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胰岛素和睾酮对Ishikawa细胞HOXA10基因表达的影响
目的 观察胰岛素(INS)和睾酮(T)对子宫内膜腺癌细胞HOXA10基因表达的影响. 方法 免疫细胞化学检测HOXA10蛋白在Ishikawa细胞定位表达;体外培养Ishikawa细胞,予不同浓度INS(90、60、30、3、0.3 U/L)或T(10-3、10-4、10-5、10-6、10-7mol/L)刺激Ishikawa细胞48h,MTT法检测INS、T对Ishikawa细胞生长的作用;后分别以30 U/L INS和10-5mol/L T刺激Ishikawa细胞48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法 测定INS和T对Ishikawa细胞HOXA10mRNA表达的影响. 结果 ⑴HOXA10蛋白定位表达于Ishikawa细胞的细胞浆内.⑵不同浓度的INS均可促进Ishikawa细胞的生长,随着浓度的增加作用越强, INS浓度达60、90 U/L时,细胞生长状况与浓度为30 U/L相似.不同浓度的T均可抑制Ishikawa细胞的生长,随浓度增加抑制作用越明显,浓度达10-4、10-3 mol/L时,细胞生长抑制状况与浓度为10-5 mol/L相似.⑶RT-PCR检测结果 显示INS组和T组Ishikawa细胞中HOXA10mRNA表达均较对照组减弱(P<0.01或P<0.05). 结论 不同浓度INS和T均可影响Ishikawa细胞生长,高浓度的INS和T降低细胞上HOXA10mRNA的表达.
关键词： Ishikawa细胞 HOXA10基因 胰岛素 睾酮 -
紫丹饮含药血清对子宫内膜细胞HOXA10基因的影响
目的:观察紫丹饮含药血清对HOXA10基因表达的影响,以探讨紫丹饮是否是通过调节HOXA10基因的表达来影响子宫内膜容受性.方法:人子宫内膜组织来自手术病人,通过原代培养分离子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞,以不同浓度含药血清培养液分别作用于二者,并设立胎牛血清、空白血清及西药阳性药血清为对照,用Reahime-PCR法检测紫丹饮对正常妇女子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞HOXA10基因表达的影响.结果:紫丹饮含药血清可显著促进子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞HOXA10基因的表达.结论:中药紫丹饮可能通过增强子宫内膜HOXA10基因的表达,来改善子宫内膜容受性的作用.
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同源盒基因HoxA10在急性白血病中的表达及相关研究
本研究探讨HoxA10基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义.运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测50例急性白血病患者和10例对照者(7例正常人、3例ITP)中HoxA10mRNA的表达水平;分析其在急性白血病中的表达规律及与临床预后的关系.结果表明:HoxA1o在各型急性髓系白血病中均表达,在急性淋巴细胞白血病和部分对照者中低表达.3例正常人不表达HoxA10.HoxA10 mRNA表达水平在急性髓系白血病明显高于急性淋巴细胞白血病患者和对照组(P＜0.01),在急性髓系白血病中,M1型和M2型表达水平高于M4型和M5型,在M3型有显著高表达.骨髓中原、幼细胞比例和HoxA10mRNA表达水平呈正相关关系(r=0.635,P＜0.01).未缓解组9例患者HoxA10表达水平高于缓解组8例患者,但无显著差异(P=0.258).1例M2患者和1例M5患者缓解后HoxA10不表达.结论:HoxA10在急性髓系白血病中有异常高表达,具有髓系特异性,可作为区别淋系和髓系的标志性基因,但不是肿瘤细胞特有的基因,而是一类调控造血的转录因子,能与多种协同因子共同影响白血病的发生和发展.HoxA10的表达水平与肿瘤细胞负荷有关,与急性白血病的疗效有一定关系.
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HOXA10基因与子宫内膜异位症发病关系的研究进展
子宫内膜异位症(endometriosis,EM)在育龄期妇女中的发病率高达10%～15%,且近年来的发病率呈升高的趋势.EM为良性病变,但具有与恶性肿瘤相似的生物学行为,严重影响着妇女的身心健康和生育功能,目前发病机制仍不清楚,"在位内膜决定论"是较公认的发病学说<'[1]>.随着对EM基因表达及其调控的深入研究,有学者发现,EM可能是一种表观遗传性疾病,同源盒(homeobox,HOX)基因HOXA10的异常表达及异常甲基化模式与其发病及不孕密切相关.本文将就HOXA10基因与EM的研究进展做一综述.
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输卵管积水状态下的子宫内膜容受性
因输卵管因素导致的不孕症是体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的适应证之一.其中,未经处理的输卵管积水患者在接受IVF治疗后胚胎种植率和临床妊娠率均下降,自然流产率增加.推测输卵管积水可能影响胚胎质量和子宫内膜容受性.从超声学和分子生物学方面就输卵管积水对子宫内膜容受性的影响相关研究做文献综述.
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活血消异方对子宫内膜异位症妊娠功能低下模型小鼠HOXA10基因的影响
目的:通过观察中药活血消异方对子宫内膜异位症妊娠功能低下模型小鼠着床窗口期子宫内膜HOXA10基因表达量的影响,探讨子宫内膜异位症对子宫内膜容受性的影响机制以及活血消异方对子宫内膜异位症相关不孕症子宫内膜容受性改善的作用机理.方法:建立子宫内膜异位症妊娠功能低下的小鼠模型,随机分为模型组、中药组及假手术组,采用RT-PCR法检测各组小鼠种植窗口期子宫内膜HOXA10的表达水平.结果:假手术组种植窗口期子宫内膜HOXA10mRNA表达量高于中药组及模型组,差异有统计学意义(P＜0.05);而中药组种植窗口期子宫内膜HOXA10mRNA表达量高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:子宫内膜异位症可导致小鼠种植窗口期HOXA10mRNA表达下调,进而降低其子宫内膜容受性.而中药活血消异方可上调小鼠子宫内膜HOXA10mRNA的表达,改善着床窗口期子宫内膜容受性.
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沉默HOXA10基因表达联合川芎嗪可逆转K562/ADR细胞的多药耐药性
目的:研究靶向沉默人慢性髓系白血病耐多柔比星(adriamycin,ADR)细胞株K562/ADR中同源盒A10 (homebox A10,HOXA10)基因表达后联合川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对逆转K562/ADR细胞多药耐药性的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用脂质体法将构建有靶向HOXA10基因的shRNA重组表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10-shRNA稳定转入K562/ADR细胞中,分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测对HOXA10 mRNA和蛋白表达的影响.实验分为6组:空白对照组、阴性对照-shRNA(negative controlshRNA,NC-shRNA) 组、HOXA10-shRNA组、TMP单药组、NC-shRNA+TMP(2μg/mL)组和HOXA10-shRNA+TMP (2μg/mL)组.采用MTT法检测各组细胞的逆转耐药倍数.FCM法检测细胞内ADR平均荧光强度的变化;蛋白质印迹法检测细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)的表达.结果:pGPHI/GFP/Neo-HOXA10-shRNA表达载体能有效抑制K562/ADR细胞中HOXA10 mRNA及蛋白的表达.HOXA10-shRNA+TMP(2 μg/mL)组K562/ADR细胞对ADR的逆转耐药倍数为5.08倍,均较HOXA10-shRNA组和TMP单药组提高(P值均＜0.05);细胞内ADR的平均荧光强度均较HOXA10-shRNA组和TMP单药组提高(P值均＜0.05);P-gp和MRP1的表达水平均较HOXA10-shRNA组和TMP单药组明显下调(P值均＜0.05).结论:靶向沉默HOXA10基因表达联合TMP能逆转K562/ADR细胞的多药耐药,两者间有协同作用,可为临床逆转白血病多药耐药提供重要的实验依据.
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17-β雌二醇对SKOV3细胞HOXA10基因表达及甲基化的影响
目的 探讨17-β雌二醇(17-β E2)对人卵巢癌细胞株SKOV3中HOXA10基因表达及基因启动子区CpG岛DNA甲基化的影响.方法 体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,按实验目的分别加入1×10-6、1×10-7、1×10-8 mol/L的17-β E2培养48 h后,收集细胞,分别采用实时荧光定量RT-PCR反应和Western blot检测HOXA10 mRNA和蛋白表达；提取SKOV3细胞基因组DNA,纯化、修饰后用甲基化特异性聚合酶链反应检测HOXA10基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态.结果 与对照组相比,不同浓度的17-βE2可显著提高SKOV3细胞中HOXA10基因mRNA和蛋白表达(P＜0.05).同时17-β E2作用后HOXA10基因呈部分甲基化状态.结论 17-β 2可以逆转SKOV3细胞中HOXA10基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态,使HOXA10基因的表达上调.
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子宫内膜异位症内膜组织中HOXA10基因异常DNA甲基化及意义
目的:检测子宫内膜异位症(EMs)在位及异位内膜HOXA10基因的表达及DNA的甲基化,探讨HOXA10基因异常表达及DNA异常甲基化在EMs发病及不孕机制中的状态和作用.方法:选择2009年1月至2010年8月在我院行腹腔镜手术治疗的卵巢子宫内膜异位囊肿患者20例(10例合并不孕)、非EMs患者20例(卵巢良性囊肿10例,输卵管因素不孕10例).分别采取其在位、异位内膜及正常子宫内膜组织,采用荧光定量PCR方法检测HOXA10基因mRNA的表达,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测HOXA10基因3个启动子区F1、F2、F3的甲基化状态.结果:EMs在位和异位内膜组的HOXA10基因mRNA表达水平明显低于正常内膜(P＜0.01),EMs在位内膜组总甲基化率45％(9/20),合并不孕患者甲基化率50％(5/10).EMs异位内膜组总甲基化率40％( 8/20),合并不孕患者甲基化率40％(4/10).正常内膜组仅有1例卵巢成熟性畸胎瘤患者发生了甲基化,甲基化率5％ (1/20).EMs在位、异位内膜组总甲基化率及合并不孕患者甲基化率的差异无统计学意义(P=0.58,P=0.32),但与正常内膜组的差异均有显著统计学意义(P＜0.01).结论:HOXA10基因在EMs在位及异位内膜组织中均呈低表达状态,EMs中存在HOXA10基因DNA异常甲基化,EMs合并不孕患者内膜组织中HOXA10基因的DNA甲基化明显高于非EMs不孕患者.EMs中HOXA10基因的DNA异常甲基化可能与其发病及不孕机制有关,深入研究EMs中HOXA10基因DNA异常甲基化,有望为阻断EMs发病或治疗其引起的不孕提供新的思路.
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子宫内膜异位症孕妇女性胎儿HOXA10基因异常甲基化观察及意义
目的 检测子宫内膜异位症孕妇及正常孕妇其女性胎儿脐血子宫内膜异位症易感基因HOXA10甲基化状态,分析内异症的家族遗传性.方法 收集15例内异症孕妇及26例正常孕妇女性胎儿的脐血标本(分别为内异症组及正常组).分别采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)及亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)检测两组HOXA10基因的甲基化程度.结果 两种方法检测内异症组HOXA10甲基化率均显著高于正常组,P均＜0.05.结论 从表观遗传学上讲内异症可能具有家族遗传性.
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ShRNA靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨慢病毒载体介导短发夹RNA(shRNA,siRNA前体)靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖、凋亡和形态的影响.方法 设计并构建4条针对HOXA10基因的shRNA质粒表达载体,并构建HOXA10基因的过表达质粒,将4条干扰质粒分别和过表达质粒共转染293T细胞,用Western blot检测出敲减效果好的1条质粒并包装成慢病毒(lenti-shHOXA10)；将U937细胞分为干扰组(lenti-shHOXA10)、阴性对照组(lenti-NC)和未处理组,通过流式细胞仪测定慢病毒对U937细胞的感染效率并用real-time PCR、Western blot方法测定对HOXA10基因的沉默作用；瑞氏染色观察3组细胞形态上的变化；MTT法检测细胞增殖抑制率；流式细胞术检测3组细胞凋亡率.结果 成功构建了有效沉默HOXA10基因的慢病毒-shRNA载体.干扰组HOXA10 mRNA的沉默效率为(92.3±1.3)％,蛋白表达水平下降91.1％,干扰组细胞抑制率为(43.9±0.7)％,与阴性对照组、未处理组相比差异有统计学意义(P＜0.05)；瑞氏染色显示干扰组细胞核质比减小、核分裂相少见；干扰组细胞凋亡率为(27.1±1.4)％,显著高于阴性对照组的(19.4±1.9)％和未处理组的(5.5±1.3)％(P＜0.05).结论 慢病毒载体介导的shRNA可稳定地降低HOXA10基因的表达水平,有效抑制U937细胞增殖和促进其凋亡,HOXA10基因有望成为白血病基因治疗的新靶点.
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子宫内膜容受性相关因素的研究进展
随着辅助妊娠技术的广泛开展,如何提高妊娠成功率已成为这项技术面临的大问题.妊娠成功率除了胚胎质量因素外,子宫内膜对胚胎的可接受性也至关重要.近年来关于子宫内膜容受性的影响因素已成为国内外生殖医学界争相研究的热点.该文主要从子宫内膜的细胞形态学、分子生物学及基因水平方面综述了国外关于子宫内膜容受性相关因素的新研究进展.
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HOXA10基因在子宫内膜异位症不孕患者内膜组织中的表达及意义
目的:探讨HOXA 10基因在子宫内膜异位症(EMs)不孕中的作用及作用机制.方法:以行腹腔镜手术并经病理确诊为EMs合并不孕症的患者为研究对象(18例,A组),以同期行腹腔镜手术的输卵管性不孕患者(18例,B组)、正常生育组(15例,C组)为对照.分别应用荧光定量PCR、免疫组织化学和Western blotting等方法从mRNA及蛋白质水平检测HOXA10基因在EMs不孕症患者在位、异位子宫内膜以及对照组在位子宫内膜的表达.结果:HOXA10 mRNA及蛋白表达水平在C组的内膜较高；B组稍低于C组,但两者相比差异无统计学意义(P＞0.05)；A组的在位及异位内膜表达水平较C组明显降低(P＜0.01)；但A组的在位内膜与异位内膜基因和蛋白的表达水平均无统计学差异(P＞0.05).结论:HOXA10基因在EMs不孕患者在位子宫内膜中的表达显著降低,可能是EMs不孕患者子宫内膜容受性降低,进而引起不孕的重要因素之一.
关键词： 子宫内膜异位症(EMs) 不孕症 HOXA10基因 -
HOXA10基因与不孕症关系的研究进展
子宫内膜容受性(ER)的建立是妊娠的关键性前提.ER的降低是不孕症的主要因素之一.HOXA 10基因近年来被认为在ER的建立过程中具有重要意义,子宫内膜HOXA 10表达增加是内膜具有良好容受性的必要条件,与胚胎着床密切相关,目前已将HOXA 10作为ER建立的标志物之一.本文旨在对于子宫内膜异位症(EMS)、多囊卵巢综合征(PCOS)、输卵管积水及控制性超促排卵(COH)治疗不孕症患者的HOXA 10基因是否存在异常表达的相关研究进展进行综述,希望能为治疗相关不孕症提供新的思路.
关键词： HOXA10基因 不孕症 子宫内膜容受性(ER) -
人HoxA10基因真核表达载体构建和表达产物的鉴定
目的:克隆人子宫内膜容受性标志分子HoxA 10基因的cDNA,转入真核细胞载体,并在293T细胞中进行表达和鉴定.方法:应用RT-PCR法从人子宫内膜组织中扩增HoxA10基因的cDNA编码区序列,将PCR产物克隆至pCMV-HA真核表达载体中,测序鉴定该载体.以LipofectamineTM2000将该载体转染入293T细胞中,Western blotting检测HoxA10蛋白的表达.结果:PCR扩增出的人HoxA10基因cDNA正确克隆到了pCMV-HA载体,成功构建了pCMV-HA-HoxA10重组载体;将其转染入293T细胞,用HoxA10和HA抗体进行Westem blotting,均检测到了融合蛋白的表达.结论:携带有HA蛋白标签的人HoxA10基因的真核表达载体pCMV-HA-HoxA 10克隆及表达成功,为进一步研究HoxA10与其它蛋白质的相互作用以及建立HoxA10的荧光素酶报告基因分析系统奠定了基础.
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性激素与HOXA10基因调控关系的研究进展
Homeobox(HOX)基因,即同源异犁盒基因,在进化上相当保守,成簇HOX基因以一种特定模式调节胚胎发育,并且受到性激素和来自细胞核受体家族中同源受体的调节.有趣的是,研究表明这一现象在成人的女性牛殖系统机能分化中十分重要,尤其是HOXA10基因的性激素调节对子宫内膜分化的影响有着密切的关系.本文将性激素对子宫内膜HOXA10基因的调节作一阐述.
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HOXA10基因与子宫内膜异位症并不孕症研究进展
子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)是指具有活性的子宫内膜组织(腺体和间质)出现在子宫内膜以外的部位,简称子宫内膜异位症,是育龄期妇女不孕的主要原因之一.不孕症指育龄期女性未采取避孕措施,正常性生活至少12个月未孕.我国不孕症的发病率约为7％～10％.导致不孕症的因素很多,如输卵管粘连、子宫内膜异位症、生殖道畸形、生殖系统肿瘤及排卵障碍等.然而,排除男方因素、女性排卵障碍、精卵结合及输送障碍,仍有10％～15％的女性出现不明原因的不孕症.原因可能包括免疫性因素、遗传缺陷、植入失败等.子宫内膜容受性(endomentrial receptivity)指子宫内膜接纳胚胎着床的能力,时期约在月经周期的第22～24天,即黄体中期.子宫内膜容受性的高低影响胚胎种植及妊娠结局.同源框A10基因(homebox A10,HOXA10),在子宫内膜增生期及分泌早期低表达,在分泌期表达量明显上升,至分泌晚期相对稳定,与子宫内膜种植期时间相符,对维持子宫内膜形态、胞饮突形成、胚胎着床等方面有重要作用,是目前评估子宫内膜容受性的分子标志之一.
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HOXA10和HOXA11在子宫内膜异位症组织中的表达及相关性分析
目的 探讨HOXA10和HOXM1基因在子宫内膜异位症患者异位内膜和在位内膜中的表达及二者之间的相关性.方法 采用半定量RT-PCR反应和免疫组化SP法检测异位内膜60份、在位内膜25份和正常内膜35份中HOXA10和HOXA11基因的mRNA和蛋白表达情况.结果 异位内膜中HOXA10mRNA表达明显低于在位组和对照组,差异极显著(P＜0.01);异位组HOXA 11 mRNA表达显著低于在位组和对照组(P＜0.05);异位组HOXA10蛋白表达显著低于在位组和对照组(P＜0.05):异位组HOXA11蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05);而在位组HOXA11的表达也低于对照组,显著性差异(P＜0.05),同异位组差异不显著.结论 HOXA10与HOXA11在内异症患者的子宫内膜中均低表达,而且呈正相关.HOXA10在子宫内膜的重塑中发挥作用,HOXA11会调节子宫内膜细胞外基质成分的改变.二者在内异症的发生发展起着相互协同的作用.
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雌、孕激素调节Ishikawa细胞中HOXA10基因表达分析
目的 观察分析雌激素、孕激素调节Ishikawa细胞中HOXA10基因表达.方法 对高分化子宫内膜癌细胞(Ishikawa细胞)体外培养,分别加入雌激素、孕激素、雌孕激素联合RU486(合成类固醇)刺激48h之后,行免疫荧光、逆转录聚合酶链反应、免疫印迹三种不同测定方法,完成对不同条件下Ishikawa细胞的HOXA10基因表达.结果 经研究发现单独运用雌激素及孕激素,或者联合运用雌激素、孕激素在48h刺激作用后,发现明显提高Ishikawa细胞中的HOXA10基因表达,相较刺激前,差异有统计学意义(P<0.05).结论 雌激素、孕激素针对HOXA10基因表达具有上调作用.
关键词： 雌激素 孕激素 Ishikawa细胞 HOXA10基因
