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孕酮对培养人子宫内膜腺上皮细胞HOXA11基因表达的影响
目的研究孕激素对人子宫内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响,初步探讨其影响机制. 方法 6例增殖期子宫内膜腺上皮细胞进行原代培养,在细胞生长汇合时,分别加入孕酮或孕酮+17β-雌二醇;米非司酮(RU486)预处理后加入孕酮或孕酮+17β-雌二醇培养4、6、8 d,提取细胞总RNA.用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HOXA11基因表达量. 结果在原代培养的人子宫内膜腺上皮细胞中加入孕酮或孕酮+17β-雌二醇,第4天时HOXA11基因表达量增加,第6天达高峰,第8天时有所下降;孕酮+雌激素的作用无叠加效应;经RU 486预处理后,上述作用消失. 结论孕酮对原代培养的人子宫内膜腺上皮细胞HOXA11基因的表达具有正调控作用,这种作用由孕酮受体介导.
关键词： 孕酮 米非司酮 HOXA11基因 子宫内膜腺上皮 半定量逆转录聚合酶链反应 -
HOXA11和ER、PR在输卵管及异位妊娠输卵管黏膜上皮中的表达
[目的]探讨HOXA11在异位妊娠输卵管中的作用,以及与ER、PR的关系.[方法]采用免疫组化方法检测34例正常输卵管和36例异位妊娠输卵管黏膜上皮中HOXA11和ER、PR的表达.[结果]HOXA11在异位妊娠输卵管黏膜上皮中表达高,在正常增生期和分泌期输卵管黏膜上皮中表达明显下降(P＜0.05);ER、PR在正常增生期和分泌期输卵管黏膜上皮中表达较高,在异位妊娠输卵管黏膜上皮中表达明显下降(P＜0.05).[结论]HOXA11在输卵管黏膜上皮中表达增强和ER、PR表达下降可能与输卵管异位妊娠相关;在正常分泌期输卵管黏膜上皮中,HOXA11表达下调和ER、PR表达水平上调可能起着屏障作用,防止输卵管着床的发生.
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小鼠pEGFP-Hoxa11真核表达载体的构建及表达
目的 构建和鉴定Hoxa11和EGFP双基因共表达真核载体.方法 采用DNA重组技术,将目的 基因Hoxa11克隆至含有报告基因EGFP的pEGFP-N1真核表达载体中,构建的真核表达载体pEGFP-Hoxa11经PCR,双酶切及基因测序鉴定;转染至CHO细胞,荧光显微镜下观察重组质粒的表达,提取细胞蛋白Western印迹检测蛋白表达.结果 pEGFP-Hoxa11重组质粒构建成功.构建的真核表达载体pEGFP-Hoxa11能在CHO细胞中有效表达.结论 成功构建了共表达Hoxa11和EGFP的真核表达载体,并能在CHO细胞中有效表达.为进一步研究Hoxa11的功能提供实验基础.
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月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达的差异
目的:探讨HOXA11在月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞中的表达规律及其生理意义.方法:免疫组织化学方法观察38例子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11蛋白质的表达;用细胞分离筛选法,分离出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,采用半定量RT-PCR和Dot-blot方法分别观察HOXA11在腺上皮和基质细胞中的表达.结果:腺上皮细胞HOXA11在分泌中晚期表达量较增生期和分泌早期显著降低;基质细胞HOXA11的表达从增生期到分泌期逐渐增加,以分泌中晚期表达量高.结论:内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达在分泌中晚期变化显著,而且其表达量呈反相变化,即腺上皮表达量下降,基质细胞表达量增加.提示HOXA11基因与着床期子宫内膜的分化、成熟密切相关;其对内膜腺上皮和基质细胞的调控机制可能不尽相同.
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左旋18-甲基炔诺酮和米非司酮对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响
目的:通过口服孕激素类(左旋18-甲基炔诺酮,Levenorgestrel,LNG)和抗孕激素类(米非司酮,RU486)避孕药,研究孕激素对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响.方法:30名自愿者,于正常月经周期排卵后d 7,刮取内膜组织做自身对照;实验周期在排卵前或排卵后2 d,口服小剂量LNG(18例)或RU486(12例),同样在排卵后d 7刮取内膜组织.用原位杂交方法检测服药子宫内膜HOXA11基因表达的变化.结果:对照组(分泌中期)内膜,间质细胞普遍表达HOXA11mRNA,而腺上皮HOXA11的表达则呈弱阳性或阴性.口服LNG后,子宫内膜形态变化不明显;内膜腺上皮HOXA11表达量进一步下降或无明显变化(即用药前后均表达阴性);间质细胞HOXA11表达增强.服用Ru486后,内膜发育明显延迟,腺上皮HOXA11表达强度普遍大于对照组,而间质细胞的表达变化无明显规律.结论:孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的表达起负调控作用;正常分泌中期,内膜腺上皮HOXA11表达减弱或消失是内膜分化成熟的标志.
关键词： 左旋18-甲基炔诺酮 米非司酮 HOXA11基因 原位杂交 子宫内膜 -
孕激素及间质细胞培养液对原代培养内膜腺上皮HOXA11基因表达的影响
目的:探讨间质细胞是否参与了孕激素对子宫内膜腺上皮的调控,及其初步的作用机制.方法:将增生期子宫内膜间质细胞经激素处理后进行培养,提取培养液.用浓度为30%的提取培养液对腺上皮细胞进行原代培养,当细胞生长融合时,加入孕酮或孕雌激素培养4 h、24 h.提取细胞总RNA,用半定量RT-PCR方法检测腺上皮细胞HOXA11基因表达量.结果:当内膜腺上皮细胞中含有30%经孕激素处理的间质细胞培养液时,加入孕激素或孕、雌激素后其HOXA11基因,在培养4 h时表达量有下降趋势;24 h时,表达量下降明显;而用RU486预处理后再加入孕激素或雌孕激素,腺上皮细胞HOXA11基因表达量与对照组无差异;当上皮细胞中含有30%经RU486预处理后,再加入孕激素处理的间质细胞培养液时,孕激素或孕、雌激素对内膜腺上皮HOXA11表达的负调控作用在4 h时消失;24 h时,转为正调控(HOXA11基因表达量增加).结论:孕激素对内膜腺上皮HOXA11基因的负调控作用需要间质细胞分泌的孕激素依赖因子的参与,而且由间质细胞和内膜腺上皮中的孕激素受体共同介导完成这一负调控作用.
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HOXA10和HOXA11在子宫内膜异位症组织中的表达及相关性分析
目的 探讨HOXA10和HOXM1基因在子宫内膜异位症患者异位内膜和在位内膜中的表达及二者之间的相关性.方法 采用半定量RT-PCR反应和免疫组化SP法检测异位内膜60份、在位内膜25份和正常内膜35份中HOXA10和HOXA11基因的mRNA和蛋白表达情况.结果 异位内膜中HOXA10mRNA表达明显低于在位组和对照组,差异极显著(P＜0.01);异位组HOXA 11 mRNA表达显著低于在位组和对照组(P＜0.05);异位组HOXA10蛋白表达显著低于在位组和对照组(P＜0.05):异位组HOXA11蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05);而在位组HOXA11的表达也低于对照组,显著性差异(P＜0.05),同异位组差异不显著.结论 HOXA10与HOXA11在内异症患者的子宫内膜中均低表达,而且呈正相关.HOXA10在子宫内膜的重塑中发挥作用,HOXA11会调节子宫内膜细胞外基质成分的改变.二者在内异症的发生发展起着相互协同的作用.
