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益肾达络饮对EAE小鼠NgR、Gap-43表达的影响
目的:运用形态学检测技术,探讨益肾达络饮对EAE小鼠中枢神经损伤后神经再生的作用.方法:采用免疫组化方法测定各组小鼠脑组织中NgR、Gap-43的含量,旨在了解NgR在EAE发生后的作用和益肾达络饮对神经再生的作用情况.结果:NgR表达正常组和中药组差异有统计学意义(P＜0.05),与其余组差异有极显著统计学意义(P值均＜0.01)；模型组和激素组、中药组均差异有极显著统计学意义(P值均＜0.01)；激素组和中药组差异无统计学意义,提示模型组神经再生受抑制程度明显；Gap-43表达在正常组和模型组差异无统计学意义,正常组和激素组、中药组差异有极显著统计学意义(P值均＜0.01)；模型组和中药组、激素组差异有极显著统计学意义(P值＜0.01)；激素组和中药组差异有极显著统计学意义(P值＜0.01).结论:益肾达络饮有一定程度促进轴突再生的作用且优于激素组.
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脊髓损伤大鼠NogoA、NgR mRNA和蛋白的时相表达及电针治疗时间窗
目的 探讨影响脊髓损伤轴突生长的NogoA、NgR时相表达及电针治疗脊髓损伤的时间窗效应.方法 144只Sprague-Dawley雌性大鼠随机分成假手术组(A组,n=48)和造模组(n=96).造模组大鼠采用改良Al-len法制作脊髓损伤大鼠模型,随机分为模型组(B组,n=48)和电针组(C组,n=48).C组电针大椎、腰阳关及双侧次髎、足三里,选择疏密波,持续20 min,每天1次.分别在造模后1 d、7 d、14 d介入电针治疗,每个介入治疗点大鼠随机再分成2个亚组,分别持续治疗7 d和14 d.A组于术后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d,B组和C组于造模后在相应时间点处死大鼠提取脊髓组织,所有大鼠处死前进行BBB评分.各组每个时间点随机选取4份样本,应用逆转录实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blotting检测损伤脊髓不同时间段NogoA、NgR mRNA和蛋白的表达.结果 B组术后14 d BBB评分开始有所提高,直至28 d,评分较术后1 d、3 d、7 d提高(P<0.05).C组术后1 d介入治疗7 d,术后7 d、14 d介入治疗7 d和14 d,大鼠BBB评分较相应时间点B组均提高(P<0.05);术后7 d和14 d介入治疗的评分要高于术后1 d介入的评分(P<0.05);不同时间点介入电针治疗7 d与治疗14 d评分比较无显著性差异(P>0.05).B组NogoA、NgR mRNA和蛋白在造模后呈逐渐升高趋势,21 d达到高峰;不同时间点,B组NogoA、NgR mRNA和蛋白表达均明显高于A组(P<0.01).C组电针介入治疗后,除术后1 d介入治疗7 d的NogoA mRNA (P>0.05)表达外,其他时间点NogoA mRNA和蛋白的表达较相应时间点的模型组均下降(P<0.05);术后14 d介入治疗NogoA、NgR mRNA和蛋白的表达大多要低于术后1 d介入治疗(P<0.05);术后14 d介入治疗与术后7 d介入治疗以及术后7 d介入治疗与术后1 d介入治疗之间比较,NogoA、NgR mRNA和蛋白的表达都无显著性差异(P>0.05);术后不同时间点介入电针治疗7 d与14 d NogoA、NgR mRNA和蛋白表达之间无显著性差异(P>0.05).结论 电针能改善脊髓损伤大鼠后肢运动功能,可能与电针抑制脊髓损伤后NogoA、NgR mRNA和蛋白的表达有关;且电针早期介入治疗有效,恢复期介入治疗效果更佳.
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运动训练对脑梗死大鼠运动功能及Nogo-A/NgR1/Rho-A表达的影响
目的:明确运动训练对脑梗死大鼠运动功能的改善及神经修复的影响,探讨轴突生长有关因子Nogo-A/NgR1/Rho-A通路在其中的作用机制.方法:采用电凝法建立肾血管性高血压大鼠的右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,随机分为3组:假手术组、运动训练组、对照组；各组分别在造模后7d、14d、28d和52d进行大鼠前肢抓握力评定,并取材进行尼氏染色观察形态学变化,Western blot检测Nogo-A、NgR、Rho-A蛋白表达.结果:梗死后7d、14d、28d及52d四个时间点,训练组较对照组大鼠抓握力改善(P＜0.05)；梗死后7d开始,梗死周围皮质神经元逐渐减少,各时间点训练组较对照组存活神经元增多(P＜0.05)；通过Western blot检测,运动训练7d和14d可降低Nogo-A的表达,运动训练7d、14d和28d可降低受体NgR的表达,运动训练14d和28d使下游信号分子Rho-A蛋白的表达减少,和对照组相比,差异均有显著性意义(P＜0.05).结论:运动训练可促进脑梗死大鼠肢体运动功能的改善,对受损的神经系统具有一定的保护作用,并通过下调Nogo-A/NgR/Rho-A蛋白水平减少其对神经轴突的抑制.
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电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆功能及海马组织Nogo-A/NgR表达的影响
目的:观察电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆功能及海马组织Nogo-A/NgR表达的影响,探讨电针治疗脑卒中后认知功能障碍的作用机制.方法:将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组均15只.模型组和电针组参照Longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.电针组针刺“百会穴”和“神庭穴”,共干预7天;假手术组和模型组在同等条件下饲养和抓取.利用Morris水迷宫实验评估大鼠的学习记忆功能;TTC染色法观察脑梗死体积;免疫印迹法检测脑梗死侧海马组织Nogo-A及其受体NgR的表达.结果:与模型组相比,电针组大鼠逃避潜伏期和找到平台所经过的路程缩短,跨越平台次数增加(P＜0.05);电针组大鼠脑梗死体积减小(P＜0.05);电针组大鼠海马区Nogo-A及其受体NgR的表达量降低(P＜0.05).结论:电针可改善脑缺血再灌注大鼠的学习记忆功能,其作用机制可能与抑制脑梗死侧海马组织中Nogo-A及其受体NgR的表达有关.
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定量检测神经生长抑制因子及受体在脑梗死大鼠脑组织中的表达
目的 观察神经生长抑制因子(Nogo-A)及其受体(NgR)在脑梗死大鼠不同时间点表达的变化规律. 方法 将80只SD大鼠制成易脑卒中型肾血管性高血压大鼠模型后,随机分为脑梗死组和对照组(各40只),脑梗死组大鼠施行右侧大脑中动脉闭塞术,用免疫组织化学法和荧光定量RT-PCR法检测术后第1、2、4和8周脑梗死灶周围Nogo-A及NgR mRNA表达的变化规律. 结果 免疫组织化学显示脑梗死组Nogo-A和NgR含量在病灶周围先呈逐渐上升趋势,第4周达到高峰,较对照组显著升高(P＜0.05),Nogo-A在第8周降低,与对照组无显著性差异(P＞0.05);而NgR略微下降,但仍高于对照组(P＜0.01).荧光定量RT-PCR显示脑梗死组Nogo-A与NgR mRNA表达均先上升,在第4周达到高峰,与对照组差异有显著性意义(P＜0.01),第8周Nogo-A mRNA表达下降仍高于时照组(P＜0.01);NgR mRNA表达在第8周时与对照组无显著性差异(P＞0.05). 结论 脑梗死损伤可使梗死灶周围组织中Nogo-A及NgR表达增加,可能与脑梗死后神经再生障碍有关.
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纳米载体介导的人端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用及端粒酶表达的影响
目的 探讨纳米载体介导的人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因反义寡核苷酸(ASODN)在体内外对食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用及端粒酶表达的影响.方法 制备线型聚乙烯亚胺(L-PEI)/ASODN纳米级复合物及NGR修饰的L-PEI/ASODN靶向纳米复合物,转染人食管癌细胞系EC9706.采用激光共聚焦显微镜观察细胞对纳米复合物的摄入情况,通过二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞抑制率,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法分别检测hTERT mRNA和蛋白的表达情况,Annexin V-FITC/PI双标法检测凋亡细胞.通过体内药物分布实验和抑瘤实验观察NGR的靶向肿瘤细胞作用、裸鼠移植瘤的生长情况、组织形态学和超微形态学改变.结果 共聚焦显微镜观察可见,L-PEI可以保护hTERT ASODN有效进入细胞核内;N/P=10、ASODN终浓度40 μg/ml的L-PEI/ASODN复合物转染细胞后24、48、72和96 h,增殖抑制率分别为45.6%、55.8%、67.0%和83.1%;L-PEI/ASODN转染组hTERT mRNA水平明显降低,hTERT条带与内对照条带灰度值的比值为0.27±0.04,与空白对照组、ASODN转染组和L-PEI/SODN转染组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05),hTERT蛋白不表达;转染48 h后,L-PEI/ASODN转染组细胞凋亡明显,早期凋亡率和晚期凋亡率分别为38.0%和52.2%.NGR修饰的L-PEI/ASODN-FAM纳米复合物注射于荷瘤小鼠,其靶向肿瘤作用明显;给药8 d后,NGR/L-PEI/ASODN静脉给药组和皮下给药组的肿瘤体积均明显小于生理盐水组和NGR/L-PEI/SODN组(均P＜0.05);超微结构观察可见典型凋亡小体.结论 NGR修饰、L-PEI介导下的hTERT ASODN可抑制EC9706细胞的增殖,降低其端粒酶的表达,还可有效到达裸鼠人食管癌移植瘤内,抑制肿瘤的生长.
关键词： 聚乙烯亚胺 端粒酶逆转录酶 反义寡核苷酸 NgR 食管癌细胞系EC9706 -
化学合成siRNA抑制原代皮层神经元NgR的表达
目的 筛选能有效抑制神经元NgR表达的siRNA序列.方法 根据siRNA靶序列设计原则,设计并化学合成针对大鼠NgR基因编码区的siRNA三对,并以一对无关序列的寡核苷酸作为阴性对照.原代培养的大鼠皮层神经元分为5组:siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组、无关序列组、非转染组,用阳离子脂质体TransMessenger Transfection Reagent转染.转染后48h行RT-PCR和免疫细胞化学检测NgR表达水平的变化.结果 转染48h后,与序列2、3和无关序列转染以及未转染的细胞相比,序列1转染的神经元NgR mRNA水平明显下降,并且其NgR抗体免疫荧光染色的荧光强度也明显减弱.结论 化学合成siRNA能有效地抑制原代皮层神经元NgR的表达.
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siRNA抑制神经元NgR mRNA的时效关系和毒性研究
目的 了解化学合成小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对原代培养神经元Nogo受体(Nogo receptor,NgR)mRNA作用的时效关系和毒性作用.方法 化学合成一段针对大鼠NgR基因编码区的siRNA,用阳离子脂质体转染大鼠皮层神经元.分别于转染前、转染后24h、48h、72h、96h行RT-PCR检测NgR mRNA水平.碘化丙啶(PI)染色检测转染后各时间点神经细胞的存活情况.结果 转染siRNA后24h和48h NgR mRNA水平明显下降,到72h明显回升,转染后96h NgRmRNA水平与转染前差异无统计学意义.PI染色显示转染后24h和48h,用脂质体转染的细胞(包括转染siRNA、无关序列Oligo和单纯脂质体组)其PI阳性率与非转染对照组无统计学意义,而转染后72h和96h两者差异有统计学意义,但在各时间点,脂质体转染的各组间PI阳性率差异无统计学意义.结论 化学合成siRNA能有效促进原代皮层神经元的NgR mRNA降解,并于短期内维持于低水平.该段siRNA转染的毒性作用主要来自于转染试剂,与序列本身无明确关系.
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NGR和RGD配体修饰脂质体对人脐静脉内皮细胞靶向效果的比较
肿瘤新生血管内皮细胞特异性高表达一些能被某些配体识别的蛋白质.本文以阿霉素脂质体为载体,在体外细胞水平上比较研究了多肽RGD和NGR对于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的靶向效果.本研究制备了阿霉素立体稳定脂质体(doxorubicin-loaded sterically stabilized liposomes,SSL-DOX).RGD(arginine-glycine-aspartic acid)或NGR(asparagine-glycine-arginine)修饰的立体稳定脂质体(RGD-SSL-DOX或NGR-SSL-DOX),并对其粒径、Zeta电位、包封率和释放等性质进行了研究.通过针对HUVEC细胞的流式细胞术、激光共聚集显微技术以及SRB测定在体外水平上研究两个多肽对于肿瘤血管内皮细胞的靶向效果.本研究中制备的脂质体包封率达到98%以上,粒径约65-75 nm,表面带弱的负电荷.体外释放实验证明RGD或NGR的修饰没有改变脂质体的释放行为.流式细胞实验中,SSL-DOX,NGR-SSL-DOX,RGD-SSL-DOX和阿霉素溶液中阿霉素被HUVEC摄取的顺序为:阿霉素溶液>RGD-SSL-DOX>NGR-SSL-DOX>SSL-DOX,配体修饰脂质体中的阿霉素进入细胞后分布在细胞核和细胞质内,而SSL-DOX内的药物仅分布在细胞核中.SRB实验中各制剂的细胞毒顺序与摄取实验中的顺序相同.脂质体的性质表征研究说明脂质体表面的配体修饰没有影响立体稳定脂质体的各项性质.由于配体介导的内吞作用,相对未经修饰的脂质体,配体修饰脂质体处理的HUVEC摄取的阿霉素有所增多,并KRGD-SSL-DOX的靶向效果强于NGR-SSL-DOX.
关键词： NgR RGD 人脐静脉内皮细胞:脂质体 -
NGR-单壁碳纳米管-紫杉醇复合物的制备及其靶向性研究
目的 探讨NGR-单壁碳纳米管-紫杉醇复合物的佳制备方法及其靶向性.方法 溶液共混法制备单壁碳纳米管-紫杉醇,将其连接NGR构建NGR-单壁碳纳米管-紫杉醇载药系统,并对其进行表征.考察单壁碳纳米管-紫杉醇制备中表面活性剂的种类、探头超声次数、碳纳米管的量等因素对载药量和包封率的影响.以S180荷瘤小鼠为模型,分别静注NGR-单壁碳纳米管-紫杉醇,单壁碳纳米管-紫杉醇和紫杉醇,采用高效液相色谱法测定小鼠脾、心、肝、肺、肾、肿瘤各组织的药物浓度,用靶向效率(TE)评价制剂的靶向性.结果 碳纳米管-紫杉醇为1∶2;表面活性剂Poloxamer188和苯丙氨酸以7∶3混合;选择功率600 W,超声15次为探头超声条件制得单壁碳纳米管-紫杉醇,与NGR反应得到NGR-单壁碳纳米管-紫杉醇复合物,其包封率为(83.9±2.7)％,载药量为(69.3±1.5)％,Zeta电位为(-22.6±1.5)mV,平均粒径为(182.1±2.4) nm.在小鼠脾、肝、肺和肿瘤组织中NGR-单壁碳纳米管-紫杉醇和单壁碳纳米管-紫杉醇的AUC显著大于紫杉醇组(P＜0.05,P＜0.01).在小鼠脾、肝、肺组织中单壁碳纳米管-紫杉醇和NGR-单壁碳纳米管-紫杉醇的靶向效率无明显差别,在心、肾组织中的靶向效率有所下降(P＜0.05),在肿瘤中靶向效率分别为6.78％和21.33％,差异显著(P＜0.01).结论 优化条件制备的NGR-单壁碳纳米管-紫杉醇复合物制备工艺和储存稳定性好,载药量和包封率高,且能显著提高紫杉醇的肿瘤靶向性.
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Nogo-A及其受体NgR的研究进展
中枢神经系统的神经元是一群高度分化的细胞,其损伤后修复与再生是非常困难和复杂的.Nogo是近研究发现的在中枢神经系统损伤后具有再生抑制作用的因子.Nogo基因的表达产物有3种:Nogo-A、Nogo-B、Nogo-C,其中,Nogo-A的抑制作用越来越受到研究者的重视,成为当前神经再生研究领域的热点.现就Nogo-A及其受体的结构、分布、作用机制及有关新研究进展做一简单综述.
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以NgR为靶点治疗视神经损伤的研究进展
视神经损伤是临床常见的眼外伤.视神经作为中枢神经系统的一部分.其损伤后轴突再生困难,是临床疾病治疗的难点.NgR是在中枢神经系统损伤后具有再生抑制作用的因子,其在髓磷脂抑制轴突再生信号转导过程中有特殊的靶分子效应.NgR的发现为视神经损伤后轴突再生治疗提供了有益的启示.本文就NgR的结构、功能信号及治疗视神经损伤的新研究进展予以综述.
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Nogo-A及NgR在脑外伤大鼠脑组织中的表达
目的 研究中枢神经系统损伤后Nogo-A及其受体NgR在颅脑外伤大鼠脑组织中的表达变化.方法 本课题采用SPF级SD大鼠100只,分为空白对照组(n=10)、假手术组(n=10)和损伤组(n=80).对实验损伤组大鼠采用Feeney等自由落体撞击法制成急性中型脑外伤模型,损伤组随机分为1 d(n=16)、3 d(n=16)、5 d(n=16)、7 d(n=16)和10 d(n=16)5个组.用免疫组织化学的方法测定测量各组各时间点脑切片Nogo-A及NgR蛋白的表达.结果 颅脑创伤后1 d时创伤灶边缘脑组织中Nogo-A表达显著升高,伤后3 d Nogo-A表达有所下降,但仍高于假手术组(P<0.05),到伤后7 d Nogo-A表达又上升达到高峰,直至伤10 d,Nogo-A表达仍维持在较高的水平.创伤组Nogo-A表达均显著高于假手术组(P<0.05).颅脑创伤后1天时创伤灶边缘脑组织中NgR呈基础表达,与假手术组比较差别无统计学意义(P>0.05).创伤后3 d NgR表达较假手术组明显升高(P<0.05),在伤后7 d达到高峰值,直至伤后10 d NgR表达仍处于峰值.结论 颅脑创伤后Nogo-A呈双峰的表达规律,Nogo-A在创伤后急性期可能参与颅脑创伤的急性病理过程,在创伤修复期发挥抑制神经再生的作用,为开辟颅脑创伤救治的新方法提供依据.NgR在颅脑创伤的恢复期显著升高,峰值持续时间长,NgR介导颅脑创伤后神经再生的抑制,阻碍神经功能的恢复,为探寻颅脑创伤后神经功能恢复的治疗方法指出新的方向,提供实验依据.
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内皮祖细胞对背根神经节细胞突起及Nogo-A和NgR表达的影响
目的:观察大鼠内皮祖细胞(EPCs)对乳鼠背根神经节(DRG)细胞突起影响,通过Nogo-A和NgR表达变化探究其可能机制.方法:培养DRG和制备EPCs后分别鉴定,实验组DRG和EPCs共培养,对照组2份等量的DRG共培养.第2和4日分别计算两组DRG突起数量、突起长和平均长度,统计两组DRG细胞纯度和活性,检测Nogo-A和NgR及mRNA表达.结果:实验组DRG细胞突起数量、突起长和平均长度在共培养第2和4日较对照组均明显增长(P＜0.05),实验组DRG细胞纯度和活性均高于对照组(P＜0.05),实验组Nogo-A和NgR mRNA表达量在共培养第2和4日均显著降低(P＜0.05),Western blot结果示实验组Nogo-A和NgR蛋白表达量在第2和4日明显低于对照组(P＜0.05).结论:EPCs通过介导Nogo-A和NgR表达下调,促进DRG细胞突起生长.
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高压氧预处理对老龄大鼠全脑缺血再灌注损伤时脑皮质Nogo mRNA、Nogo-A及NgR蛋白表达的影响
目的 研究高压氧预处理对老龄大鼠全脑缺血再灌注损伤时Nogo mRNA、Nogo-A及NgR蛋白表达的影响,探讨其改善认知功能的可能机制.方法 雄性SD大鼠42只,月龄14月,随机分为4组:对照组(C组,n=6)、高压氧组(H组,n=12)、脑缺血再灌注损伤组(I/R组,n=12)和高压氧预处理组(HOP组,n=12).H组和HOP组每天置于高压氧舱内1h,氧压为0.2 MPa,连续5 d,后1次高压氧处理后24 h时I/R组和HOP组采用改良Pulsinelli四血管闭塞法制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,全脑缺血10 min.再灌注24 h时H组、I/R组和HOP组随机取6只大鼠断头取脑,分离大脑皮质,采用实时荧光定量PCR法检测Nogo mRNA的表达水平,Western blot法检测Nogo-A及NgR蛋白的表达水平.余大鼠自由喂养5 d后采用Morris水迷宫实验测定认知功能.结果 与C组比较,I/R组和HOP组认知功能降低,Nogo mRNA及Nogo-A蛋白表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,H组和HOP组认知功能提高,Nogo mRNA及Nogo-A蛋白表达下调(P＜0.05).各组NgR蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高压氧预处理通过抑制脑皮质Nogo mRNA及Nogo-A蛋白表达上调,改善老龄大鼠全脑缺血再灌注损伤时的认知功能.
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大鼠脑出血模型脑组织NgR的表达形式
目的:观察大鼠脑出血后不同时间点脑组织NgR(Nogo-66 Receptor)的表达情况.方法:大鼠断尾取血100μL,分3次注入大脑尾状核,分别于手术后6h、24h、48h、72h和7d处死动物.采用免疫组织化学方法检测脑组织NgR的表达变化.结果:与假手术组相比较,脑出血后6h,NgR表达增高(P<0.01),72h达到高峰(P<0.01),7d后降低但仍然高于假手术组(P<0.01).结论:NgR的上调是脑出血的重要特征之一,并且在脑组织的病理损害过程中起着重要作用.
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血塞通注射液对局灶性脑梗死大鼠NgR mRNA及蛋白表达的影响
目的:观察血塞通注射液在不同时点对局灶性脑梗死大鼠Nogo-A受体(NgR)蛋白及mRNA表达的影响,揭示血塞通注射液对脑缺血受损神经元的重塑作用机制.方法:采用改良Zea-Longa方法制备MCAO模型,SD大鼠35只随机等分为假手术组、模型组、血塞通小剂量组、血塞通大剂量组、尼莫地平组.各组动物分别于术后7天、14天、28天麻醉断头取材,行免疫组织化学及荧光定量PCR检测.结果:模型组NgR蛋白及mRNA表达随着缺血时间延长而逐渐升高,到28天时达到高峰,较同时间点假手术组比较均增高(P＜0.05);各用药组均比模型组低,术后14天及28天,血塞通大剂量组较模型组显著降低(P＜0.05).结论:NgR参与了脑梗死后突触的再生抑制,血塞通注射液可以抑制NgR蛋白及mRNA表达,从而促进神经再生.
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骨髓间充质干细胞移植影响慢性脑缺血大鼠认知功能及海马区Nogo-A 、NgR 的表达
背景:骨髓间充质干细胞移植可降低脊髓损伤及脑梗死大鼠的Nogo-A 及NgR 的表达.目的:观察骨髓间充质干细胞移植对慢性脑缺血大鼠认知功能及海马区Nogo-A 及NgR 蛋白的表达.方法:将30 只SD大鼠随机等分为假手术组、模型组及骨髓间充质干细胞组,后2 组采用双侧颈总动脉永久结扎法建立大鼠慢性脑缺血模型,骨髓间充质干细胞组在建模7 d后尾静脉注射移植用ficoll密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞1×107个.结果与结论:与假手术组比较,模型组大鼠平均逃避潜伏期明显延长(P < 0.01),穿过原平台位置次数明显减少(P < 0.01),海马中Nogo-A 与NgR 蛋白表达明显增加(P < 0.05);而与模型组比较,骨髓间充质干细胞组大鼠平均逃避潜伏期明显缩短(P < 0.01),穿过原平台位置次数明显增加(P < 0.05),海马组织中Nogo-A 及NgR 表达明显减少(P < 0.05).说明骨髓间充质干细胞移植具有保护慢性脑缺血大鼠空间学习与记忆能力的作用,其作用可能与降低Nogo-A 及NgR 蛋白表达有关.
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神经干细胞NgR基因沉默立体定向移植治疗大鼠脑损伤
背景:神经干细胞具有自我增殖能力和多向分化潜能,一定条件下可以分化成神经系统的各种细胞,因此在神经损伤修复方面有着良好的应用前景.而RNA干扰避免了永久基因沉默的弊病,有希望与神经干细胞移植相结合治疗颅脑损伤.目的:检测是否可以通过沉默NgR基因的方法提高神经干细胞立体定向移植对重型颅脑损伤大鼠的治疗效果.方法:60只雄性Wistar大鼠制成重型液压颅脑损伤模型后随机区组法分为3组,每组20只.实验组:造模24 h后向损伤的大鼠脑组织内注射NgR基因沉默的神经干细胞悬液6 μL:对照组:同法注射等量的神经干细胞悬液:空白组:同法注射等量的不含干细胞的培养液.伤后24 h,3 d,1,2周行动物神经学缺损评分.2周后处死行免疫组织化学和苏木精-伊红染色.结果与结论:转染小分子干扰RNA后,与对照组相比,实验组NgR基因蛋白表达量明显降低,移植后1周和2周,接受神经干细胞移植的大鼠神经学缺损评分明显低于对照组(P＜0.05):且其脑组织切片中的神经元数量较对照组明显增多(P＜0.01).伤后2周苏木精-伊红染色空白组可见损伤处脑组织断裂,为瘢痕连接,有明显空洞形成;对照组在移植部位出现典型的神经细胞样形态学改变;实验组出现媳型的神经细胞样形态学改变且空洞消失.免疫组织化学染色观察空白组BrdU标记的阳性细胞为(37.92±16.02)个/高倍视野,对照组为(89.68±15.34)个/高倍视野,实验组为(102.67±13.52)个/高倍视野,各组间两两比较,差异均有显著性意义(P＜0.01).提示神经干细胞NgR基因沉默后立体定向移植治疗大鼠脑损伤可明显改善重型颅脑损伤后大鼠的神经学功能.
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NgR基因沉默骨髓间充质干细胞/许旺细胞支架复合体的构建
背景:细胞联合移植、NgR基因沉默及聚乳酸-乙醇酸支架为近年来脊髓神经损伤修复的研究热点.目的:探讨NgR基因沉默的骨髓间充质干细胞/许旺细胞在聚乳酸-乙醇酸膜上生长及分化的可行性.方法:将骨髓间充质干细胞、许旺细胞分离、纯化及扩增后,经小分子干扰RNA转染以沉默NgR基因表达,用反转录-聚合酶链反应、Western blot检测两种细胞在转染前后NgR基因/蛋白的表达.在有血清的条件下,按骨髓间充质干细胞组、许旺细胞组及联合组(均以未转染细胞为对照,共6 组)分别接种到聚乳酸-乙醇酸膜上,观察各组细胞的贴附、生长、分化情况.结果与结论:转染小分子干扰RNA后,与转染前相比,实验组NgR基因和蛋白的表达量明显降低(P<0.05).经过培养,在聚乳酸-乙醇酸膜上观察与未转染组相比,NgR基因沉默各组均观测到种植细胞的大量贴附和生长.提示NgR基因沉默有促进骨髓间充质干细胞/许旺细胞贴附、生长的作用.
