首页 > 文献资料
-
G6PD缺乏症单细胞SNaPshot基因诊断方法的建立
目的 建立有效可行的葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症单细胞基因诊断技术. 方法 获取正常人及G6PD基因突变杂合子的单个淋巴细胞,采用多重巢式PCR结合多重SNaPshot技术对G6PD基因突变高发的四个外显子上的12个突变位点进行基因诊断. 结果 共检测了58个正常和108个杂合子单淋巴细胞,扩增效率为90.97％,等位基因脱扣率为8.08％. 结论 所建立的多重巢式PCR结合SNaPshot技术可在单细胞水平上快速、准确地检测12个G6PD基因突变位点,可望在临床上实现G6PD缺乏症的植入前遗传学诊断.
-
联合SNaPshot和单倍型分析技术建立G6PD缺乏症单细胞基因诊断体系
目的 建立可有效监测污染和等位基因脱扣(allele dropout,ADO)的可靠的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症单细胞基因诊断体系. 方法 获取正常G6PD基因型个体及G6PD基因突变杂合子的单个淋巴细胞,在全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)的基础上,应用多重SNaPshot技术检测25个已报道的中国人群G6PD基因突变位点,同时联合针对Xq28上6个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点的单倍型分析技术辅助分析结果. 结果 共检测60个正常和96个杂合子单淋巴细胞,WGA扩增效率为94.23％,成功扩增的WGA产物在后续基因检测的总扩增效率和总ADO率分别为89.37％和13.74％;8个基因位点的扩增效率和ADO率均有统计学差异(P总＜0.05);发生G6PD基因ADO的15例G6PD杂合子单淋巴细胞中,均未同时出现6个STR位点全部扩增失败或ADO现象;所有样本的STR位点检测结果除目的片段的信号峰外,均未出现其他峰信号. 结论 联合SNaPshot和单倍体分型技术所建立的单细胞G6PD基因诊断体系,在G6PD基因分型的同时,还可提示是否存在污染或ADO,大程度保证诊断结果的可靠性,减少误诊率,可望取代传统的性别选择,实现真正意义上的G6PD缺乏症植入前遗传学诊断.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 植入前遗传学诊断 全基因组扩增 单倍型分析 等位基因脱扣 -
邻苯二甲酸二-2-乙基已酯对雄性大鼠的生殖毒性
邻苯二甲酸二-2-乙基乙酯(DEHP)染毒期间,大鼠睾丸和附睾严重萎缩;附睾尾精子数量显著减少,精子死亡率和畸形率明显增高;血清和睾丸内睾酮明显下降;睾丸乳酸脱氢酶(LDH)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)活性显著升高;存在剂量-反应和时间-效应关系.恢复期,除G6PDH外,其它观察指标均恢复到对照组水平.提示短期暴露DEHP引起的雄性生殖毒性为可逆性损伤.
关键词： 邻苯二甲酸二-2-乙基乙酯 睾丸 附睾 精子 睾酮 乳酸脱氢酶 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 -
呋喃丹对大鼠睾丸组织标志酶活性影响的动态观察
为探讨农药呋喃丹对雄性大鼠睾丸组织的损害作用,以低、中、高剂量(0.3、1.5和3.0mg/kg BW)经口连续染毒77天,分别于染毒第7、35和77天检测大鼠血清及睾丸组织匀浆中β-葡萄糖苷酶(β-G)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)、乳酸脱氢酶同工酶X(LDHx、)的活性.结果显示,染毒第7天大鼠3个染毒组血清中β-G活性显著低于对照组(P<0 .05),低剂量组睾丸组织匀浆中β-G活性高于对照组、而高剂量组低于对照组(P<0.05);染毒第77天中高剂量组血清中G-6-PD活性,高剂量组睾丸组织匀浆中LDHx活性均低于对照组(P<0.05),其它指标及时段未见明显改变.提示呋喃丹对大鼠睾丸组织有一定损害作用.
关键词： 呋喃丹 β-葡萄糖苷酶 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 乳酸脱氢酶同工酶 -
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在高脂饲料诱导肥胖中的作用
目的 探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)及其下游NADPH氧化酶在高脂饲料诱导肥胖中的作用.方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为高脂饲料组(30只)和基础饲料组(10只),6周后,高脂饲料组依据体重增加量筛选出位于上1/3和下1/3的大鼠为肥胖组和抵抗组(各10只),肥胖组和抵抗组大鼠继续喂饲高脂饲料,基础饲料组作为正常对照组,13周后处死,测定生化指标,检测脂肪组织中G6PD的活性,采用RT-PCR法检测G6PD、NOX亚基P22基因表达.结果 肥胖组大鼠血糖明显高于对照组(P＜0.05),甘油三酯、体脂含量显著高于抵抗组(P＜0.05),胰岛素、胰岛素抵抗指数、体重都显著高于对照组和抵抗组(P＜0.05),对照组和抵抗组之间差异无显著性,肥胖组G6PD的表达和活性均低于对照组和抵抗组(P＜0.05),P22亚基在肥胖组表达水平显著高于对照组和抵抗组(P＜0.05).结论 G6PD及其下游的NADPH氧化酶可能在肥胖的发生和发展中起重要作用.
关键词： 肥胖 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 NADPH氧化酶 脂肪 -
中石油派驻尼日尔员工G6PD活性筛查及疟疾感染的问卷调查
目的 评估中石油派驻尼日尔员工葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活性,并调查其疟疾感染情况.方法 使用CareStart G6PD快速检测试剂条检测460名中石油驻尼日尔员工的G6PD活性,通过调查问卷的形式统计其疟疾感染率.结果 460名中石油驻尼日尔员工的G6PD活性均处于正常范围,可安全使用伯氨喹.接受问卷调查的426名员工分别来自CPF营地、FPF营地、Jaouw营地和炼油厂,疟疾感染率分别为15.9％、2.4％、20.6％和23.0％.驻非工作年限＜5年者疟疾感染率为7.7％,驻非工作年限＞10年者疟疾感染率为41.4％,即随着驻非工作年限的增加,感染疟原虫的风险也明显增加.结论 中石油派驻尼日尔员工使用伯氨喹治疗是安全的,不会发生G6PD缺陷引发的急性溶血贫血.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 疟疾 伯氨喹 非洲 -
吩嗪甲酸硫酯对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的人红细胞某些生化指标的影响
为探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏的人红细胞在自由基作用下的变化情况,通过测定自由基作用前后G6PD缺乏人红细胞变形能力、高铁血红蛋白生成、过氧化氢酶活力、还原型谷胱甘肽(GSH)、还原型三磷酸吡啶核苷(NADPH)的浓度,并与正常红细胞比较.结果显示G6PD缺乏红细胞在氧自由基作用下变形能力、过氧化氢酶活力、GSH及NADPH水平与正常红细胞相比显著下降(P＜0.01),而高铁血红蛋白生成显著增加(P＜0.01),从而得出G6PD缺乏红细胞氧化易感性增强导致细胞损伤、变形能力下降是其易发溶血的主要原因的结论.
关键词： 氧自由基 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 红细胞变形能力 过氧化氢酶 -
一个中国G6PD缺乏症家系致病基因的突变分析
目的 对一个葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症家系成员G6PD基因13个外显子全面测序,识别致病的突变位点及其遗传模式.方法 在G6PD缺乏症高发区广东惠州地区收集到一个G6PD缺乏症核心家系,包括先证者(儿子)、患病母亲和正常父亲.取家系成员的外周血样,并提取基因组DNA,用PCR和DNA测序法对G6PD基因全部外显子进行序列分析.结果 先证者及其母亲在G6PD基因第2号外显子出现同一点突变(c.95A＞G,p.His32Arg),该突变引起组氨酸被精氨酸替换(CAC＞ CGC).然而先证者父亲在G6PD基因的13个外显子均未出现突变.3种生物信息学软件均预测该突变对蛋白质功能具有较强的危害性.结论 该家系中c.95A ＞G呈X连锁显性遗传,是G6PD缺乏症的致病突变位点之一.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 基因突变 外显子测序 -
贵州三都水族居民葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变研究
为了了解贵州省少数民族居民葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症的发病率、基因突变类型特点及分布特征,进一步从分子水平揭示G6PD基因突变的异质性,对贵州省三都水族自治县1 090名当地水族居民采用噻唑蓝定性法、G6PD/6PGD活性比值法进行G6PD缺乏症的筛查,再经错配引物介导的聚合酶链反应/限制性酶切分析法检测中国人中常见的3种G6PD基因突变型:1376 G→T、1388 G→A、95 A→G.结果表明:在受检的1 090人中,共检出G6PD缺乏症98例,检出率8.99%,在G6PD缺乏症中检出常见的3种G6PD基因突变型:1376 G→T 24例;1388 G→A 12例;95 A→G 9例;并在国内首次检出1376 G→T、95 A→G复合型突变1例.1376 G→T突变频率为0.245;1388 G→A突变频率为0.122;95 A→G突变频率为0.092.结论:1376 G→T、1388 G→A、95 A→G为贵州省三都水族居民的常见G6PD突变型,这个结果提示贵州三都水族与中国其它少数民族在起源上可能有共同的渊源.
-
波动性葡萄糖对胰岛β细胞INS-1的影响
目的 探讨波动性葡萄糖对培养的胰岛β细胞株INS-1细胞的损伤机制.方法 实验分5组.对照组:葡萄糖浓度为5.5 mmol/L;持续高糖组:葡萄糖浓度为16.7 mmol/L;波动性高糖组:16.7mmo/L葡萄糖培养2 h后更换葡萄糖浓度为5.5 mmo/L,继续培养3 h,每天重复3次,夜间9 h维持在5.5 mmo/L匍萄糖的培养基中;N-乙酰半胱氨酸(NAC,1.0 mmo/L)+高糖组;NAC+波动性高糖组.流式细胞仪检测活性氧簇(ROS)的水平;四氮唑蓝定量检测细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的活性;同时检测还原型辅酶Ⅱ(NADPH)的含量.结果 干预72 h后,对照组、高糖组、波动性高糖组、NAC+高糖组和NAC+波动性高糖组细胞的ROS活性分别为37.77±2.31、86.97±7.97、124.27±10.04、60.92±2.61和51.47±3.36;G6PD活性分别为1.25±0.03、1.09±0.02、1.03±0.01、1.12±0.02和1.21±0.01;NADPH含量分别为(0.123±0.003)mmoVmg prot、(0.112±0.004)mmol/mg prot、(0.099±0.002)mmol/mg prot、(0.116±0.005)mmol/mg prot和(0.120±0.002)mmol/mg prot.波动性高糖组细胞ROS活性较单纯高糖组显著增加(P＜0.01),G6PD活性和NADPH含量较单纯高糖组显著减少(P＜0.01);加NAC共孵育使细胞的变化程度减小.结论 波动性高浓度葡萄糖使培养的INS-1细胞氧化应激水平增高,其机制可能是由于抗氧化酶G6PD活性降低导致了氧化还原的失衡.
关键词： 胰腺β细胞 活性氧 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 波动性高糖 -
高龄2型糖尿病患者合并葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症急性溶血一例报道
报道1例高龄T2DM合并葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症患者,予安痛定后出现急性溶血,G-6-PD与6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6-PGD)比值低于正常,提示G-6-PD缺乏症.降糖、抗感染、碱化尿液及输血等治疗有效.高血糖增加急性溶血的风险,在G-6-PD缺乏症高发区的糖尿病患者应积极筛查G-6-PD活性.
关键词： 糖尿病 2型 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 溶血 -
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者基因突变32例分析
目的 探讨采用突变特异性扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)技术检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)缺乏症患者基因突变的可行性.方法 采用突变特异性扩增系统技术对2007至2010年3月在本院遗传诊断中心门诊就诊的云南省本地人群中,既往有葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症生育史,或孕前筛查、新生儿筛查发现葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症高风险胎儿,共计32例(男性为15例,女性为17例)进行葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者三种常见基因突变检测(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会制定的伦理学标准,征得受试者本人或其监护人的知情同意).结果 32例确诊为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症高风险患者中,23例检出三种常见基因突变,其中1388 (G→A) 突变为12 例,1376 (G→T) 突变为9 例,95 (A→G) 突变为2例,这三种突变占本组患者的71.9%(23/32).结论 突变特异性扩增系统技术可作为葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者常规基因诊断和产前诊断方法.突变特异性扩增系统技术对胎儿,既可检出男性患者,又可检出女性杂合子,但对少数患者仍需采用其他技术检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者基因突变.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 基因 突变 突变特异性扩增系统 -
存储温度和时间对滤纸片干血斑标本葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性的影响
目的 探讨存储温度和时间对滤纸片干血斑标本葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)活性的影响,选择合适的存储条件,提高实验准确性,降低假阳性率.方法 研究对象为2006年6月在云南省第一人民医院遗传诊断中心门诊就诊的25例筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症个体(成年个体为20例,新生儿为5例)的滤纸片干血斑标本(成年患者取手指末稍血,新生儿患者取足跟血于S&S903滤纸片上),水平放置自然条件下干燥.将同一滤纸片干血斑标本分为3组,分别存储于4°C冰箱(4°C冰箱组)、室温和37℃恒温温箱[室温组(约18°C)和37℃温箱组]中,在第1、第3、第6天采用荧光测定法测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性,比较滤纸片干血斑标本在不同存储温度、存储时间测定的结果,探讨温度和时间对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性的影响.结果荧光测定法所测4°C冰箱组中,25例滤纸片干血斑标本葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性正常,测定值为(5.32±0.77)IU/g血红蛋白(Hb).室温组和37°C温箱组滤纸片干血斑标本葡萄糖-6-磷酸脱氢酶酶活性下降,与4°C冰箱组比较,差异有显著意义(P
关键词： 存储 温度 时间 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 -
重庆市新生儿高胆红素血症患儿G6PD基因突变类型及临床特点
目的 研究重庆市新生儿黄疸儿G6PD三种常见基因突变与其临床表现特点之间的关系.初步估计其基因突变频率并探讨其临床意义和遗传学特征.方法 应用突变特异性扩增系统(ARMS)法,检测54例重庆市新生儿黄疸儿的G6PD基因突变类型.结果 检出G1388A突变39例(72%),G1376T突变8例(15%),未定型者7例(13%).未检出G95A.结论 本研究首次对重庆市新生儿黄疸儿进行G1388A、G1376T和A95G突变检测.提示G1388A和G1376T为重庆市新生儿黄疸儿G6PD缺乏症基因突变的主要类型.ARMS法是一种简便、快速、经济的检测G6PD已知基因突变的方法.本研究发现这两种突变类型仅见于中国人和华裔人群,具有遗传学及临床意义.
关键词： 新生儿 高胆红素血症 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 基因 -
广西恭城县瑶族和汉族居民G-6-PD缺乏症发病率及基因频率的调查
目的研究广西恭城县瑶族和汉族居民的G-6-PD缺乏症发病率及基因频率.方法使用G-6-PD试纸法初筛,四氮唑蓝定量法测定确认的方法调查对2050名(男1126,女1124)瑶族和874名(男481,女393)汉族初中学生进行G-6-PD缺乏症的调查.结果瑶族男缺乏率5.75%(显著缺乏4.87%,中度缺乏0.97%),瑶族女性缺乏率1.95%(显著0.59%,中度1.36%),瑶族男女合并总缺乏率为3.85%;瑶族男性基因频率为:0.057,瑶族女性杂合子的估计值为10.84%:汉族男性缺乏率7,06%(显著缺乏6.03%,中度缺乏1.04%),汉族女性缺乏率3.56%(显著0.76%,中度2.80%),汉族男女合并总缺乏率为5.49%;汉族男性基因频率为0.0706,汉族女性杂合子的估计值为13.12%;全县瑶族和汉族合并缺乏率为4.34%.结论恭城县G-6-PD缺乏发病率,瑶族比汉族的稍低,但民族间的差异比地域间的差异相对要小.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 缺乏症 基因频率 瑶族 广西恭城 -
蚕豆病患儿父、母、子红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性测定的临床研究
了解蚕豆病患儿急性溶血期红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)活性变化及父、母、子同时检测G-6-PD活性对该病诊断及家系调查的意义;方法对急性溶血期蚕豆病患儿及其父母用酶学动力法测定红细胞G-6-PD活性.结果157例急性溶血期患儿G-6-PD活性低于正常143例,占91.08%(男135,女8),其中轻度减低42例、中度降低96例,重度降低5例,14例患儿急性溶血期G-6-PD活性检测结果正常,占8.92%,他们父母酶活性检测,12例母(12/14)、5例父(5/14)、3例父母(3/14)酶活性下降;157例母亲中129例G-6-PD活性下降(82.16%),其中143例男性患儿母亲中118例活性下降(82.52%);157例父亲中53例活性下降(27.38%);G-6-PD活性子、父、母均降低32例(20.38%),子、母降低父正常85例(54.14%)、子、父降低母正常10例(6.37%),子降低父、母正常16例(10.19%).14例女性患儿中,父母酶活性均降低2例,为纯合子发病,2例父酶降低母酶正常,为父源性杂合子,其余10例为母源性杂合子起病.结论父母子同时检测红细胞G-6-PD活性有助于蚕豆病患儿特别对急性溶血期红细胞G-6-PD活性正常患儿的明确诊断,家系调查有助于推测患儿G-6-PD缺陷基因的遗传方式.
关键词： 蚕豆病 诊断 家系调查 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 -
过度训练对大鼠腹膜巨噬细胞活性氧生成能力的影响及其相关机制研究
目的:了解过度训练对巨噬细胞活性氧生成能力的影响及其相关机制.方法:8周龄健康雄性Wistar大鼠16只,随机分为安静对照组和过度训练组,每组8只.过度训练组进行11周递增负荷跑台训练,后一次训练结束后36 h断头处死,分离纯化腹膜巨噬细胞.流式细胞术测定其活性氧( ROS)生成量,荧光定量PCR技术测定NADPH氧化酶gp91phox、p22phox、p47phox亚基和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因表达.结果:与安静对照组相比,过度运动组巨噬细胞ROS生成量显著降低(P=0.003),gp91phox、p22phox亚基表达量无显著变化(P＞0.05),p47phox亚基表达量显著增加(P＜0.05),G6PD表达量无显著差异(P＞0.05).结论:过度训练可显著降低大鼠腹膜巨噬细胞ROS生成水平,这并非通过抑制NADPH氧化酶亚基表达和抑制NADPH氧化酶生成途径实现,可能有其它调控机制参与.
关键词： 过度训练 巨噬细胞 活性氧 NADPH氧化酶 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 -
4562例儿童葡萄糖-6-磷酸脱氢酶检测结果分析
目的 通过对儿童葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活性检测的总结,了解本地区儿童G6PD缺乏症发生率,为临床预防疾病提供参考依据.方法使用东芝TBA-120FR型全自动生化分析仪测定2010年4月～2011年7月4 562名儿童血液G6PD活性情况,判定G6PD是否缺乏.结果 4 562名儿童中共检测G6PD缺乏266例,发生率为5.83%,其中2 457名男童G6PD缺乏178例,发生率为7.24%,2 105名女童G6PD缺乏88例,发生率为4.18%.结论本地区儿童G6PD缺乏发生率为5.83%,G6PD缺乏者男女比例为1.73︰1.对查出G6PD缺乏症者医疗机构应采取有效的预防和控制措施,避免急性溶血的发生.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 发生率 缺乏症 儿童 -
还原型谷胱甘肽治疗新生儿G-6-PD缺陷性黄疸
目的 观察还原型谷胱甘肽治疗新生儿G-6-PD缺陷性黄疸的疗效,并探讨其治疗机制.方法 对32例因G-6-PD缺陷导致黄疸的新生儿加用还原型谷胱甘肽静脉滴注,观察疗效,并与对照组比较.同时检测两组患儿治疗前后红细胞辅酶Ⅱ(NADPH)及丙二醛(MDA)含量.结果 加用还原型谷胱甘肽治疗组黄疸消退时间,改换血治疗例数均少于对照组.治疗组治疗后辅酶Ⅱ含量高于对照组,MDA低于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 还原型谷胱甘肽对G-6-PD缺陷性新生儿黄疸具有良好的辅助治疗效果,并可减少换血需求.其治疗机制与减少红细胞过氧化损害有关.
关键词： 新生儿 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 谷胱甘肽 还原型 黄疸 -
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变检测方法
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症是人类常见的遗传性细胞酶病,其本质是基因突变.随着医学分子生物学的发展,许多检测方法已被应用于G6PD基因突变的检测,例如等位基因特异性寡核苷酸探针斑点杂交法、反向点杂交法、基因芯片技术、聚合酶链反应/限制性内切酶分析、突变特异性扩增系统、飞行时间质谱、单链构象多态性分析、变性梯度凝胶电泳、DNA直接测序法、变性高效液相色谱、毛细管电泳法等.
关键词： 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 基因突变 检测方法
