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月经发生中低氧诱导因子-1A对VEGF的调节
目的 在小鼠月经样模型和人蜕膜化子宫内膜基质细胞模拟月经发生基础上,探索低氧诱导因子-1A(HIF1A)对血管内皮生长因子(VEGF)的表达调控作用,以及月经发生中HIF1A对VEGF mRNA表达的调控机制.方法 建立小鼠月经样模型,用ChIP方法检测HIF1A是否直接调控Vegf mRNA的表达;利用HIF1A抑制剂甲氧雌二醇(2ME)抑制HIF1A的功能,检测小鼠月经样模型中HIF1A、VEGF蛋白的表达量;入子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化并模拟月经发生,检测HIF1A与VEGF mRNA的表达;用siRNA敲降的方法抑制HIF1A,检测VEGF mRNA的表达.结果 小鼠月经样模型在孕酮撤退0h,HIF1A结合的Vegf promoter的相对百分比较低,随后在8h和12h逐渐上升,在12h达到峰值(P＜0.05);2ME抑制HIF1A入核的同时,抑制了VEGF的表达量(P＜0.05);人蜕膜化子宫内膜基质细胞中,孕酮撤退显著上调HIF1A和VEGF mRNA的表达量(P＜0.01);敲降HIF1A后,VEGF mRNA的上调受到明显的抑制(P＜0.01).结论 在月经发生中,孕酮撤退能够激活HIF1A转录因子的功能,HIF1A被激活后,结合于VEGF promoter区并启动VEGFmRNA的表达.
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HIF1A与VEGF在小鼠月经样模型的表达与共定位
目的 在小鼠月经模型基础上,研究低氧诱导因子(HIF1A)与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA的表达与定位,探索HIF1A与VEGF在月经发生中可能的调控机制. 方法 建立小鼠月经样模型,假孕小鼠通过花生油子宫腔注射的方法诱导小鼠子宫内膜发生蜕膜化,切除卵巢致孕酮(P4)撤退以模拟月经的发生.在P4撤退后0、8、12、16、24 h分别收集小鼠子宫;利用免疫组化与Western blot方法检测HIF1A、VEGF的定位与表达量,利用Real-time PCR检测二者mRNA相对表达量;分析HIF1A与VEGF的表达变化趋势与相关性. 结果 P4撤退后,小鼠子宫内膜发生崩解出血,模拟月经发生.免疫组化结果显示,HIF1A蛋白在P4撤退后12、16 h,内膜基质蜕膜细胞核中的表达量逐渐升高;HIF1A表达区域与VEGF表达的区域均集中在子宫内膜蜕膜化区域外周,即崩解组织与基底层交界区域.Western blot蛋白定量结果显示,细胞核中HIF1A蛋白表达量在P4撤退后8、12、16 h显著增高,VEGF在细胞质中的表达量在P4撤退后0、8、12 h较高.HIF1A与VEGF mRNA的表达变化趋势非常相似,即P4撤退后,逐渐升高,在12 h达到峰值,随后逐渐下降. 结论 结果提示月经发生子宫内膜崩解中,HIF1A转录因子功能激活并调节VEGF mRNA的表达.
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益气化瘀解毒方及拆方对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤和HIF1α、E-cad表达的影响
目的:观察益气化瘀解毒方对人肝癌移植瘤及HIF1a、E-cad表达的影响.方法:建立人肝癌移植瘤模型,分为7组,分别以益气化瘀解毒方、黄芪、莪术、重楼、壁虎、顺铂药物干预21 d后,取瘤组织,行免疫组化检测.结果:(1)成瘤体积比较:给药后瘤体积及差值比较,各组与空白组均有显著性差异(P＜0.05);全方组分别与黄芪组、重楼组、壁虎组、空白对照组等比较有显著性差异(P＜0.05).(2)对HIF1a的影响:全方组与黄芪组比较无显著性差异(P＞0.05),与其它组比较有显著性差异(P＜0.05);各组与空白组比较有显著性差异(P＜0.05);莪术组、壁虎组、顺铂组间比较无显著性差异(P＞0.05).(3)对E-cad影响:全方组与黄芪组比较无显著性差异(P＞0.05),莪术、重楼、壁虎组与空白组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:(1)益气化瘀解毒方全方较单味中药具有较强的抑瘤作用,其组方中药如莪术、重楼、壁虎均有一定程度抑瘤作用,莪术抑瘤作用较强;组方内主要单味中药发挥了协同抑瘤效应,使整方呈现出强的抑瘤效应.(2)益气化瘀解毒方能抑制HIF1a表达,促进E-cad表达,可能通过阻断上皮间质转化而发挥抗肝癌转移侵袭作用,组方中药对其作用各有侧重,但作为整方的有机组成从不同环节发挥了协同作用.
关键词： 益气化瘀解毒方 人肝癌HePG2裸鼠移植瘤 HIF1A E-Cad -
益气化瘀解毒方对人肝癌裸鼠HepG2移植瘤MVD、HIF1a、VEGF/KDR表达的影响
目的:观察益气化瘀解毒方对人肝癌裸鼠HepG2移植瘤MVD、HIF1a、VEGF/KDR表达的影响.方法:建立人肝癌移植瘤模型,分为7组,分别以益气化瘀解毒方、黄芪、莪术、重楼、壁虎、顺铂药物干预21 d后,取瘤组织行免疫组化检测.结果:①对MVD的影响:全方组与除顺铂外的其它组比较有统计学意义(P＜0.05);除黄芪、莪术外的其它组与空白组比较有统计学意义(P＜0.05).②对HIF1a的影响:全方组与除黄芪外的其它组比较有统计学意义(P＜0.05);各组与空白组比较有统计学意义(P＜0.05).③对VEGF表达的影响:全方组与除顺铂外的其它组比较均有统计学意义(P＜0.05);莪术组与空白组比较无统计学意义(P＞0.05).④对KDR表达的影响:全方组与其它各组比较均有统计学意义(P＜0.05);黄芪组与空白组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:益气化瘀解毒方能明显抑制人肝癌裸鼠移植瘤MVD、HIF1a、VEGF和KDR的表达而发挥抗血管生成作用;各单味药对其作用各有侧重,但作为整方的有机组成从不同环节发挥了协同作用.
关键词： 益气化瘀解毒方 人肝癌裸鼠HepG2移植瘤 MVD HIF1A VEGF/KDR -
脑红蛋白在氯化钴诱导人肺癌A549细胞株缺氧损伤模型中的表达研究
目的 研究脑红蛋白(NGB)在氯化钴诱导人肺癌A549细胞株缺氧损伤模型中的表达.方法 采用不同浓度CoCl2(0、50、100、200、300、400、500 μmol/L)作用A549细胞,24h后检测细胞活性,以GAPDH为内参基因,通过实时荧光定量RT-PCR检测缺氧损伤肺癌细胞A549中NGB、HIFlamRNA表达变化.结果 CoCl2半抑制浓度(IC50)为160 μmol/L,随着CoCl2浓度的增加,HIF1a、NGBmRNA表达量逐步增加;CoCl2作用的A549细胞株随着时间延长,NGB mRNA表达量升高,在36h达峰值.结论 NGB升高与缺氧程度行依赖性,可能参与肺癌缺氧调节作用.
