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全脑缺血再灌注对大鼠延髓内脏带NADPH-d阳性神经元分布与Fos蛋白表达的影响
目的观察大鼠全脑缺血/再灌注不同时间点延髓内脏带(MVZ)内NADPH-d阳性神经元与Fos蛋白表达的变化及相互关系. 方法采用4血管闭塞(4VO)改良法以及运用NADPH-d组织化学反应和Fos 免疫组织化学反应及双重染色技术对全脑缺血30 min,再灌注2 h、4 h、8 h、12 h、 24 h、48 h对MVZ进行研究. 结果脑缺血组MVZ内NADPH-d阳性神经元染色反应增强和Fos蛋白表达随脑缺血后再灌注时程而变化,并见有15%～20%阳性双染细胞. 结论在全脑缺血再灌注过程中,MVZ内NADPH-d阳性神经元与Fos蛋白表达的分布变化具有相关性,提示在脑缺血状态下MVZ参与机体的应激反应.
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前庭代偿过程中脑干相关c-Fos/NADPH-d的表达
目的 通过研究大鼠前庭神经损伤后,分别在静止、角加速度刺激状态下,c-Fos/NADPH-d阳性神经元在脑干的前庭神经内核、舌下神经前置核分布的改变,探讨前庭代偿机制.方法 将60只SD大鼠分为无手术组、单耳前庭神经切断手术组和双耳前庭神经切断手术组3组,每组20只.每组一半在静止状态,另一半接受角加速度刺激.用NADPH-d组织化学和c-Fos免疫组织化学双染法观察c-Fos/NADPH-d阳性神经元分别在前庭神经核、舌下神经前置核区分布的改变.结果 静止状态下的无手术组、双耳前庭神经切断手术组鼠和旋转刺激后的双耳前庭神经切断手术组鼠在双侧前庭神经内核、舌下神经前置核无c-Fos/NADPH-d阳性神经元.单耳前庭神经切断手术组鼠在同侧前庭神经内核、对侧舌下神经前置核有c-Fos/NADPH-d阳性神经元分布.旋转刺激后的无手术组鼠和单耳前庭神经切断手术组鼠在双侧前庭神经内核、舌下神经前置核有大量的c-Fos/NADPH-d阳性神经元.结论 一侧前庭损伤后,同侧前庭神经内核、对侧舌下神经前置核内c-Fos阳性神经元在前庭代偿早期可能起启动作用,一氧化氮为关键神经递质.
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先天性巨结肠术中NADPH-d法快速冰冻病理诊断的研究
目的 研究先天性巨结肠术中病理诊断的常见染色方式,探讨NADPH-d染色法在术中诊断巨结肠的可行性及准确性,寻找更加快速精准的巨结肠术中诊断途径.方法 60例经石蜡切片HE染色病理确诊先天性巨结肠患儿的术中切除肠管包括痉挛段、正常段肠管,全部标本术中均行冰冻HE染色,将标本行NADPH-d冰冻切片染色,与冰冻HE染色结果进行对比分析.结果 全部病例中NADPH-d染色正常肠段阳性57例,阴性3例,全部痉挛肠段无阳性结果;冰冻HE染色正常肠管全部为阳性结果,痉挛段肠管全部为阴性结果.经统计学分析,两种方法阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).经计算NADPH-d染色染色时间为15 min,明显小于冰冻HE染色时间(30 min).结论 快速冰冻NADPH-d染色法可应用于巨结肠术中快速病理诊断,结果可靠,时间快速,识别度高.
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银杏内酯对大鼠基底前脑神经元生长发育的影响
目的：观察银杏内酯对培养的胚胎大鼠基底前脑胆碱能神经元和NADPH-d阳性神经元生长发育的作用。方法：取E17Wistar大鼠胚胎基底前脑进行体外细胞培养，并给予银杏内酯。进行乙酰胆碱酯酶(acetyl cholinesterase, AChE)和NADPH-d酶组织化学染色，并在光镜下进行阳性细胞计数和显微测量胞体及突起发育状况。结果：给予银杏内酯处理后，培养物中乙酰胆碱酯酶阳性神经元和NADPH-d阳性神经元数量均较对照组显著增加，且神经元发育状况好于对照组，胞体大，突起多且长。结论：银杏内酯可以促进体外培养的基底前脑神经元中乙酰胆碱酯酶和NADPH-d的表达，并能促进表达这两种酶的神经元生长发育。
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大鼠胃伤害性刺激后胃壁一氧化氮合酶的变化
目的:探索胃在受到外源性酸、碱伤害性刺激后,胃壁内一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的数量和染色强度的变化.方法:分别用0.6%乙酸和0.2%NaOH造成大鼠胃伤害性刺激,按不同时程,以还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组化法对胃壁NOS阳性神经元的数量和染色强度的变化进行了观察.结果:胃壁皮区的粘膜下层中都没有观察到NADPH-d阳性神经元,胃壁腺区(特别是泌酸区)粘膜下层中都观察到阳性神经元.两实验组泌酸区此层内的阳性神经元数约是对照组的1.4倍,P＜0.05,灌酸组此层内强染色阳性神经元与弱染色阳性神经元的比例由对照组的1:1.5变为1:2.5;灌碱组泌酸区此层内的阳性神经元数强弱比约为1.5:1.结论:胃的外源性酸、碱刺激影响胃粘膜下层中氮能神经元的表达.
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微量海人酸注入大鼠延髓网状背侧亚核诱导的Fos表达及其与NADPH-d的共存
目的:研究大鼠网状背侧亚核的功能传出通路及该通路上NADPH-d的分布.方法:将微量海人酸注入大鼠延髓网状背侧亚核,2 h后灌注,脑片进行NADPH-d组织化学和Fos免疫组化染色.结果:Fos阳性细胞主要分布于中缝背核(DR)、中缝大核(NRM)、蓝斑(LC)、中脑导水管周围灰质腹外侧(vlPAG)和下丘脑室旁核.Fos/NADPH-d双标细胞主要分布于巨细胞网状核、下丘脑室旁核和中缝大核.结论:大鼠延髓网状背侧亚核与脊髓上中枢存在广泛的功能联系,而且在延髓网状背侧亚核的功能传出通路上有一氧化氮合酶的分布.
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BDNF,NT-3对体外培养的胚鼠脊髓AChE和NADPH-d阳性神经元生长发育的影响
利用AChE和NADPH-d酶组织化学染色法研究了脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)对离体培养的胚胎大鼠脊髓胆碱能神经元和一氧化氮能神经元生长发育的影响.结果显示:BDNF处理组和NT-3处理组AChE阳性神经元数和NADPH-d阳性神经元数均显著高于对照组(P＜0.05).BDNF组AChE阳性神经元和NADPH-d阳性神经元胞体平均直径、每细胞突起数和长突起长度均显著高于对照组(P＜0.05).NT-3组NADPH-d阳性神经元的生长发育与对照组无明显差异,仅AChE阳性神经元的每细胞突起数和长突起长度显著高于对照组(P＜0.05),对胞体发育无影响.结果提示:BDNF,NT-3促进脊髓神经元的存活和生长发育,二者的作用具有选择性和特异性.
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nNOS介导小鼠局灶性脑梗死后氧化DNA损伤的机制研究
目的 探讨还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)阳性神经元表达与脑梗死后DNA损伤修复过程的相关性.方法 制作小鼠前脑缺血-再灌注模型(FbIR), 夹闭双侧颈总动脉90 min后恢复血流, 再灌注15 min后处死动物制作脑组织冰冻切片.A组(n=10):FbIR90/15 min;B组(n=4):FbIR90/15 min+3BR7NI;C组(n=10):假手术对照组;D组(n=4):采用组织化学染色法观察NADPH-d阳性神经以元的分布.A、B两组分别用大肠杆菌核苷酸外切酶Ⅲ敏感位点法(escherichia coli exonuclease Ⅲ sensitive sites,EXOSS) 检测AP位点和3′-PO4末端型两种氧化DNA损伤.用EXOSS检测AP位点和3′-PO4末端型 两种氧化DNA损伤;采用组织化学染色法观察NADPH-d 阳性神经元的分布.结果 EXOSS法可检测到大脑不同部位的氧化DNA损伤,主要集中在大脑皮质区、下丘脑弓形核区、纹状体和海马区;特异性NOS抑制剂3BR7NI明显减弱全脑的EXOSS信号强度(P<0.000 1),差异有显著性, 其作用主要表现在大脑皮质区,而对下丘脑的弓型核等区作用较弱; NADPH-d 阳性神经元主要分布在大脑皮层、纹状体、丘脑和齿状核,下丘脑的弓型核区仅见少量染色,EXOSS / NADPH-d的表达对比显示, 在大脑皮质区EXOSS信号主要在NADPH-d阳性神经元中.结论 脑梗死后大脑不同区域氧化DNA损伤的机制不一, 3BR7NI仅消除大脑皮层区的EXOSS 染色, 而对下丘脑弓形核区的作用不大, 本研究从形态学证实了大脑皮层区nNOS可能参与了脑梗死后氧化DNA损伤修复过程,而下丘脑的弓型核区的这一过程可能有其他机制参与.
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钉螺一氧化氮合酶分布的酶组织化学研究
目的定位研究一氧化氮合酶(NOS)在日本血吸虫中间宿主-钉螺体内分布及活性.方法用还原型尼可酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸硫辛酰胺脱氢酶(NADPH-d)酶组织化学技术,对钉螺软体的整体连续切片作系统观察.结果头足部肌纤维间含丰富NOS阳性神经元;中枢神经节纤维区、心脏壁、雌雄生殖细胞、咽管等呈NOS强阳性;腮管壁呈NOS阳性.结论 NO作为重要生物信使,直接参与钉螺神经肌肉运动、生殖和心血管调节等多种生命活动.
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胼胝体及前连合一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的生后发育
目的研究大鼠胼胝体及前连合内NOS阳性神经元的生后发育规律.方法本实验用还原型辅酶Ⅱ黄递酶(NADPH-d)免疫组织化学方法.结果大鼠生后第1天胼胝体内已有少量NOS阳性神经元,在生后7天时数量明显增多,至第2周末减少至接近成年时水平,仅少量NOS阳性神经元散在于胼胝体内.前连合内的NOS阳性神经元也有类似的发育规律.结论在大鼠生后早期发育过程中,胼胝体及前连合内NOS阳性神经元有一过性增多,继之降至成年时水平的发育规律.文中还对一过性增多的NOS阳性神经元的作用进行了探讨.
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大鼠回肠肌间神经丛一氧化氮合酶阳性神经元缺血后的变化
目的:观察大白鼠回肠肌间神经丛一氧化氮合酶阳性神经元缺血后的变化.方法:阻断大白鼠肠系膜上动脉,用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶反应(NADPH-d)法,观察大鼠回肠肌间神经丛一氧化氮合酶阳性神经元的变化及神经损伤.结果:肠缺血30min,大鼠回肠肌间神经丛内一氧化氮合酶阳性神经元数目无明显变化,但染色深度加强;缺血1小时及2小时,一氧化氮合酶阳性神经元胞体明显增多而且染色加深.结论:一氧化氮(No)在肠缺血所致的神经损伤中起着重要作用.
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高碘对小鼠额皮质及海马组织NOS阳性神经元的影响
目的 观察高碘对小鼠额皮质及海马NOS阳性神经元的影响.方法 昆明种小鼠(雌雄各半12只)分为适碘与高碘组,分别喂以碘浓度为50μg/L,5 000μg/L的蒸馏水6个月,作Morris水迷宫行为学测试后以还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组化法显示小鼠额皮质及海马组织NOS阳性神经元.结果 与适碘组相比,高碘组小鼠脑额皮质、海马NOS阳性神经元密度显著降低,且染色变浅;行为学测试中小鼠逃避潜伏期显著延长.结论 额皮质及海马NOS阳性神经元减少可能是高碘时中枢神经系统功能损伤的病理基础.
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成年大鼠基底前脑存在一个Nestin免疫阳性神经元簇
目的观察Nestin免疫活性在成年大鼠基底前脑中的表达和分布，并探讨其与胆碱能神经元之间的关系。方法采用免疫组化方法对成年大鼠基底前脑的切片进行nestin免疫组化染色及其与ChAT，NADPH-d双标染色。结果在成年大鼠基底前脑的隔斜角带复合体有一个连续的nestin免疫阳性细胞带，胞体较大，梭形或多极形，有2～4个突起。双标染色显示，Nestin 阳性神经元与ChAT，NADPH-d阳性神经元间杂分布，大多数不呈交叉反应，只有少数，约10％呈双标染色。结论成年大鼠基底前脑存在一个有别于胆碱能神经元的nestin免疫阳性神经元簇，其化学属性和生物学意义有待进一步研究。
关键词： 巢蛋白(Nestin) ChAT NADPH-d 基底前脑 大鼠 -
条件性损伤的时间与频次对神经根撕脱伤后脊髓前角运动神经元死亡及NOS表达的影响
目的探索条件性损伤(CL)的时间和频次对神经根撕脱(TL)后脊髓前角运动神经元一氧化氮合酶(NOS)表达及细胞死亡的影响.方法成年SD雌性大鼠116只,体重200～300g,以钳夹神经干为CL,分为两个系列.时间系列:在CL后1d、3d、1w、2w后进行TL,频次系列分别在1w和2w内行1次、2次、6次钳夹,术后不同时间点处死动物,以单纯撕脱臂丛为对照,取C5～C8节段脊髓,行NADPH-d组化染色,中性红复染.定量观察前角运动神经元NOS表达及神经元数目.结果单纯撕脱组术后第5d脊髓前角运动神经元开始表达NOS,术后3w NOS阳性神经元数达到高峰,随后逐渐下降并伴有神经元丢失.时间系列:撕脱后3d和2w,CL与TL间隔1d组的NOS表达和神经元数目与对照组无显著性差异,但3d、1w、2 w组的NOS细胞数及神经元的丢失均较对照组明显(P<0.05 P<0.01),但在撕脱后4w各CL时间的NOS表达和神经元存活均较对照组减少(P<0.05).频次系列:在1w和2w内增加CL次数可使NOS的表达水平和神经细胞的死亡数目有显著增加,在撕脱后2w和4w等较后的时间点更为明显;但在一定时间内2次与6次钳夹之间则无显著性差异.结论条件性损伤与二次损伤之间的间隔影响撕脱后神经元NOS表达和神经元的死亡,以间隔时间1周效应大;一定时间内条件性损伤的频次也可影响撕脱后神经元NOS的表达及神经元的死亡,在两次条件性损伤后上述效应可达大值.
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热应激后小鼠皮层NADPH-d阳性神经元计数的时程变化
目的:探讨急性热应激小鼠皮层NADPH-黄递酶(NADPH-d)阳性神经元计数的时程变化.方法:复制小鼠急性热应激模型,用穿梭实验法,观察小鼠热应激后6、12、24 h不同时间点学习记忆功能.采用NADPH-d组化染色法,观察小鼠热应激后6、12 h、24 h不同时间点皮层NADPH-d阳性神经元计数的时程变化.结果:(1)穿梭实验结果表明:与对照组相比,热应激组在6、12h时错误次数(M)明显增高,潜伏期(EL)明显缩短(P＜0.05).(2)NADPH-黄递酶组织化学染色结果显示:与对照组相比,热应激组在6h,NADPH-d阳性神经元的数目明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).热应激组在12 h NADPH-d阳性神经元的数目明显减少.结论:急性热应激可以对小鼠的学习记忆造成明显的损伤,而这种损伤的机制可能与NADPH-d阳性神经元表达的增加有关.
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精神分裂症模型小鼠脑内c-FOS/NADPH-d的表达
目的:检测精神分裂症模型小鼠脑内c-Fos与尼克酰胺腺啶呤二核苷酸磷酸黄递酶(NADPH-diaphorase,NADPH-d)的共存,探讨一氧化氮(nitricoxide,NO)与精神分裂症的关系,为深入研究精神分裂症的发病机制提供形态学和神经化学依据.方法:雄性昆明小鼠,随机分为生理盐水组和苯环己哌啶(phencyclidine,PCP)组,分别用自主活动观察、Sams-Dodd的刻板行为评分标准对模型小鼠的行为改变进行检测,同时用NADPH-d组织化学和c-Fos免疫组织化学双染法检测各组小鼠脑内c-Fos/NADPH-d阳性神经元的分布.结果:(1)PCP组小鼠出现明显的自发活动的增加(P＜0.01)及显著的刻板行为(P＜0.01)；(2)PCP组小鼠脑内c-Fos与NADPH-d阳性神经元单纯表达的数量明显高于对照组,并且在伏隔核、屏状核及被盖背外侧核出现较多c-Fos/NADPH-d双标阳性神经元,生理盐水组小鼠脑内未见c-Fos/NADPH-d双标阳性神经元.结论:NO可能在谷氨酸NMDA受体功能异常引起的精神分裂症的病理过程发挥一定作用.
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nNOS阳性神经元支配雄性大鼠球海绵体肌和坐骨海绵体肌
为了证实一氧化氮是否参与调节球海绵体肌和坐骨海绵体肌的功能,本研究用CB-HRP逆行追踪结合nNOS免疫细胞化学的技术,对支配雄性大鼠球海绵体肌和坐骨海绵体肌的神经元进行了研究,并结合NADPH-d组化技术对雄性大鼠腰、骶髓的NADPH-d阳性细胞和突起的分布进行了观察.结果发现:(1)支配球海绵体肌和坐骨海绵体肌的Onuf核内存在着CB-HRP与nNOS双重反应细胞、CB-HRP阳性细胞、nNOS阳性细胞nNOS阳性细胞还可见于后连合核、骶副交感核、背角等部位.(2)NADPH-d阳性神经元在腰、骶髓主要位于中央管周围、后连合核、骶副交感核、背角等部位.本研究为NO作为神经活性物质参与球海绵体肌和坐骨海绵体肌功能的调节提供了形态学证据.
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应激性防御反应过程中脑内一氧化氮合酶
本实验采用NADPH-d方法研究发现:在应激的早期(1～6d),一氧化氮合酶阳性神经元在大脑皮质、基底前脑、纹状体、间脑和脑干内出现的部位增多,一氧化氮合酶阳性神经元的数量也增多;而在应激的晚期(9d以后),一氧化氮合酶阳性神经元出现的部位及数量明显减少.提示在慢性应激的早期一氧化氮合酶活性增高,合成一氧化氮的能力增强;而在应激的晚期一氧化氮合酶活性降低,合成一氧化氮的能力降低.
