首页 > 文献资料
-
雌激素对β淀粉样蛋白(25～35)诱导大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响
目的 研究雌激素抑制β淀粉样蛋白(Aβ)诱导大鼠神经细胞凋亡的作用机制.方法 通过乳酸脱氢酶(LDH)释放率的测定及膜联蛋白V/碘化丙啶双染色流式细胞术观察17β-雌二醇(17β-E2)对Aβ(25～35)诱导的大脑皮质神经元细胞死亡及凋亡的影响,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Bcl-2在转录水平的表达.结果 Aβ(25～35)可以诱导大鼠皮质神经元细胞凋亡,下调抗凋亡分子Bcl-2的表达.17β-E2预处理48 h显著抑制Aβ(25～35)诱导的大鼠皮质神经元细胞凋亡,并且显著抑制Aβ(25～35)下调Bcl-2表达的作用.结论 Aβ可以通过下调抗凋亡分子Bcl-2的表达诱导原代培养的大鼠皮质神经元细胞凋亡,雌激素可以通过上调抗凋亡分子Bcl-2的表达来抑制Aβ诱导的大鼠皮质神经元细胞凋亡.
-
H2O2对大鼠神经细胞的氧化损伤及硒的保护作用
目的研究过氧化氢(H2O2)对体外培养的分化期大鼠胚胎神经细胞的氧化损伤以及硒的保护作用.方法 MTT法检测细胞存活率,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化岐化酶(SOD)活性,扫描电镜观察细胞膜完整性.结果 H2O2抑制分化期神经细胞分裂增殖,经过氧化氢作用24 h的神经细胞,其胞液中SOD活力下降,MDA含量升高,并表现为浓度-效应关系;扫描电镜观察可见细胞膜损伤.细胞培养液中加入一定浓度硒可有效地减轻H2O2引起的神经细胞损伤.结论硒对H2O2引起的神经细胞氧化损伤可能有明显的保护作用.
-
神经丝的完整性对线状溶酶体形状与分布的影响
目的观察神经丝的完整性是否对线状溶酶体的形状与分布有影响. 方法采用SABC单克隆抗体免疫组织化学法、免疫电镜及酶组织化学、电镜酶组织化学技术观察钒酸盐处理后培养的神经元内神经丝蛋白NF-H及线状溶酶体的改变. 结果当神经丝的完整性被破坏时,神经丝蛋白向核周聚集,并伴随线状溶酶体亦向核周聚集并形状改变. 结论钒酸盐通过多途径作用,使神经丝过度磷酸化,失去装配能力,当神经丝结构被破坏时,线状溶酶体的形状及分布都发生变化.线状溶酶体的形状与分布对神经丝的完整性有依赖作用.
-
化学合成siRNA抑制原代皮层神经元NgR的表达
目的 筛选能有效抑制神经元NgR表达的siRNA序列.方法 根据siRNA靶序列设计原则,设计并化学合成针对大鼠NgR基因编码区的siRNA三对,并以一对无关序列的寡核苷酸作为阴性对照.原代培养的大鼠皮层神经元分为5组:siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组、无关序列组、非转染组,用阳离子脂质体TransMessenger Transfection Reagent转染.转染后48h行RT-PCR和免疫细胞化学检测NgR表达水平的变化.结果 转染48h后,与序列2、3和无关序列转染以及未转染的细胞相比,序列1转染的神经元NgR mRNA水平明显下降,并且其NgR抗体免疫荧光染色的荧光强度也明显减弱.结论 化学合成siRNA能有效地抑制原代皮层神经元NgR的表达.
-
全细胞膜片钳技术在视网膜神经元电压门控离子通道研究中的应用
了解视网膜各种神经元神经电信号特点、产生机制及影响因素，对从功能角度评价视网膜神经细胞培养状态和移植效果具有重要意义。本文介绍一种先进的电生理学研究方法——全细胞膜片钳法在视网膜神经生理学中的应用，以及通过该方法对视网膜神经节细胞、双极细胞、水平细胞和无长突细胞部分电压门控离子通道进行研究所取得的进展。
-
丁基苯酞对低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用
为进一步探讨丁基苯肽对神经的保护作用,用原代培养大鼠皮层神经细胞的方法,以LDH和细胞形态等指标,观察了l-丁基苯酞(l-NBP)和d-丁基苯酞(d-NBP)对低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用.结果表明:l-NBP和d-NBP能剂量依赖性地抑制低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞内LDH的释放,降低细胞死亡率,并能改善受损细胞的形态; 此外还能明显减轻低糖低氧诱导的神经细胞内粗面内质网脱颗粒及多聚核糖体解聚. 提示:NBP对低糖低氧诱导的大鼠皮层神经细胞损伤有明显保护作用.
-
三七总皂苷对原代培养大鼠皮层神经细胞的保护作用
目的：研究三七总皂苷(PNS)对神经细胞的保护作用。方法：采用原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞，观察谷氨酸(500 μmolL-1，8 min)，缺氧5 h再给氧不同时间(0，3，24 h)对细胞的影响以及PNS的作用。结果：PNS 25，50 mgL-1明显减少缺氧/再给氧损伤时细胞内酶的释放，减轻细胞形态学的改变，提高细胞的存活率。对谷氨酸介导的兴奋性毒性，PNS也有一定的拮抗作用。结论：PNS的脑保护作用机制可能与其抗兴奋性毒性和缺氧性损伤的作用有关。
-
鼠胚脑皮质及海马神经元原代培养方法的改进
神经细胞原代培养是研究神经细胞的重要手段之一[1,2].传统方法是将神经细胞与神经胶质细胞混合培养,因此无法满足在单一神经细胞培养基础上进行研究的需要.1998年10月至1999年9月,我们对传统混合培养方法在取材、消化、温度、机械操作等方面进行控制和改进,得到了比较满意的相对单一的神经细胞培养物和单神经细胞网络,为进一步开展神经生物学研究提供了相对稳定的体外模型.
-
鸡胚在生物医学研究中的应用
背景:近年来应用鸡胚培养组织细胞研究广泛,但应用鸡胚培养神经细胞尚无文献报道.目的:综述了应用鸡胚进行组织细胞培养的研究进展,以便找到一种方便价廉的神经细胞培养手段.方法:应用计算机检索CNKI 和PubMed 数据库中1998-01/2011-06 关于鸡胚培养模型及神经细胞培养的文章,以"鸡胚绒毛尿囊膜模型;神经细胞培养"或"chicken embryo chorioallantoic membrane model; neuronal culture"为检索词进行检索.选择文章内容与鸡胚培养模型相关,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章.初检得到205 篇文献,根据纳入标准选择34 篇文章进行综述.结果与结论:鸡胚在病毒的分离、培养、疫苗制备,肿瘤生物学机制和药物筛选等方面均有广泛应用.与其他培养方法相比具有价廉,方便,快速等优点.充分正确的利用该培养体系可为多领域的研究提供科学可行的方法和思路.
-
胰岛素样生长因子 1在神经特异性再生中的作用机制
目的 研究胰岛素样生长因子 1( IGF 1) 对神经元 p75受体表达的影响,探讨 IGF 1在神经特异性再生中的作用机制.方法在体外培养神经元培养基中加入不同浓度的重组 IGF 1, 用粘附式细胞仪检测神经元表面神经生长因子 p75受体的表达.结果 IGF 1作用后神经元 p75受体的表达增加,细胞表面 p75受体的增加与 IGF 1的浓度在一定范围内呈现量效关系.结论 IGF 1 在体外培养条件下可增加神经细胞表面 p75受体的表达,IGF 1的神经营养作用机制可能与 p75受体表达上调有关 .
-
抗疲劳1号对培养大鼠皮质神经细胞的抗损伤作用
目的:探讨抗疲劳1号(AF-1)对培养大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用及机制.方法:应用谷氨酸诱导培养大鼠皮层神经细胞损伤的模型.通过测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、DNA断裂率、超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化物(LPO),观察AF-1药物的保护作用.结果:高浓度的谷氨酸可增加培养神经细胞的LDH释放率和DNA断裂率,并诱导自由基产生.AF-1明显降低谷氨酸的神经细胞毒性,使LDH释放率及DNA断裂率明显降低,LPO含量明显下降,SOD含量明显升高.结论:AF-1对大鼠皮层神经细胞损伤具有明显的保护作用.
-
神经生长因子在糖尿病神经病变中的作用
自1952年神经生长因子(nerve growth factor,NGF)被发现,随神经细胞培养及DNA重组技术的建立,发现了众多神经营养因子(neurotrophie factors,NTFS),它们对健康及受损神经元的存活、再生有重要意义.神经系统中某些NTFS的代谢改变或缺乏构成……
-
神经细胞培养方法在缺血性脑损伤研究中的应用
神经组织的体外培养是1907年由Harrison首创[1],很多学者相继在培养技术、培养容器、培养液几方面作出改进:1956年Nakai创造了神经组织的分离细胞培养[2],1957年Dulbecco采用胰蛋白酶消化并用液体培养基方法获得了单层培养细胞;神经组织的分离细胞培养和单层培养法的出现,对神经细胞培养的发展起了很大的推动作用,已成为人们进行神经领域研究所普遍采用的技术.
-
一氧化氮和氧自由基对培养大鼠皮层神经细胞的损伤
目的:探讨一氧化氮(NO)和氧自由基(O2-)对培养大鼠皮层神经细胞的损伤作用及两种损伤因素间的关系.方法:应用原代大鼠皮层神经细胞培养方法,研究外源性损伤因素的作用.结果:①以硝普钠(SNP)为NO供体的损伤组较对照组的乳酸脱氢酶(LDH)释放量显著增高,而细胞存活率显著降低,加入SOD后SNP的损伤作用减轻.②O2-损伤组的结果与NO损伤组结果相似,同时应用O2-和NO组对神经细胞的损伤作用显著高于单独应用O2-组或NO组.结论:NO和O2-都能造成培养的大鼠皮层神经细胞损伤,并且二者之间存在协同作用.
-
神经毒力体外评价方法的建立及减毒活疫苗的体外评价
目的 通过构建原代大鼠神经细胞混合培养模型,体外评价减毒活疫苗的神经毒力作用.方法 取1～3日龄SD大鼠大脑组织,无菌分离获得神经细胞,于DMEM/F12培养基5％ CO2培养箱培养7～9d至混合培养体系稳定.Anti-MAP2、Anti-GFAP抗体免疫细胞技术鉴定神经元、星形胶质细胞.细胞分组:空白对照组,高、中、低剂量非疫苗对照组(β-淀粉酶和长春新碱)、麻疹减毒活疫苗组、腮腺炎减毒活疫苗组、吸附无细胞百白破灭活脊髓灰质炎和b型流感嗜血杆菌(结合)联合疫苗(简称联合疫苗)组.CCK8增殖毒性试验检测细胞活力;免疫荧光标记GFAP、MAP2观察神经细胞形态学变化;ELISA法检测细胞培养上清中促炎性细胞因子TNFoα、IL-1β、IL-6浓度.结果 原代神经细胞混合培养体系由约50％ GFAP(+)星形胶质细胞和约50％ MAP-2(+)神经元组成.联合疫苗、长春新碱给药各时间点存在剂量效应关系,麻疹疫苗、腮腺炎疫苗未见细胞毒性.联合疫苗、长春新碱各剂量组神经细胞存活率降低,神经细胞胞体变形,核浆比增大;麻疹疫苗、腮腺炎疫苗各剂量组神经细胞密度和形态未见异常;β-淀粉酶各剂量组未见细胞毒性和形态学改变.联合疫苗和β-淀粉酶组神经细胞培养上清中IL-1β、TNFα浓度显著升高,麻疹疫苗组IL-6浓度显著升高.结论 构建了原代大鼠神经细胞培养模型,可用于体外评价减毒活疫苗的神经毒力作用.麻疹和腮腺炎减毒活疫苗未见神经细胞毒性作用.联合疫苗、麻疹疫苗和β-淀粉酶作用于神经细胞与潜在的神经炎症反应发生相关.长春新碱可见神经细胞毒性作用,但未见促炎性细胞因子IL-1β、TNFoα、IL-6的显著性改变.
-
硒促进体外培养的大鼠皮层神经细胞生长及机理的研究
目的研究硒对体外神经细胞生长发育的直接影响及可能的作用机理.方法采用体外新生大鼠皮层神经细胞培养法观察微量元素硒对神经细胞形态学及其表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经生长因子(NGF)蛋白的影响.结果中低浓度的硒能增加体外培养的神经细胞长突起长度和细胞平均直径;硒能促进体外培养的神经细胞表达NSE蛋白;体外培养的大鼠皮层神经细胞随着培养时间的延长,NGF的表达减弱,与对照组比较,硒能促进神经细胞NGF的表达.结论硒可能是通过促进、增强NSE、NGF蛋白的表达,进而直接作用于体外培养的神经细胞,促进神经细胞的生长、发育与分化.
关键词： 硒 神经细胞培养 神经元特异性烯醇化酶 神经生长因子 免疫组织化学 -
小鼠胚胎皮层神经细胞连续6周原代培养的神经元数目变化
为了探讨鼠皮层神经细胞连续6周原代培养的神经元数目变化规律,本研究建立了小鼠胚胎皮层神经细胞体外原代培养的模型,连续培养6周,应用NSE染色法进行形态学观察.
-
活体脊髓取材吹出法与传统方法的比较
脊髓的神经细胞培养、免疫蛋白印迹、酶联免疫等实验研究都需要提取动物的活体脊髓组织。脊髓的单细胞膜片钳和薄片膜片钳等电生理学研究方法，对脊髓细胞活性的要求较高，快速提取结构完整的脊髓显得更为重要[1]。但脊髓在椎管和硬脊膜的保护下，难以提取。通过改良杜俊英等[2]所介绍的固定脊髓提取方法，应用于大鼠和小鼠的活体脊髓取材，并将其效果与传统方法进行比较。该方法是利用注射器和微量移液器枪头，将活体脊髓从两端离断的椎管中吹出的提取方法。吹出法与传统方法相比，取材时间显著缩短，脊髓灰质中大部分细胞活性很好。
-
体外培养大鼠神经细胞的一个简便方法
历来认为,神经细胞培养技术难度较高,重复性低,需要耗费较多的材料和资金.以大鼠神经细胞培养为例,一方面,为了提高神经细胞的存活能力,一般用胎鼠取材;另一方面,为了给神经细胞生长提供充足营养,大多采用DMEM/F12混合培养液[1].
-
BDNF,NT-3对体外培养的胚鼠脊髓AChE和NADPH-d阳性神经元生长发育的影响
利用AChE和NADPH-d酶组织化学染色法研究了脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)对离体培养的胚胎大鼠脊髓胆碱能神经元和一氧化氮能神经元生长发育的影响.结果显示:BDNF处理组和NT-3处理组AChE阳性神经元数和NADPH-d阳性神经元数均显著高于对照组(P＜0.05).BDNF组AChE阳性神经元和NADPH-d阳性神经元胞体平均直径、每细胞突起数和长突起长度均显著高于对照组(P＜0.05).NT-3组NADPH-d阳性神经元的生长发育与对照组无明显差异,仅AChE阳性神经元的每细胞突起数和长突起长度显著高于对照组(P＜0.05),对胞体发育无影响.结果提示:BDNF,NT-3促进脊髓神经元的存活和生长发育,二者的作用具有选择性和特异性.
