尿激酶受体在尿激酶诱导小鼠精子趋化运动中的作用

目的研究尿激酶受体(uPAR)在尿激酶(uPA)诱导精子趋化运动中的作用. 方法采用精子聚集毛细管内法检测精子趋化性.实验分为对照组和处理组,处理组又根据uPAR抗体浓度的不同分为10、50、100 μg/ml 3组.各组毛细管内的液体都是浓度相同的uPA;对照组精子培养皿内的液体为精子悬液与Ham's F-10的混合液,处理组精子培养皿内液体是在对照组的基础上加有不同浓度的抗-uPAR抗体.分别在实验的第 20、30 min检测每组毛细管内聚集的精子数量. 结果随着uPAR抗体浓度的增加,uPA趋化精子的数目逐渐减少,与对照组之间差异有显著性(P<0.05). 抗-uPAR抗体与精子作用20 min时对精子趋化运动的抑制明显,其中50、100 μg/ml组与对照组比较,P<0.01. 结论阻断精子uPAR可以抑制由uPA诱导的精子趋化运动,推测uPAR可能在精卵识别中起一定的作用.

uPAR靶向性MRI探针的制备及其与乳腺癌细胞靶向结合的研究

乳腺癌是女性常患的恶性肿瘤之一,实现对乳腺癌原发性及转移性微小病灶的早期检测对于提高患者生存率具有重要的意义.研究表明,尿激酶受体(uPAR)在乳腺癌肿瘤细胞及肿瘤相关细胞中高表达而在正常组织细胞中低表达.通过将次氮基三乙酸(NTA)连接到超顺磁性氧化铁纳米颗粒(SPIO)表面,获得一种通用的磁共振成像(MRI)模块(SPIO-NTA).进而将uPAR天然配体尿激酶(uPA)的氨基末端片段(ATF)通过组氨酸标签(His tags)偶联到SPIO-NTA上,获得一种具有uPAR靶向性的MRI探针(SPIO-ATF).其γ-Fe2O3核心的直径小于10 nm,平均水合直径约为77 nm,Zeta电位约为-13 mV.蛋白凝胶电泳及考马斯亮蓝染色结果证明ATF被成功导入到SPIO上.细胞实验结果表明,SPIO-ATF与乳腺癌细胞4T1的结合量与细胞uPAR的表达量正相关,表明SPIO-ATF对4T1细胞具有良好的特异性结合能力,而这种结合是通过ATF与uPAR的相互作用介导的.另外,4T1细胞对SPIO-ATF的摄取具有浓度依赖性.在实验条件下,SPIO与SPIO-ATF都没有表现出明显的细胞毒性.通过研究构建一种可用于乳腺癌靶向诊断的新型MRI探针,从而为乳腺癌的早期诊断提供一种新策略.

尿激酶受体抑制剂阿米洛利降低蛋白尿的实验研究

目的：观察阿米洛利在脂多糖诱导小鼠短暂蛋白尿模型中对蛋白尿的影响，探讨其影响蛋白尿的机制。方法构建脂多糖（LPS）诱导小鼠短暂蛋白尿模型，实验分为3组：正常对照组（Con）、LPS处理组、LPS与amiloride共同处理组（LPS＋amiloride）。采用考马斯亮蓝法检测各组24 h尿蛋白，利用免疫荧光共聚焦、实时荧光定量PCR等技术，检测足细胞尿激酶受体（uPAR）蛋白和uPAR mRNA的表达情况。结果 LPS组24 h蛋白尿明显高于Con组[（4.12±1.06）mg vs.（1.35±0.68）mg；t＝2.77，P＝0.000]及LPS＋amiloride组[（4.12±1.06）mg vs.（1.99±0.96）mg；t＝2.13，P＝0.001]，均有统计学意义；LPS＋amiloride组24 h蛋白尿与Con组相比无统计学意义（t＝0.64，P＝0.244）；激光共聚焦显微镜观察，LPS组足细胞uPAR表达明显高于Con组与LPS＋amiloride组；LPS组uPAR mRNA表达明显高于Con组（2.12±0.35 vs.1.04±0.14，t＝1.12，P＝0.000）及LPS＋amiloride组（2.12±0.35 vs.1.30±0.22，t＝0.82，P＝0.000），均有统计学意义。结论阿米洛利可能通过抑制受损足细胞uPAR的表达，从而起到降蛋白尿的作用。

膀胱癌细胞尿激酶受体的放射配基结合分析

目的:研究膀胱移行细胞癌细胞膜尿激酶受体(uPAR)与尿激酶(uPA)的结合特性及其与膀胱移行细胞癌生物学行为之间的关系.方法:采用放射配基结合受体分析方法对18例膀胱移行细胞癌组织及6例正常膀胱粘膜uPAR的表达及与uPA的亲和力进行检测.结果:膀胱癌组织uPAR大结合容量Bmax为(420.8±84.6) pmol/g蛋白,平衡解离常数Kd值为(1.23±0.5) nmol/L,正常膀胱黏膜Bmax为(84.5±10.4) pmol/g蛋白,Kd值为(5.50±1.48) nmol/L,二者比较差异具有统计学意义,P<0.01.随着膀胱肿瘤分级、分期的增高和转移的出现,uPAR结合位点数明显增加,与uPA的结合能力显著增强.结论:uPAR在膀胱移行细胞癌中的表达明显升高,与uPA的结合力明显增强,uPAR和uPA与膀胱移行细胞癌的恶性生物学行为密切相关.

膀胱移行细胞癌尿激酶受体的放射配基结合分析

我们采用放射配基结合试验,研究人膀胱移行细胞癌细胞膜尿激酶受体(uPAR)的表达及与尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)的结合特性,探讨二者与膀胱移行细胞癌浸润及转移之间的关系.

肿瘤与血液病患者体内尿激酶受体表达水平临床意义的研究

尿激酶受体(uPAR,CD87)是近年来新发现的一个单链膜糖蛋白.uPAR在体内主要以糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定在血管内皮细胞、平滑肌细胞以及血液粒-单核细胞等的表面.近人们发现肿瘤细胞表面过表达uPAR,从而使其成为国际上研究肿瘤的一个新的热点.本课题中我们制备了抗尿激酶受体(uPAR)的单克隆抗体(单抗),建立了血浆可溶性uPAR(suPAR)以及细胞表面uPAR的检测方法.应用以上方法,比较系统地研究了uPAR的表达与肿瘤(包括白血病)的生物学行为关系以及对PNH诊断的价值,取得了一定的成绩,介绍如下.

尿激酶受体反义RNA真核表达质粒的构建

目的 构建尿激酶受体(UPAR)基因pcDNA3.1(-)真核表达质粒,为进一步研究通过UPAR干预类风湿关节炎的发生发展提供实验基础.方法 取冰冻保存的小鼠肝癌组织,应用TRIzol法提取总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA浓度和纯度.使用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒获得目的 基因(UPAR)cDNA片段.用CaCl2法诱导感受态细胞.将真核载体pcDNA3.1(-)在多克隆位点处用HindⅢ、BamH Ⅰ双酶切线性化,切胶纯化回收;将纯化回收的pcDNA3.1(-)线性化载体和UPAR基因片段定向及反向连接,构建以pcDNA3.1(-)为载体的反义UPAR基因表达质粒;转化JM109大肠杆菌;酶切证实的阳性克隆行测序分析.结果 琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,见28S,18S条带完整,而且28S条带亮度为18S的1倍左右,认为RNA完整性良好,并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA纯度A260/A280=1.9051,认为RNA纯度良好;RNA浓度为450mg/L;阳性克隆经双酶切后行10g/L琼脂糖电泳,在DNA Marker 500bp和5.3bp附近可见两条明显条带,与所需目的片段大小相符,证实为阳性克隆,重组质粒构建成功;DNA测序结果与预期目的 片段序列一致.结论 反义UPAR真核表达重组质粒构建成功.

TF-FⅦa复合物影响人卵巢癌细胞尿激酶型纤溶酶原激活物受体mRNA表达的研究

目的克隆人组织因子(TF),研究组织因子-活化凝血因子Ⅶ复合物(TF-FⅦa)对人卵巢癌细胞内尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)及其受体(u-PAR)mRNA表达的影响,探讨该复合物在肿瘤浸润、转移中的作用机制.方法采用分子克隆技术构建人TF真核表达载体pcDNA3-TFcDNA;以脂质体介导转染人卵巢癌细胞系A2780,筛选稳定表达的转染细胞A2780-TF.以FⅦa分别刺激A2780细胞和A2780-TF细胞,采用RT-PCR方法检测细胞内u-PA及u-PAR mRNA水平变化.结果①构建产物经基因测序证实为pcDNA3-TFcDNA重组体;②转染细胞A2780-TF内TF-mRNA水平显著增高:转染细胞为3.91±0.28,未转染细胞为0.97±0.23(P<0.01);转染细胞表面TF表达显著增高:转染细胞为(48.56±9.53)%,未转染细胞为(2.73±1.15)%(P<0.01);③FⅦa刺激对A2780细胞内u-PA、u-PAR mRNA水平均无显著影响;④FⅦa呈浓度依赖性诱导A2780-TF细胞内u-PAR mRMA水平增高,而不影响u-PA mRNA水平;FⅦa刺激A2780-TF细胞内u-PAR mRNA水平增高的作用具有一定的时相性;⑤抗TF单抗可阻断FⅦa诱导A2780-TF细胞内u-PAR mRNA转录的作用.结论 TF通过与FⅦa形成复合物而上调人卵巢癌细胞内u-PAR mRNA的表达,可能藉此增强肿瘤侵袭及转移作用.

疏血通对急性心肌梗死患者尿激酶及其受体的影响

目的 观察疏血通对急性心肌梗死患者血浆尿激酶(u-PA)浓度及全血中性粒细胞表面尿激酶受体(u-PAR)表达率的影响.方法 选取2007年6月-2008年6月在我院确诊的急性心肌梗死患者84例,将患者随机分为治疗组和对照组,对照组采用常规治疗;治疗组在常规治疗的基础上加用疏血通,将疏血通4 mL加入生理盐水250 mL中静脉输注,每日1次,疗程为2周.检测两组患者的血浆尿激酶浓度及全血中性粒细胞表面尿激酶受体表达率.结果 治疗组治疗后血浆尿激酶浓度及中性粒细胞表面尿激酶受体表达水平较对照组下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 疏血通能够降低血浆尿激酶浓度及下调中性粒细胞表面尿激酶受体的表达,改善患者预后.

肺癌患者血浆尿激酶受体的检测及其临床意义

目的研究肺癌患者血浆中尿激酶受体(uPAR)的表达,探讨uPAR与肺癌浸润转移及预后的关系.方法 2002-04～2002-12苏州大学附属第二医院采用酶联免疫吸附试验方法(ELISA)检测26名正常健康者及54例肺癌患者血浆中可溶性尿激酶受体(suPAR)的质量浓度.结果肺癌患者血浆suPAR质量浓度显著高于健康对照组(P<0.001),并与TNM分期(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期)相关(P<0.05).结论 suPAR在肺癌的生长、侵袭转移过程中起着重要的作用,检测其在血浆中的表达有助于判断患者的病情及预后.

肝细胞癌尿激酶型纤溶酶原激活物受体mRNA、VEGF和c-erbB2的表达及意义

探讨尿激酶型纤溶酶原激活物受体(UPAR)mRNA、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和癌基因c-erbB2在肝细胞癌(HCC)的表达与其病理学特性和肿瘤转移的关系.采用原位杂交方法检测肝细胞癌UPA mRNA表达,免疫组化法检测VEGF和c-erbB2的表达.肝癌转移组的UPAR mRNA、VEGF和c-erbB2阳性表达率及表达强度均明显高于无转移组,二者相比均有显著性差异(P＜0.05),但它们的表达与肝癌的大小、分化程度却无关;UPAR mRNA与VEGF及c-erbB2的表达强度均呈正相关(r=0.656、0.653,P＜0.05).UPA mRNA、VEGF和c-erbB2的表达可作为肝细胞癌的侵袭表型、判断疗效以及估计预后的重要指标.

117尿激酶和尿激酶受体缺乏小鼠与重症疟疾相关的死亡延缓以及血小板减少症的减轻

uPA、uPAR在肝癌中的作用研究进展

uPA、uPAR是纤溶系统中的重要组成部分,主要通过激活纤溶酶降解细胞外基质,促进肿瘤的浸润和转移.抑制uPA、uPAR活性,可以阻止肿瘤的浸润和转移.此文就其与肝癌的关系及在临床中的应用作一综述.

尿激酶型纤溶酶原激活物受体与肿瘤

尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)是缺乏跨膜及胞浆部分的单链膜糖蛋白受体,通过糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞表面,在人体内广泛分布.

尿激酶受体在口腔鳞癌中的表达

目的探讨尿激酶受体(UPAR)在口腔鳞癌中的表达及与侵袭、转移、预后的关系.方法采用免疫组化LsAB法检测口腔鳞癌、口腔正常粘膜、口腔粘膜白斑中UPAR的表达.结果口腔鳞癌中UPAR表达明显高于口腔正常粘膜和口腔白斑.口腔鳞癌中UPAR的表达与淋巴结转移、预后、生长方式、TNM分期之间存在相关关系.有转移组明显高于无转移组;预后差组明显高于预后好组;浸润型生长方式高于外生型和溃疡型生长方式;IV期高于III期、II期、I期.结论 UPAR表达与口腔鳞癌的侵袭、转移关系密切,UPAR有望在临床上成为判断侵袭、转移和预后指标之一.

肝硬化患者血浆尿激酶受体含量改变的临床意义

尿激酶受体(UPAR)是一个单链膜糖蛋白,它以糖基化磷酯酰肌醇(GPI)锚定形式结合在体内许多细胞的表面,如血管内皮细胞、平滑肌细胞以及血液粒-单系细胞等,在多种病理状态下如肿瘤、炎症时,细胞表面的UPAR表达增高,后者从细胞的表面脱落释放入外周循环中可成为可溶性UPAR[1-2].通过监测血清(浆)UPAR水平的改变来研究各种疾病过程已成为一个重要方向.我们检测83例肝硬化患者血浆中UPAR的含量,以探讨其临床意义.

少弱精子症和正常生育男性精液中尿激酶及其受体含量的研究

目的:通过研究精子正常和异常男性精浆和精子中尿激酶及受体含量差异,以了解尿激酶及受体与男性生育力的关系.方法:采用双抗体夹心ELISA法测定22例正常生育男性和44例少弱精子症男性精浆和精子中尿激酶及受体的含量.结果:①正常男性精浆尿激酶平均含量为(4 803.69±602.78)mU/L,与少弱精子症组[(4 061.35±736.23)mU/L]相比,差异有显著性(P＜0.01).正常生育男性精子尿激酶平均含量为(30.29±3.16)mU/106个精子,与少弱精子症组[(20.51±4.2)mU/106个精子],差异有显著性(P＜0.01).②正常生育男性精子尿激酶受体平均含量为(12.97±3.11)mU/106个精子相比,与少弱精子症组[(6.09±1.45)mU/106个精子]相比,差异有显著性(P＜0.01).③精子和精浆中尿激酶含量和精子活率和活力呈显著正相关.结论:尿激酶和男性生育力相关,少弱精子症和正常生育男性精液中尿激酶及其受体含量存在差异.

尿激酶受体在肺癌组织中的表达

研究尿激酶受体(uPAR)在肺癌组织和非肺癌组织中表达的差异,探讨uPAR与肺癌浸润转移的关系.方法用免疫组织化学S-P法检测uPAR在52例肺部组织标本中的表达.结果肺癌组uPAR的阳性表达率为88.89%,非肺癌组uPAR的阳性表达率为6.25%,两组比较差异有高度统计学意义(P＜0.0001).uPAR的表达与肺癌患者的病理类型、性别和年龄无关(P＞0.05).结论肺癌组织中有uPAR的异常高表达,uPAR在肺癌的生长、侵袭转移过程中起着重要的作用.

尿激酶型纤溶酶原激活因子受体配体抑制胶质瘤生长

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子受体在人脑胶质瘤发生发展中的作用及靶向阻断对胶质瘤生长的影响.方法:采用人脑胶质瘤细胞U87MG建立高度重复性原位裸小鼠人脑胶质瘤模型,皮下应用鼠PEG-uPA 1-48(300μg)或人PEG-uPA 1-48(300μg)或者二者联合(各100μg)每周2次.结果:对照组9周内死亡,人PEG-uPA 1-48治疗组12周内死亡,20周后有20%鼠PEG-uPA 1-48治疗组和80%联合治疗组生存.组织学检测显示鼠PEG-uPA 1-48治疗组和联合治疗组肿瘤组织血管密度、细胞增殖指数显著降低,肿瘤细胞凋亡指数显著增加.结论:uPAR在胶质瘤的恶性演进中起重要作用,Peg-uPA能有效抑制脑胶质瘤生长,对脑胶质瘤辅助治疗有用.

深静脉血栓患者抗凝与纤溶功能研究

目的:通过对深静脉血栓形成(DVT)患者抗凝和纤溶系统各种指标的检测,探讨高凝状态在DVT患者发病机制中的重要作用.方法:选择72例经超声和(或)静脉造影确诊的DVT患者,以70例健康体检者作为对照组测定抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)活性、蛋白C(PC)活性、总蛋白抗原S(PS)、纤溶酶原(Plg)活性、纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)、D-二聚体(D-dimer)、尿激酶(uPA)和尿激酶受体(uPAR)含量.结果:DVT患者的AT-Ⅲ活性、PC活性和PS含量明显低于对照组,患者组中抗凝蛋白AT-Ⅲ、PC和PS缺陷的发生率明显高于对照组,其中复发组的AT-Ⅲ、PC和PS缺陷的发生率明显高于初发组.DVT患者的Plg含量明显低于对照组,而PAI-1、D-dimer、uPA、uPAR水平明显高于对照组.患者组中D-dimer含量>500 ng/L者占97.2%,而对照组仅占1.4%.结论:DVT患者中普遍存在抗凝功能的降低,表现为各种抗凝蛋白水平的降低,DVT患者中抗凝蛋白缺陷的发生率明显高于对照组,复发DVT患者的抗凝蛋白缺陷发生率明显高于初发患者,证明抗凝蛋白缺陷是DVT发生和复发的重要因素之一.DVT患者普遍存在纤溶功能的降低,表现为Plg含量的降低和PAI-1含量的升高,患者组uPA和uPAR含量明显高于对照组,主要是由于uPA/uPAR介导的纤溶活性在DVT发生后的血管壁修复和血管发生中具有重要作用.D-dimer测定具有阴性排除诊断价值.