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胎儿染色体非整倍体产前筛查进展
过去30年里,胎儿染色体非整倍体产前筛查从单纯的孕妇年龄筛查到不同模式的母血清学筛查,检出率和准确度均逐渐提高.近三年,采用大规模平行测序技术对母血浆胎儿游离DNA进行测序的无创产前检测(noninvasive prenatal testing,NIPT)被用于胎儿染色体非整倍体产前筛查领域.本文回顾了传统血清学筛查方案的进展,并阐述了无创DNA产前检测方法的发现、临床应用、局限性及应用前景.
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第二代测序技术在检测母血浆胎儿游离DNA中的应用研究
母血浆中胎儿游离DNA的发现为遗传疾病的诊断、妊娠相关疾病及无创性产前诊断提出新的研究思路,随着不断对母血浆胎儿游离DNA的检测技术的更新、改进,第二代测序技术的出现使对胎儿游离DNA的理论研究转变为广泛应用,大大促进了人们对母婴一些疾病的认知和预测,避免缺陷儿的出生.本文就母血浆胎儿游离DNA的生物学特性、与临床疾病关系、检测技术的进展以及第二代测序技术在检测母血浆胎儿游离DNA中的应用进展情况进行综述.
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无创DNA检测技术在常州市产前筛查中的应用
目的 探讨无创DNA产前检查(NIPT)在胎儿染色体非整倍体疾病诊断中的应用价值.方法选取2 237例接受唐氏筛查的孕妇,对其外周血中游离胎儿DNA进行测序分析,阳性者进行羊水穿刺及染色体核型分析;阴性者行电话随访.结果 (1)无创DNA检测结果为阳性者共23例,包括21-三体15例、18-三体4例、13-三体1例,性染色体异常3例.(2)23例结果异常的孕妇,22例进行了羊水穿刺及染色体核型分析.结果显示无创DNA检测技术的检出率为100%,准确率86.4%.结论 NIPT对孕妇外周血中游离胎儿DNA的检测准确率达86.4%,其高准确性、无创伤性等优点将使其成为未来产前筛查的主力手段.
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高通量基因测序产前筛查技术(NIPT)在常州地区的临床应用经验总结
目的 探讨孕妇血浆中游离胎儿DNA高通量基因测序技术(NIPT)在常州地区产前筛查中的临床应用经验总结及推广.方法 选择2012年10月至2016年3月在常州市妇幼保健院产前诊断中心就诊的6505例单胎孕妇在知情同意的情况下抽取孕妇外周血10ml,4小时内分离血浆中游离DNA建立文库,采用Illumina Nextseq CN500测序平台对其进行测序分析,对测序结果进行生物信息分析,提示染色体异常患者再行羊膜腔穿刺,羊水细胞培养后染色体G显带核型分析.对确诊患者建议终止妊娠.结果 6505例检测样本中NIPT结果提示有97例胎儿染色体异常,其中81例孕妇自愿接受羊水穿刺.①胎儿常染色体非整倍体49例(T21 43例,T18 5例,T13 1例),羊水培养核型分析后发现:T21阳性预测值达95.1％,T18 4例确诊(4/5),T13 1例确诊(1／1);②32例性染色体非整倍体异常,其阳性预测值达53.1％,包括:14例45,XO高风险中仅确诊4例,假阳性10例;12例47,XXY高风险,进一步确诊发现8例,4例假阳性;后确诊2例47,XXX和2例47,XXY.结论 NIPT技术在唐氏综合征筛查上准确性高、假阳性率低;T18,T13样本少无统计学上意义.在性染色体数目筛查方面,结果准确性偏低,特别体现在Turner综合征,故对45,XO筛查结果在遗传咨询须谨慎处理.
关键词： 唐氏综合征 无创性产前诊断(NIPT) 胎儿游离DNA 性染色体异常 产前诊断 -
子痫前期早期诊断研究进展
子痫前期属于妊娠期高血压疾病,以高血压和蛋白尿为其主要症状,对母婴有很大伤害,因此加强孕妇早期监测,预测该病的发生发展,对减少并发症、降低母婴死亡率有重要的临床意义.大量研究表明子痫前期由遗传、表观遗传、母婴免疫不相容性等因素所致,如能发现这些病因的标志物,用于早期临床诊断,对于该病的治疗和保健具有重要意义.本文对子痫前期发病机制、相关的致病基因、相关分子标志物以及胎儿游离DNA 在该病早期诊断中的应用做一综述和展望.
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母血浆中胎儿游离DNA检测及非侵入性产前诊断的研究进展
通过母血浆中胎儿游离DNA检测获得胎儿信息,成为非侵入性产前诊断的研究热点.随着研究的不断深入,对母血浆中胎儿游离DNA生物学特性的认识日趋丰富.就其来源、片段长度分布及清除机制都有进一步发现,其生物学标记物也呈现多样性.从父源性的Y染色体特异序列的检测到表观遗传学方面的突破,使非侵入性产前诊断技术的应用范围不再局限于男胎也降低了诊断的假阴性率.此外,对其检测技术及方法理论日臻成熟,从传统的PCR实验方法到肽核酸、时间飞行质谱技术、QPCR、数字化PCR、大规模平行基因组测序,都为实现非侵入性产前诊断技术在临床的广泛应用奠定基础.现已利用母血浆中胎儿游离DNA开展研究或进行临床诊断的有胎儿性别鉴定、胎儿Rh基因检测、胎儿非整倍体检测、胎儿染色体片段异常的检测、妊娠相关疾病、单基因病等.本文回顾了母血浆中胎儿游离DNA的应用研究.
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孕妇血浆游离核酸高通量测序检测胎儿遗传异常
孕妇血浆中胎儿源性的游离DNA的发现,为无创产前检测(noninvasive prenatal testing,NIPT)奠定了科学基础.通过对孕妇外周血中的游离DNA进行检测,能够以无创的方式分析胎儿的遗传特征,为产前筛查(prenatal screening)和产前诊断(prenatal diagnosis)提供了有效的手段.新一代高通量测序技术(nextgeneration sequencing,NGS)的发展及其在临床的广泛应用,使其在孕妇血浆胎儿游离DNA检测中的应用成为必然趋势,并推动无创产前检测技术的迅猛发展.通过孕妇血浆游离DNA的高通量测序,可实现胎儿的染色体非整倍体、单基因遗传疾病、微缺失微重复的检测,也可以对胎儿基因组、DNA甲基化组以及转录组等信息进行分析.
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地中海贫血无创产前诊断策略新进展
地中海贫血是中国南方地区高发的单基因遗传病,携带率、发病率高,目前无根治手段,对患儿家庭带来沉重负担,目前首要预防措施是借助有创产前诊断方法取得胎儿组织并进行分子诊断,预防重型地中海贫血患儿出生.但羊水穿刺、绒毛活检等方法具有损伤胎儿风险,时间窗较窄.而无创产前诊断方法使用孕妇血浆游离DNA检测具有早期、精准、快速、无创、痛苦小等优势.随着无创产前检测技术应用于临床,单基因病无创产前诊断对于地中海贫血的防控具有重要意义.高通量测序是目前重要的无创产前检测技术平台,而数字PCR同为高通量的数字化定量工具,成本更加低廉,基于两种平台产生的诊断策略,对于多种单基因遗传病的无创产前诊断有启示意义.本文主要介绍高通量测序及数字PCR两种数字化定量平台及其相关无创产前诊断策略进展.
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胎儿游离DNA用于无创产前检测21、18、13三体综合征的临床研究
目的 探讨孕妇外周血中胎儿游离DNA在无创产前诊断21、18、13三体综合征的临床意义.方法 收集2012年1月至2013年12月在广州医科大学附属第二医院妊娠11～32周进行无创产前检测的单活胎孕妇433例,提取胎儿游离DNA,制备测序文库,应用大规模平行测序技术,获得胎儿患染色体三体综合征的风险,并将无创结果与核型分析及分娩结局进行分析.结果 433例无创产前检测孕妇中,胎儿游离DNA高风险9例,其中21三体6例,18三体1例,13三体1例,Turner综合征1例,均与羊水/脐血培养细胞染色体核型分析结果相符;成功随访374例,5例因非染色体原因终止妊娠,369例成功分娩,新生儿外貌及智力发育未发现明显异常,其中6例新生儿外周血细胞染色体核型分析与无创结果相符.结论 在孕妇中采用无创产前检测21、18、1 3三体综合征是可行的,可有效降低后续的侵入性产前诊断的数量,值得临床推广应用.
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新一代测序技术无创产前检测胎儿FGFR3基因突变
目的 探讨新一代测序技术(next-generation sequencing,NGS)无创产前筛查FGFR3相关疾病的可行性与准确率.方法 4例软骨发育不全、2例致死性侏儒Ⅰ型胎儿基因组DNA(gDNA)片段化后,以相应母体产后血浆游离DNA为背景,按照10%、6%、3%、1%、0.5%的浓度进行稀释,形成30例阳性模拟样本,建立孕妇血浆游离DNA模型,同时采集13例阴性对照孕妇血浆游离DNA,运用NGS技术分别检测FGFR3致病突变位点,计算检测灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值.结果 30例模拟样本中,胎儿gDNA浓度为10%、6%、3%、1%、0.5%时,突变检出例数分别为6/6、6/6、6/6、3/6、1/6,13例阴性突变检出例数为0/13;胎儿gDNA浓度≥3%时,NGS的灵敏度为100%(95%CI:81.5%~100%),特异度为100%(95%CI:75.3%~100%),阳性预测值为100%(95%CI:81.5%~100%),阴性预测值为100%(95%CI:75.3%~100%).结论 胎儿gDNA浓度≥3%时,NGS可以在孕妇血浆游离DNA模型中准确检出胎儿FGFR3基因突变,提示基于NGS技术的无创产前检测在新发突变或父源遗传疾病的产前诊断领域具有一定的应用前景.
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无创胎儿游离DNA检测技术在产前胎儿非整倍体筛查中的应用评价
目的：探讨无创胎儿染色体非整倍体检测技术（non-invasive fetal trisomy test, NIFTY）在胎儿染色体非整倍体产前筛查应用中的特异性和灵敏度。方法利用新一代高通量并行测序技术对母体外周血中的胎儿游离DNA（cell-free DNA, cfDNA）进行定量分析，根据相应DNA含量的变化推断胎儿染色体的异常状况。结果2012年3月至2013年5月，检测孕12~24周的孕妇外周血标本，对233份已结束妊娠的孕妇数据进行分析评估。其中结果为染色体非整倍体高风险11例，低风险结果222例。在高风险病例中21三体5例；18三体3例；13三体1例；性染色体X0异常2例。所有高风险结果经细胞遗传学检测后确认与母血胎儿cfDNA检测结果一致，检测特异性100.0%。筛查低风险结果222例，均已分娩，临床证实为正常婴儿，检测灵敏度100.0%。结论无创胎儿游离DNA检测是一种很好的胎儿非整倍体异常的产前筛查技术。相对于目前普遍采用的孕早期或孕中期血清学产前筛查技术，胎儿cfDNA检测更加可靠，无创性的取样过程对孕妇和胎儿无损伤，具有更好的敏感度和特异性。
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无创基因检测在胎儿染色体非整倍体诊断中的应用
目的 评价无创基因检测在胎儿染色体非整倍体诊断中的临床应用价值.方法 选取253例高龄孕妇,在知情同意的原则下采集外周血血浆,对其血浆中胎儿游离DNA进行检测;并与实验孕妇的羊水染色体核型分析结果进行比对验证.结果 本试验对253例样本进行了孕妇血浆胎儿游离DNA检测,检出21-三体阳性病例3例,检出18-三体阳性病例1例,与染色体核型分析的结果一致.结论 无创基因检测可以用于胎儿染色体拷贝数异常的检测,具有无创、灵敏度高、特异性强等优点,在胎儿染色体拷贝数异常疾病的产前检测中具有临床实际应用的价值.
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孕妇外周血胎儿游离DNA应用于β地中海贫血产前诊断
目的：探讨孕妇外周血胎儿游离DNA在β地中海贫血产前诊断中的应用情况。方法选取2011年3月～2013年3月到妇产科进行产前诊断的妊娠妇女中选取28例作为研究对象，并对妊娠妇女采取常规的基因诊断以及胎儿游离DNA检测。结果穿刺诊断结果显示，正常例数为9例，杂合子例数为12例，双重杂合子例数为7例；胎儿游离DNA检测结果显示，IVS-Ⅱ-654突变基因的携带者共有11例，检测结果为阴性的例数共有16例，实验失败的有1例。结论在产前诊断中应用胎儿游离DNA检测β地中海贫血是可行的，然而母源性的游离DNA会对检测结果有所影响。
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孕母外周血中胎儿游离DNA的检测在产前诊断唐氏综合征的应用
目的 探索从孕妇外周血浆中检测胎儿游离DNA(cffDNA)在产前诊断唐氏综合征中的价值.方法 选择定期产前检查2 800例孕妇中唐氏筛查结果高风险的孕妇96例,抽羊水检查前抽孕母血提取胎儿游离DNA,然后进行PCR得到测序用的文库,在Hiseq2000的平台上进行测序,对测序的数据进行统计学分析,得出胎儿患病风险.其结果与羊水检查的胎儿染色体核型结果对照.结果 96例唐氏筛查高风险的孕妇中,3例高风险,高风险率为3/96=3.125％,3例高风险孕妇与羊穿结果符合率100％.结论 该检测方法准确度高,96.875％唐氏筛查高风险的孕妇可以通过该检测方法被排除,避免了这些孕妇进行羊水穿刺的风险.
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孕妇外周血中胎儿游离DNA在产科中的应用
检测孕妇外周血中胎儿游离DNA，为无创产前诊断及妊娠相关性疾病的防治找到了新途径，此种技术具有诸多优势。孕妇外周血中胎儿游离DNA测序可用于胎儿非整倍体疾病、胎儿单基因遗传病、胎儿血型的检测、胎儿性连锁疾病的产前诊断筛查；胎儿游离 DNA 水平的变化可作为一种新的生物指标为妊娠相关性疾病的诊断及治疗提供帮助。随着分子生物学技术的不断发展，对孕妇外周血中胎儿游离DNA的研究将更加深入。
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胎盘植入的血清学诊断进展
胎盘植入是由于子宫底蜕膜发育不良或无蜕膜而使胎盘绒毛侵入或穿透子宫肌层所致的一种异常胎盘种植情况,包括胎盘粘连、植入性胎盘以及穿透性胎盘[1].剖宫产史是胎盘植入重要的危险因素,Clark和Silver[2]研究显示胎盘植入的发生率与剖宫产次数成正相关,无剖宫产史孕妇胎盘植入患病率为0.24％,而有3次、4次甚至5次剖宫产史的孕妇胎盘植入患病率明显升高,分别为0.57％、2.13％、2.33％;其他子宫手术史(如子宫肌瘤切除术、刮宫术等)导致的子宫内膜损伤也与胎盘植入发生相关;而高龄孕妇及前置胎盘是胎盘植入的2个独立危险因素.
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唐氏综合征无创性产前诊断技术的研究进展
唐氏综合征(Down's syndrome,DS)即21-三体综合征,是常见的一种由常染色体数目异常引起的先天性畸形,是导致先天性智力障碍的重要原因之一,在活产新生儿中发病率为1/600～1/800.由于DS目前缺乏有效的治疗方法,患儿智力发育异常迟缓,同时合并多种畸形,生活自理能力极差,给家庭和社会造成了沉重的负担.积极有效可行的方法是采取出生缺陷干预措施,提高出生人口的素质.
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应用母血中胎儿游离DNA进行无创产前诊断的研究进展
有创性产前诊断是诊断染色体病的金标准，但是不能广泛应用于所有孕妇；孕妇血中胎儿游离DNA的发现为无创性产前诊断提供了广阔前景，借助大规模并行基因组测序技术，建立起无创产前诊断染色体非整倍体的新方法。就胎儿游离DNA的来源、应用胎儿游离DNA进行非整倍体和基因产前诊断进行综述。
关键词： 胎儿游离DNA 无创产前诊断 大规模并行基因组测序 非整倍体 -
无创产前诊断单基因遗传病的研究进展
基于母体血浆中胎儿游离DNA(cffDNA)无创产前诊断(NIPD)某些单基因遗传病已用于临床,而且检测病种越来越多.NIPD为高危妊娠夫妇提供了更安全的检测方法,避免了有创产前诊断带来的流产、死胎等风险.在一些国家已经应用NIPD方法诊断一些单基因遗传病,而且不需要通过有创产前诊断进行验证.本文主要对NIPD的研究进展及其面临的挑战做一综述.
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早孕妇女血浆中胎儿游离DNA的检测
目的:建立一种检测早孕妇女血浆中胎儿游离DNA的新方法.方法:从50例妊娠7、8、9周的孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测其中的Y性别决定区(SRY)基因.结果:38例早孕孕男胎妇女中32例血浆中出现SRY基因,灵敏度84.21%;12例早孕孕女胎的妇女血浆中均未出现SRY基因,特异度100%.结论:用实时荧光定量PCR技术可用来检测早孕妇女血浆中的胎儿游离DNA,这对无创性早期产前基因诊断方法的建立具有重大意义.
关键词： 实时荧光定量聚合酶链反应 胎儿游离DNA 母体血浆 Y性别决定区基因
