为小肺泡数量减少,肺间隔增厚,Masson染色可见肺间隔有较多蓝色胶原沉积,HYP增加等肺发育不良、肺纤维化的表现;7.5 mg/kg BLM注射后大鼠陆续死亡,肺组织病理为肺泡出血,肺结构紊乱;等体积生理盐水注射大鼠存活状况良好,肺组织未见有病理改变.结论 新生SD大鼠用BLM 5.0 mg/kg连续5 d腹腔注射,可成功制备CLD模型.
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环境噪音对新生大鼠身长体质量及学习记忆的影响
目的 研究环境噪音对新生大鼠身长体质量及学习记忆的影响.方法 选用7dSD大鼠16只,分为高噪音组和对照组,每组8只,高噪音组的平均噪音为90 db(A)、对照组50 db(A).分别在P10、P15、P20时进行身长、体质量的测量,P20时利用Morris水迷宫观察学习记忆功能、ELISA检测生长激素,RT-PCR、Western blot观察突触素表达.结果 高噪音组身长、体质量低于同年龄对照组大鼠[身长(cm):P10(9.54 ±0.1 )vs(9.98±0.1),P15(10.24±0.1)vs(10.79±0.1),P20(10.59±0.1)vs(11.68±0.1)；体质量(g):P10( 14.33±0.02)vs(14.51±0.02),P15(15.31±0.02)vs(15.68±0.02),P20( 16.63±0.02)vs( 16.76±0.02),P＜0.05]；与对照组比较,高噪音组学习能力下降,生长激素、突触素(synaptophysin,SYP)mRNA、SYP表达水平低于同年龄对照组大鼠[生长激素(pg/ml)；(299.7±4.9) vs(504.9±13.14),SYP mRNA:(0.182±0.008) vs(1.056±0.011),SYP:(0.168 ±0.007)vs(0.432±0.025),P＜0.05].结论 高噪音环境下新生SD大鼠的身长、体质量增长缓慢,学习记忆能力下降.
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重复应用TGF-β1对缺氧缺血性新生大鼠的影响
目的 探讨重复应用转化生长因子(TGF)-β1对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的影响.方法 95只不分性别的7日龄新生SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、处理组(生理盐水干预组及TGF-β1干预组),模型成功后2h、10d,处理组腹腔注入10ng的生理盐水或TGF-β1,原位末端标记法和SP免疫组织化学方法,观察10d和40d后脑组织海马CA1区锥体细胞凋亡情况和Caspase-3表达.结果 建模后10d,与正常对照组和假手术组相比,TGF-β1治疗组海马CA1区锥体细胞凋亡存在(t=9.35,P<0.05),Caspase-3表达可见(t=7.43,P<0.05);与模型组和盐水干预组比较,细胞因子TGF-β1治疗组海马CA1区锥体细胞凋亡明显减少(t=5.63,P<0.05),Caspase-3表达减轻(t=4.55,P<0.05).建立模型后40d,与正常对照组和假手术组相比,模型组海马CA1区锥体细胞凋亡存在(t=7.25,P<0.05),Caspase-3表达可见(t=8.17,P<0.05),TGF-β1治疗组海马CA1区锥体细胞凋亡仍存在(t=6.07,P<0.05),Caspase-3表达可见(t=3.98,P<0.05).结论 新生大鼠脑缺氧缺血后应用TGF-β1具有明显的保护作用;单剂量应用TGF-β1可以保护神经元,重复应用TGF-β1未使保护神经元的作用得到延长;TGF-β1的作用可能是通过减少凋亡相关蛋白Caspase-3的表达起到作用的;该实验为细胞因子TGF-β1用于临床治疗缺氧缺血性脑损害提供了一些理论依据,并为TGF-β1治疗脑损伤机制的探讨提供了一定思路.
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TGF-β1对新生缺氧缺血性脑损伤大鼠的影响
目的 探讨TGF-β1对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型的保护作用.方法 95只新生不分性别的7日龄SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、干预组(盐水组及治疗组),模型建立成功后2小时,干预组大鼠腹腔注入10ng的盐水或TGF-β1,用免疫组织化学方法 观察建立模型后2小时及给药后24小时脑组织海马CA1区锥体细胞凋亡的情况和Caspase-3表达的变化.结果 建模后2小时模型组与正常对照组和假手术组比较,脑海马CA1区锥体细胞凋亡明显增加(U1=11.58、U2=11.50,均P<0.01),Caspase-3表达增强(U1=3.49、U2=5.31,均P<0.01);给药后24小时模型组与正常对照组和假手术组比较,脑海马CA1区锥体细胞凋亡明显增强(U1=14.56、U2=14.65,均P<0.01),Caspase-3表达增强(U1=4.95、U2=5.91,均P<0.01);治疗组与模型组和盐水干预组比较,脑海马CA1区锥体细胞凋亡明显减轻(U1=11.39、U2=9.19,均P<0.01),Caspase-3表达减少(U1=3.34、U2=2.83,均P<0.01).结论 脑缺氧缺血后应用TGF-β1具有明显的保护作用,TGF-β1可显著减少新生大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区锥体细胞的凋亡,TGF-β1保护神经元、减轻凋亡可能是通过减少凋亡相关蛋白Caspase-3的表达起作用的.
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新生SD大鼠心肌细胞培养方法的简化及改良
目的 改良简化心肌细胞培养的条件和方法 ,培养纯度高、存活时间长的新生SD大鼠的心肌细胞.方法 采用含牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的Ⅱ型胶原酶单次消化心肌、差速贴壁1 h纯化心肌细胞进行培养,全过程在37℃条件下进行.于培养5、10、15、20、25、30 d时,用台盼蓝染色法检测细胞的存活率,并在生物倒置显微镜下观察形态学变化.取培养48 h的细胞,用免疫组织化学染色的方法 检测心肌细胞的纯度.结果 心肌组织在6 h时基本消化完全.培养5、10、15、20、25、30 d时,用台盼蓝染色法检测心肌细胞的存活率均大于95%,培养30 d时仍为95.2%.在生物倒置显微镜下观察,培养24 h左右的细胞之间形成交联并有细胞搏动.培养48h的细胞经免疫组织化学染色法测定,心肌细胞的纯度为(97.1±1.9)%.结论 应用改良并简化的心肌细胞培养方法 和培养条件,可得到纯度和存活率均高能满足大多数科研要求的原代乳鼠心肌细胞.
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用于SD大鼠神经祖细胞增殖分化研究的体外培养法的建立
目的 建立一种用于SD大鼠神经祖细胞(NPC)增殖分化研究的体外培养法,为深入研究其增殖分化奠定基础.方法 机械法分离和传代新生SD大鼠海马组织NPC,应用特定培养基进行体外培养,BrdU标记后应用免疫荧光法观察鉴定NPC和分化后神经细胞.对机械法离解后的活细胞率差异进行比较.结果 培养的NPCs可以在体外进行培养扩增,体外传代至第9代末仍可见Nestin抗体阳性的神经球形成,并且有分化为3种神经终末细胞的潜能.每次机械法分离后的NPC活细胞率的差异无统计学意义(P>0.05).结论 建立的SD大鼠NPC体外培养法更利于增殖分化的研究.
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细胞凋亡参与新生SD大鼠窒息条件下胃肠粘膜损伤作用的研究
目的阐明细胞凋亡在新生SD大鼠窒息条件下对胃肠粘膜损伤的影响.方法用20只新生SD大鼠建立轻、中、重度窒息模型,采集胃粘膜标本,分别进行电镜、DNA电泳检测细胞凋亡是否存在;采用RNA打点杂交及免疫组化技术检测凋亡基因窒息模型.结果电镜、DNA电泳证实细胞凋亡只存在于中、重度窒息模型的新生SD大鼠胃肠粘膜;RNA打点杂交显示Fas基因在新生SD大鼠轻、中、重度窒息模型中呈逐渐升高的表达;免疫组化表明Fas蛋白在新生SD大鼠轻、中、重度窒息模型中呈逐渐升高的表达.结论细胞凋亡参与新生SD大鼠窒息条件下胃肠粘膜损伤;Fas基因与Fas蛋白在新生SD大鼠轻、中、重度窒息模型呈逐渐升高的表达.
