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子宫内膜三维模型上小鼠囊胚着床的扫描电镜观察
目的观察胚胎与体外子宫内膜三维模型共培养时,子宫内膜上皮细胞与胚胎的超微结构变化. 方法将妊娠第4天的小鼠囊胚在已建立的体外子宫内膜三维模型上进行培养,扫描电镜(SEM)观察胚胎着床时子宫内膜上皮细胞及胚胎的超微结构. 结果小鼠囊胚能正常脱透明带、粘附和扩展.电镜扫描显示体外培养的子宫内膜可形成胞饮突,但数量比体内子宫内膜少,胚胎粘附于胞饮突上. 结论体外子宫内膜三维模型可形成胞饮突,且胞饮突可能直接参与了囊胚与子宫内膜的粘附.
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体外肝细胞模型在毒理学中的应用
尽管整体动物在毒性评价时,是不可缺少的,但由于动物种类之间存在着种族差异,即动物与人之间存在着差异,使一些研究结果难以准确地推导到人.除此外,从伦理学和减低毒性研究的成本角度出发,也应尽量减少动物的使用.近些年来,越来越重视体外实验方法及其对体内过程的推导.目前,肝细胞体外模型的使用非常广泛,特别是离体肝细胞模型更为突出,从外源性化合物的毒性筛选、危险性评价到肝损伤机制的研究都广泛地应用到离体肝细胞模型.肝脏含有多种类型细胞,如肝细胞、孔状内皮细胞、枯否氏细胞、卫星贮备细胞及脂细胞.这些肝细胞占肝脏内细胞总数量的92.5%,占肝脏重量的80%.无论是人还是动物的肝脏细胞均可培养;根据肝细胞是否传代培养而分为原代肝细胞和传代肝细胞株.
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皮肤刺激体外模型在化妆品安全性评价中的应用
刺激性物质作用机体后会引起机体发生一系列的生理、生化改变,其中主要的是产生刺激反应.刺激反应可导致水肿、红斑等客观表现和瘙痒、疼痛等主观感觉[1].如果机体受到刺激物单次、重复或持续作用则会导致刺激性接触性皮炎,刺激性接触性皮炎是皮肤对直接损伤产生炎症反应的结果.引起刺激性反应的物质大多数为化学物质,而化妆品是日常生活中接触多的化学物质之一.
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多指标正交试验优选体外模拟草酸钙结石模型佳条件
目的：选取晶体生长速率和（COM和聚集体量）/总晶体量比例为评价指标，优化体外模拟草酸钙结石模型条件。方法：采用琼脂凝胶双向扩散法，选取琼脂凝胶浓度、培养温度、培养时间、氯化钙和草酸钠配比4个因素进行正交试验，通过光学显微镜定时观察对草酸钙晶体晶型的生成，优选出佳体外草酸钙结晶形成的条件。结果：随着培养时间的延长，不同浓度琼脂凝胶均呈现一定比例的一水草酸钙（COM）、二水草酸钙（COD）、三水草酸钙（COT）及聚集体，其中以1%琼脂浓度下的聚集速率快且易形成COM；培养温度在37℃时利于COM的成核、生长以及聚集；0.1/0.2 mol·L-1氯化钙/草酸钠，在37℃下培养3天，生成的COM及聚集体比例大，达总晶体量90%以上。结论：pH7.4、1%琼脂及0.1/0.2 mol·L-1氯化钙/草酸钠的琼脂凝胶研究系统在37℃下培养3天，为复制以COM为主的体外草酸钙结石模型佳条件。
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不同转移能力的肺癌细胞系的形态结构与黏附分子表达的比较
肿瘤多细胞球体(multicellular tumor spheroid MTS)是应用组织培养方法使肿瘤细胞生长形成实体细胞团,被称为"肿瘤的体外模型".细胞黏附分子(cell adhesion molecules,CAMs)是一类细胞膜受体分子(糖蛋白),它们在细胞生长、免疫反应及肿瘤转移等方面发挥重要的作用[1].近年来,随着对肿瘤转移过程研究的深入,细胞黏附分子与癌转移的关系逐渐受到关注,本实验拟在将MTS用于黏附分子表达的研究以及CD44V6和CD29与肺癌转移关系方面进行探讨,从而为肺癌侵袭转移的研究及其临床治疗提供依据.
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牛主动脉平滑肌细胞体外钙型的制备
目的 利用β-甘油磷酸盐处理牛主动脉平滑肌细胞(BASMC)制备体外血管钙化模型.方法 移植块法原代培养牛主动脉中膜平滑肌细胞,8代内的传代细胞添加10 mmol/L β-甘油磷酸盐培养10 d,Von Kossa染色、茜素红S 染色和电镜检查鉴定钙化,同时测量细胞层钙沉积、碱性磷酸酶活性及培养上清的骨钙素含量.结果 10 d后细胞层出现大量钙盐沉积,并且β-甘油磷酸盐时间依赖性增加钙沉积,碱性磷酸酶活性及骨钙素含量各时间点均较正常培养细胞显著增加(P＜0.01).结论 甘油磷酸盐能在短期内诱导出BASMC广泛钙化,用此方法制备的BASMC是一种良好的研究血管钙化的体外模型.
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表皮葡萄球菌生物被膜结构观察
随着生物材料被广泛应用于临床,表皮葡萄球菌已经成为医院感染的主要条件致病菌.生物材料表面细菌生物被膜(biofilm,BF)的形成是导致感染反复发作及久治不愈的根本原因,且常常引发灾难性的后果[1].本研究通过建立医用生物材料聚氯乙烯(polyvinyl chloride,PCV)表面表皮葡萄球菌BF体外模型,观察PVC材料表面细菌BF的结构,为生物材料植入感染研究提供实验模型和方法.
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声辐射力脉冲弹性成像在估测静脉血栓形成时间的研究
目的 本实验旨在通过声辐射力脉冲(acoustic radiation force impulse,ARFI)弹性技术在分析体外血栓模型形成时间中的应用价值.方法 利用人体大隐静脉作为血栓载体,分别向9段大隐静脉内注人健康人血,然后迅速结扎两端放人祸合剂箱内,同时使9根血栓模型处于近似高度,并依次Ⅰ～Ⅳ进行编号.利用ARM技术分别于1、3、6、9d的血栓模型进行弹性成像数据分析,并以病理检查结果进行验证.结果 使用ARM技术见血栓尚未形成时(1d)剪切波速度测量无反应;血栓形成至3、6、9d时,血栓内剪切波速度(SWV)逐渐增加,从3d的(0.76±0.12)m/s,增加至6d的(1.34±0.25)m/s及9d的(1.91±0.31)m/s;不同血栓形成时间血栓内SW V测值均存在统计学上的显著性差异(P<0.01).结论 ARM技术测定人体大隐静脉血栓模型的血栓SWV,对于预测血栓形成时间有一定的参考价值,它可能为今后弹性成像运用在人体静脉血栓中提供参考.
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胃癌细胞系幽门螺杆菌感染对金属蛋白酶表达的影响
目的:建立胃癌细胞系H.pylori感染动物转移体外模型,初步探讨H.pylori感染在胃癌转移过程中的可能作用及其机制.方法:将H.pylori活菌与胃癌细胞系BGC-823低转移细胞株C8细胞共培养后,行裸鼠接种,观察H.pylori感染组与未感染组移植瘤生长情况及裸鼠肝、肺转移情况,免疫组化检测两组移植瘤中MMP-2,MMP-3,TIMP-2及TIMP-3蛋白的表达.结果:H.pylori感染组移植瘤重量与未感染组比较有差异(P＜0.05),病理检查示感染组2个肺转移,而未感染组无转移.免疫组化结果示感染组MMP-2,MMP-3,TIMP-2,TIMP-3蛋白的表达阳性率分别为:77.8±9.6%,64.5±6.9%,57.6±12.2%,40.0±9.2%;而未感染组分别为61.2±9.7%,53.1±5.8%,54.3±10.9%,53.0±6.6%,二者比较除TIMP-3蛋白的表达无显著性差异外,MMP-2、MMP-3、TIMP-2蛋白的表达均有显著性差异(P＜0.05).结论:H.pylori感染能促使裸鼠移植瘤的生长及肺转移,建立了H.pylori感染与胃癌的动物转移体外模型;H.pylori感染可能通过促使转移正相关因子MMP-2、MMP-3表达增高,转移负相关因子TIMP-2蛋白表达降低,而在胃癌转移过程中发挥重要作用.
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槟榔碱对脂质过氧化内皮细胞炎性因子表达的影响
动脉粥样硬化(AS)是严重危害人类健康的常见多发病,血管内皮细胞活化是AS发生发展的始动环节.体外条件下,ox-LDL作用于内皮细胞,可导致单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)和细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达异常增高,类似于AS的早期病理学变化.本实验观察了槟榔碱对ox-LDL致培养的内皮细胞损伤的保护作用,并为建立适于大量筛选具有内皮活性的抗AS化合物的体外模型提供实验依据.
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RANKL,M-CSF和破骨细胞体外培养
骨是一不断更新的组织,骨重建贯穿生命过程的始终.骨重建包括骨吸收和随后进行的骨形成.骨形成和骨吸收的动态平衡维持着正常的骨代谢.当骨吸收大于骨形成时,导致骨量减少.骨吸收的主要细胞是多核的破骨细胞(Osteoclast,OC).近年来,随着分子生物学和细胞生物学的发展,人们对骨髓微环境在调节破骨细胞形成和骨吸收方面有了较深入的了解.体内和体外模型的建立,为研究正常和病理情况下的破骨细胞的生物学特性提供了重要信息.在骨髓微环境中,成骨细胞和破骨细胞的细胞间接触,信号传递调控着破骨细胞的分化、活化及其功能活动.这对骨的纵向生长、更新及峰值骨量的保持等具有决定性的作用.
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原位干细胞再生复制胃肠组织器官学术报告
各位来宾、领导、专家、女士们、先生们:今天向大家公布的是一个烧伤以外领域的研究--胃肠道原位干细胞复制组织器官的研究成果.今天所公布的是以体外模型来验证原位于细胞复制技术的机理,目的是为临床医生和基础研究专家们提供一个更好的科研手段.这项学术不同于原来传统的医药技术,而是一项针对人体细胞自身功能而产生作用的.以往的药物治疗学是一种针对各种致病因素而采取的外源性干预技术,而现在我们探索到一个新的领域,就是通过调控和发挥人体细胞自身的潜能,实现人体组织器官的自我更新、复制,从而终达到健康长寿的目的.当然治疗疾病也是其目的之一.今天我把这个过程原本地向各位公布,同时向热衷于这方面的科研专家提供一些素材,大家都有可以根据这个模式重复.科学的东西是不怕重复的.我们中国医学有着几千年的文化发展历史,现在我们应该把中国医学的思想落实到人体的生命基础--细胞上.细胞是人体生命的小单位,细胞的一切变化组成了人的整体变化,细胞的每一个生命环节构成了人的整体生命现象,这个概念影响了中国几千年的文化哲学思想,但是如何把这个思想融汇到科技领域里体现出来,需要我们科学家不断地探索.
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甲状腺癌中钙黏附素复合体的表达及其临床意义
细胞黏附需要钙黏附素复合体的各个组分:上皮型钙黏附素(E-cadherin,E-cd)、α连环素(α-catenin,α-C)、β连环素 (β-catenin, β-C)、γ连环素(γ-catenin, γ-C)的形成[1].在体内和体外模型中,均证实E-cd的表达减少与肿瘤的浸润能力相关[2].为此,我们通过检测钙黏附素复合体在甲状腺癌中的表达,以探讨其临床意义.
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三维体外血管新生模型中内皮细胞基因表达变化的芯片分析
目的利用Affymetrix基因芯片分析体外血管新生过程中内皮细胞的基因表达变化.方法将人微血管内皮细胞包被于微载体,进行三维培养,以构建体外血管新生模型,然后在模型不同时间点提取内皮细胞总RNA,采用Affymetrix芯片进行基因表达分析.结果约1500个基因表达上调或下调2倍以上,其表达呈现不同变化方式.结论本研究从全基因组水平动态观察了体外血管新生过程中内皮细胞的基因表达变化,并与特定的血管新生形态学过程相联系.研究结果提供了丰富的血管新生分子信息,为进一步研究特定基因在血管新生中的作用提示了方向.
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3种白色假丝酵母菌生物膜体外模型的比较研究
目的 3种白色假丝酵母菌实验生物膜体外模型,观察生物膜形成的动态过程,比较3种模型研究结果的相关性.方法 白色假丝酵母菌模式株ATCC 90038,分别用96孔板法,载玻片与6孔板法,以及连续培养法形成实验生物膜,荧光倒置显微镜观察生物膜的结构,XTT减低法定量检测生物膜的形成过程,比较3种方法形成的白色假丝酵母菌生物膜.结果 3种方法都可以形成成熟的生物膜结构,定量分析有明显相关性.结论 可以根据试验目的 选择不同的白色假丝酵母菌实验生物膜的体外研究模型.
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子宫内膜细胞体外三维培养
建立着床期子宫内膜体外模型、探讨胚胎的着床机制对提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗的成功率、降低流产率及有效避孕均具有重要意义.目前,国内外的研究多用分泌期子宫内膜经短期体外培养形成子宫内膜的立体模型,但由于所用分泌期内膜细胞已经受体内因素的作用,而且体外培养时间短,不适用于探讨各种因素对子宫内膜窗口期的影响.本研究利用增殖期子宫内膜上皮细胞和问质细胞,经体外培养建立分泌期子宫内膜模型.现将结果报道如下.
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缺血性卒中体外模型建立
缺血性卒中占全部卒中的60%～80%。缺血性卒中体外模型的建立和应用对揭示其发病机制及探索治疗方案具有重要意义。近年来分别从神经元、胶质细胞、内皮细胞、血脑屏障、血管神经单元等角度建立起可靠的研究缺血性卒中的研究平台。本文对各种缺血性卒中的体外模型的制备方案及应用方法的新进展展开综述，为缺血性卒中的研究提供具有针对性的方法选择。
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载脂蛋白E缺乏对视神经脊髓炎体外模型的损伤影响
目的 探索载脂蛋白E(ApoE)缺乏对视神经脊髓炎(NMO)体外模型的损伤影响.方法 将7d龄的野生型及ApoE基因敲除(ApoE-/-)的C57BL/6J小鼠脊髓切片培养7d后,将两种基因型的脊髓片按照随机数字表法随机分为实验组及对照组.实验组加入从NMO患者血清提取出的自身抗体免疫球蛋白G(NMO-IgG)及正常人补体血清;对照组不加NMO-IgG,余处理方式与实验组相同,继续培养24 h.用免疫荧光法检测脊髓片水通道蛋白4(AQP4)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、离子钙接头蛋白(IBA1)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、人神经丝蛋白L(NFL)的表达水平,并根据脊髓片AQP4和GFAP缺失面积比例计算损伤积分.结果 与相应的对照组相比,ApoE基因敲除小鼠造模组(NMO-ApoE-/-组)和野生型小鼠造模组(NMO-WT组)均出现明显的AQP4、GFAP、MBP和NFL缺失(NMO-ApoE-/-组上述各项指标缺失面积百分比分别为83.88％ ±5.01％、82.44％±6.11％、45.02％士5.11％、54.65％ ±7.66％,相应对照组对应指标分别为10.44％±4.07％、5.73％±0.82％、9.12％±1.41％、5.72％ ±0.81％,t=34.143、37.269、20.300、19.051,均P＜0.05;NMO-WT组上述指标缺失面积比例分别为77.74％±6.75％、75.62％±5.76％、37.60％±4.88％、46.29％±4.98％,相应对照组对应指标分别为9.31％±2.97％、5.80％±0.82％、9.10％±1.63％、5.80％±0.81％,t=27.828、35.934、16.613、24.057,均P＜0.05),且NMO-ApoE-/-组染色缺失的程度较NMO-WT组严重(t=2.194、2.436、3.149、2.746,均P＜0.05),两组损伤积分均较各自对照组明显增高,均出现IBA1表达上调(NMO-WT组及对照组:19.88士1.11与11.18±0.65,t=25.270,P＜ 0.05),且NMO-ApoE-/-组的IBA1表达水平较NMO-WT组更高(25.81±1.61与19.88±1.11,t=9.101,P＜0.05).结论 在补体存在的情况下,从NMO患者血清提取出的NMO-IgG可以诱导离体组织产生NMO样损伤.ApoE缺失可能会促进小胶质细胞进一步活化,加重NMO模型的星型胶质细胞损伤程度.
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HIV-1潜伏感染与体外模型的建立
高效抗反转录病毒治疗(HAART)的出现,使得艾滋病病毒(HIV)感染从一种致死性疾病转为慢性感染性疾病,使感染者体内的病毒载量下降至常规方法检测不到的水平.但人们很快发现一旦停止用药,感染者病毒载量很快反弹,这就意味着患者需要终身服用药物.而HAART不能彻底清除HIV-1感染的主要原因是,由于HIV-1在体内潜伏感染,形成病毒储藏库.经过不懈的努力,人们对于HIV-1潜伏的分子机制有了越来越多的认识,并且建立了一系列的体外模型,这些都为攻克HIV潜伏感染,治愈HIV感染奠定了基础.
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人乳头状瘤病毒16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系的建立
人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是目前已知的三大DNA致癌病毒之一,具有嗜上皮寄生的特性,其中16型、18型是高危致癌型.许多学者利用HPV的这一致癌特性,相继建立了人口腔、食管、支气管、子宫颈等上皮的永生化细胞株[1-3],为研究这些部位的肿瘤提供了良好的体外模型.HPV也可能与喉癌的发生密切相关,但一直缺乏直接的证据[4,5].本实验应用含有HPV16 DNA的质粒转染正常人喉上皮细胞,试图建立永生化人喉上皮细胞系并确证HPV与喉癌的发生有无因果关系.
