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逍遥散对慢性束缚应激大鼠相关脑区GAP-43和Nogo-AmRNA基因表达的调节作用
目的 观察海马及杏仁核GAP-43和Nogo-A mRNA的蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及逍遥散对其表达变化的作用.方法 使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)、杏仁核GAP-43和Nogo-A mRNA表达的情况.结果 在慢性束缚应激中,GAP-43 mRNA在海马各区的21天模型中都下调(P<0.01和P<0.05),在CA3和DG区的影响较大(7天和21天模型都下调),而在杏仁核中上调显著(P<0.01和P<0.05).Nogo-AmRNA在海马各区的21天模型中都上调(P<0.01和P<0.05),以CA3的影响明显,而在杏仁核中下调显著(P<0.01).束缚时间越长,对它们的影响愈大.在CA1区,7天模型组中,GAP-43mRNA没有变化(P>0.05),在CA3和BLA区7天模型组中,No go-AmRNA都没有变化(P>0.05).慢性束缚应激明显地影响了大鼠海马和杏仁核中GAP-43和Nogo-AmRNA基因的转录情况,引起突触结构的改变可能影响了突触可塑性.逍遥散对慢性束缚应激引起的GAP-43和Nogo-AmRNA基因转录可能有明显的调节作用,但有选择性,总的来说CA3和D G区的作用明显,而在CA1的7天模型组中没有作用.结论 逍遥散可双向的调节CA3和D G区的GAP-43和Nogo-AmRNA基因转录水平,可能影响突触可塑性.
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“脊髓康”对大鼠脊髓损伤区Nogo-A表达的影响
目的:观察中药“脊髓康”对大鼠脊髓急性损伤后脊髓组织Nogo-A表达的影响.方法:选用162只SD大鼠,随机分成假手术组、模型组、强的松组、脊髓康高剂量组、脊髓康中剂量组、脊髓康低剂量组,每组27只,分别于干预后3天、7天、14天处死大鼠,以免疫组化、Western Blot及荧光定量PCR检测大鼠脊髓组织中Nogo-A的表达量.结果:脊髓损伤各组在损伤后3天时Nogo-A蛋白和mRNA表达较低,7天后迅速上升达到高峰,至14天逐渐下降.与模型组比较,脊髓康中剂量组和强的松组在损伤后3天、7天、14天时,Nogo-A蛋白和mRNA表达差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:中药“脊髓康”能有效抑制大鼠脊髓损伤区Nogo-A表达,有利于脊髓损伤修复.
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RNA干扰抑制Nogo-A基因表达对PC12细胞多巴胺释放的影响
目的 研究Nogo-A基因沉默对PC12细胞多巴胺释放的影响.方法 构建靶向Nogo-A的短发夹样RNA(shRNA)真核表达载体,并经脂质体转染PC12细胞,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测对Nogo-A mRNA及蛋白的抑制效应.采用高效液相色谱仪(HPLC)检测转染前后多巴胺释放的变化.结果 将重组质粒转染到PC12细胞48h后,Nogo-A基因表达明显受抑、多巴胺释放量减少.结论 Nogo-A可能参与PC12细胞多巴胺的释放.
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钙离子参与Nogo-A抑制轴突生长的作用
目的探索胞内钙离子在Nogo-A抑制轴突生长中的作用,以进一步了解Nogo-A抑制轴突生长的信号转导机制.方法利用激光共聚焦显微镜技术,检测Nogo-A作用于小脑颗粒细胞后不同时段胞内钙离子的浓度,并观察加入钙通道阻滞剂--尼莫地平对Nogo-A抑制轴突生长的影响.结果小脑颗粒细胞内钙离子浓度升高发生于加入Nogo-A后5 min,30 min时达到高,然后逐渐下降,2 h后恢复至正常水平;加入尼莫地平组的轴突生长与对照组相比有显著差异.结论钙离子可能参与了Nogo-A抑制轴突生长的信号转导.
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Nogo-A在成年大鼠脑内神经元的分布
目的研究Nogo-A阳性神经元在正常成年大鼠脑内的分布. 方法免疫组织化学方法(ABC法).结果Nogo-A在正常大鼠脑内的神经元和纤维有广泛的表达,出现在许多核团,主要在1.前脑的大脑皮质、嗅觉系统、海马、隔区、基底神经节、丘脑、下丘脑和视前区等部位;2.脑干的视听觉、体躯感觉、内脏觉核团、运动核团以及网状结构等;3.小脑Purkinje细胞和深核.阳性反应物主要见于神经元的胞浆和突起内,在脑室系统的嗅球室管膜、侧脑室和第三脑室部分室管膜细胞及其突起内也有表达.结论Nogo-A在脑内神经元的广泛存在提示其在正常状态下的脑功能中可能起重要作用.
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中枢神经系统损伤过程中Nogo-A降解片段的检测
目的观察大鼠脊髓横断、脑缺血和海人藻酸(KA)注射所致的脑损伤模型Nogo-A的降解情况,以推测Nogo-A降解片段产生的机制和可能的作用.方法制作大鼠脊髓横断、脑缺血和KA注射所致的脑损伤模型,Western免疫印迹方法检测Nogo-A降解片段.结果大鼠脊髓横断和脑缺血模型均检测到Nogo-A降解片段,而KA注射所致的脑损伤模型未发现Nogo-A降解片段.结论 CNS机械性和缺血性损伤可能通过某些机制导致Nogo-A发生降解.
关键词： Nogo-A 损伤 缺血 Western 免疫印迹 大鼠 -
体外培养海马神经元生长过程中Nogo-A分布的变化
目的探讨Nogo-A在神经元中的表达与神经元发育分化的关系,以推测Nogo-A在中枢神经系统发育分化过程中的意义. 方法采用怀孕18d大鼠胚胎海马神经元体外高密度和低密度培养方法,应用免疫荧光细胞化学染色和Western blot,观察Nogo-A在体外培养的大鼠海马神经元的分布模式及其在不同生长阶段的变化.结果 Nogo-A在海马神经元生长过程中均表达,主要分布在胞浆、胞膜和突起上.神经元突起形成过程中,Nogo-A主要表达于突起的近端,在轴突上随着轴突的伸长逐渐表达于轴突远端和生长锥.Nogo-A在成熟神经元网状的突起上呈串珠样分布. 结论 Nogo-A在中枢神经系统中具有不同于抑制作用的其他功能,可能参与神经元突起生长、轴突投射等过程.
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Nogo-A在小鼠胚胎新生视网膜节细胞及其轴突的表达
目的 研究小鼠胚胎阶段Nogo-A在视网膜节细胞(RGCs)及其轴突上的表达及时程变化. 方法 取不同发育阶段的小鼠胚胎,采用免疫荧光染色,以激光扫描共焦显微镜观察Nogo-A在视觉传导通路中的表达.并采用免疫双标染色确定视网膜中表达Nogo-A蛋白的细胞类型. 结果 在视网膜发育的早期阶段(E12),Nogo-A密集表达于具有放射状形态的细胞上,Nogo-A免疫阳性产物出现在胞质、胞膜以及轴突上.Nogo-A与Tuj-1双标染色显示,此阶段的视网膜中几乎所有RGCs及其轴突都表达有Nogo-A;在稍晚的发育阶段(E13),视网膜中表达Nogo-A的RGCs数量明显减少,且仅出现在节细胞层以外的室周带和睫状体边缘区.在视网膜的神经纤维层,大部分RGCs轴突不再表达Nogo-A,仅有少量视觉纤维为Nogo-A免疫阳性;RGCs的神经发生基本完成后(E15), 视网膜中几乎检测不到Nogo-A免疫阳性的细胞,但视网膜纤维层仍有少量表达Nogo-A的节细胞轴突.与之类似,视神经盘、视茎、视交叉和视束都观察到少量Nogo-A免疫阳性的轴突.值得注意的是,视束中表达Nogo-A的纤维集中位于表浅部位,而此处恰为新近到达轴突的通过部位. 结论 Nogo-A在视网膜RGCs以及轴突上表达的时程变化和位置特点提示,新生RGCs及其轴突表达Nogo-A,成熟后RGCs内Nogo-A的表达则下调.推测新生RGCs及其轴突中表达的Nogo-A可能与减少轴突分叉等细胞的内在功能有关.
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Nogo-A及其受体在阿尔茨海默病中的作用
Nogo-A是一种重要的髓鞘相关生长抑制因子,在成体动物中枢神经系统损伤再生中发挥了关键的抑制作用.近年来许多研究表明,Nogo-A及其受体NgR可以影响淀粉样蛋白Aβ的代谢,其下游的ROCK激酶可以影响Aβ、tau蛋白的水平以及血脑屏障的通透性,这些均提示Nogo-A及其受体与阿尔茨海默病(AD)的发病机制有着密切的联系.此外,近的研究还发现了Nogo-A的另外两种受体PirB和S1PR2,可能为Nogo-A在神经系统疾病中的作用提供新的研究方向.我们将着重阐释Nogo-A及其受体的基本结构和功能的新发现,以及其在AD中的作用等方面的新研究进展.
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中枢神经系统轴突再生抑制蛋白
中枢神经系统(CNS)轴突再生的主要障碍之一是存在抑制再生的蛋白,迄今,已在少突胶质细胞/髓鞘中相继发现至少三个重要的轴突再生抑制蛋白,即髓鞘相关糖蛋白(MAG)、Nogo-A和少突胶质细胞/髓鞘糖蛋白(OMgp).近的研究又证实,这三个不同的抑制成分可能主要通过与一个共同的受体Nogo66受体(NgR)结合而发挥作用.这些研究成果扩充了对CNS损伤后轴突再生障碍的理解,也为探讨CNS损伤的治疗新策略提供了新的思路.
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Nogo-A对突触可塑性的调节及相关神经疾病
轴突损伤往往导致成年哺乳动物中枢神经系统永久性缺损.作为轴突生长抑制剂,Nogo-A及其受体在中枢神经系统成熟神经元中参与对突触可塑性的调节作用,并与脊髓损伤、多发性硬化症、阿尔茨海默病及创伤后应激障碍等的发病有关.
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有氧运动预处理对全脑缺血再灌注大鼠再生相关因子的影响
目的：探讨有氧运动预处理对脑缺血大鼠脑组织海马区生长相关蛋白-43(GAP-43)、Nogo-A的影响。方法120只Sprague-Dawley大鼠平均分为假手术组、脑缺血再灌注组和有氧运动预处理组。改良Pulsinelli四血管阻断(4-VO)法制备脑缺血再灌注模型。分别在缺血后6h、1d、3d、7d各取5只大鼠，HE染色观察大鼠海马组织神经细胞形态变化，免疫组化法检测海马组织GAP-43、Nogo-A表达；另5只大鼠RT-PCR法检测GAP-43、Nogo-A水平。结果与脑缺血再灌注组相比，有氧运动预处理组的神经元密度、GAP-43蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.01)，Nogo-A蛋白和mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。结论有氧运动预处理可促进脑缺血再灌注后神经元细胞存活和轴突再生，与上调脑组织海马区GAP-43表达并下调Nogo-A表达有关。
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Nogo及其受体在脊髓损伤修复中的作用机制
成体哺乳动物中枢神经系统(CNS)髓磷脂可影响神经的可塑性并抑制神经纤维的再生.Nogo-A被认为是中枢神经系统中抑制轴突生长关键的一种髓磷脂抑制分子.在脊髓损伤(SCI)动物模型中,抑制Nogo-A的活性可明显促进轴突再生及功能改善.Nogo-A及其信号转导机制的研究日益成为SCI修复过程中的研究热点;Nogo-A及其信号转导分子特别是Nogo-66受体(NgR)、p75神经营养素受体(p75NTR)和LINGO-1成为损伤后促进轴突再生、抑制生长锥塌陷的主要治疗靶点.抑制Nogo-A及其受体NgR/p75NTR/LINGO-1可能有助于SCI的修复,促进患者功能的恢复.
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Nogo-A在脊髓损伤大鼠脊髓组织中的动态表达
目的:观察大鼠脊髓损伤后神经生长抑制因子Nogo-A在脊髓组织中的动态表达变化,探讨Nogo-A蛋白在神经再生过程中的意义和作用.方法:选用108只SD大鼠随机分成正常组、假手术组和模型组,每组36只,A组不做任何处理,B组咬除T9-T11棘突及椎板,避免损伤脊髓;C组按照改良Allen法造模.分别于干预后24h、第3天、第7天、第14天处死大鼠,每组9只,以免疫组化及Western Blot检测各组大鼠脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达变化,以荧光定量PCR检测Nogo-AmRNA表达变化.结果:正常组、假手术组各时间点Nogo-A蛋白和mRNA无显著变化(P＞0.05).模型组在损伤后24h Nogo-A蛋白和mRNA表达较低,3d后下降至低,7d后迅速上升达到高峰,至14d逐渐下降,但仍高于假手术组;与假手术组比较,模型组在损伤后7d、14d,Nogo-A蛋白和mRNA表达均明显增高,差异均有显著性意义(P＜0.05).结论:大鼠脊髓损伤后,Nogo-A蛋白在早期—过性下降后可持续保持高水平表达,可能是造成脊髓损伤后中枢神经系统神经再生困难的重要原因之一.
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督脉电针结合游泳训练对大鼠全横断脊髓损伤后GAP-43和Nogo-A表达的影响
目的:通过检测大鼠脊髓损伤后运动功能恢复情况和神经生长相关蛋白-43 (GAP-43)、神经轴突生长抑制剂-A(No-go-A)的表达来探讨督脉电针结合游泳训练干预脊髓损伤的作用机制.方法:选用雌性SD大鼠180只,随机分为正常组、假手术组、模型组、游泳训练组、督脉电针组(督电组)、督脉电针结合游泳训练组(联合组).用外科手术尖形刀片横切断暴露脊髓的方法致大鼠T9-T10段脊髓全横断模型.术后各时间点对各组大鼠进行BBB评分;免疫组化检测各时间点损伤段脊髓GAP-43和Nogo-A的表达;Western blot检测各时间点损伤段脊髓Nogo-A的表达.结果:与模型组相比,联合组和督电组BBB评分显著增加,联合组在术后第14、21、28、35天较督电组BBB评分显著增加,具有显著性差异(P＜0.05).与模型组相比,督电组和联合组GAP-43的表达显著增加,Nogo-A的表达显著减少,具有显著性差异(P＜ 0.05),联合组在术后第14、21、28、35天较电针组GAP-43的表达显著增加,Nogo-A的表达显著减少,具有显著性差异(P＜0.05).结论:①督脉电针和游泳训练都能通过促进脊髓损伤大鼠GAP-43的表达和抑制Nogo-A的表达来促进神经的修复.②联合治疗对大鼠运动功能的恢复更为有效.
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不同发育时期少突胶质细胞胞膜Nogo-A的表达
目的:探讨少突胶质细胞在发育过程中胞膜表达Nogo-A量的变化.方法:以A2B5、O4、O1、MBP为不同发育时期的少突胶质细胞的标志物,分别以抗上述标志物的抗体标记少突胶质细胞,流式细胞术分选,每组收集相同数目的细胞,再分离出每组细胞的胞膜蛋白质,Western-blot半定量检测每个细胞组Nogo-A蛋白的表达情况.结果:Western-blot检测结果显示,每组在200kDa处出现阳性蛋白条带,A2B5组蛋白量高,其次是O4、O1组,MBP组蛋白含量低.结论:在发育过程中,少突胶质细胞胞膜表面的Nogo-A蛋白的量逐渐降低.
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运动训练对脑梗死大鼠运动功能及Nogo-A/NgR1/Rho-A表达的影响
目的:明确运动训练对脑梗死大鼠运动功能的改善及神经修复的影响,探讨轴突生长有关因子Nogo-A/NgR1/Rho-A通路在其中的作用机制.方法:采用电凝法建立肾血管性高血压大鼠的右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,随机分为3组:假手术组、运动训练组、对照组；各组分别在造模后7d、14d、28d和52d进行大鼠前肢抓握力评定,并取材进行尼氏染色观察形态学变化,Western blot检测Nogo-A、NgR、Rho-A蛋白表达.结果:梗死后7d、14d、28d及52d四个时间点,训练组较对照组大鼠抓握力改善(P＜0.05)；梗死后7d开始,梗死周围皮质神经元逐渐减少,各时间点训练组较对照组存活神经元增多(P＜0.05)；通过Western blot检测,运动训练7d和14d可降低Nogo-A的表达,运动训练7d、14d和28d可降低受体NgR的表达,运动训练14d和28d使下游信号分子Rho-A蛋白的表达减少,和对照组相比,差异均有显著性意义(P＜0.05).结论:运动训练可促进脑梗死大鼠肢体运动功能的改善,对受损的神经系统具有一定的保护作用,并通过下调Nogo-A/NgR/Rho-A蛋白水平减少其对神经轴突的抑制.
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骨髓间充质干细胞移植对急性脊髓损伤大鼠神经功能恢复及Nogo-A表达的影响
目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)静脉注射移植对急性脊髓损伤(SCI)大鼠神经功能恢复及Nogo-A表达的影响.方法:采用全贴壁法分离培养大鼠BMSCs,雌性SD大鼠96只,随机分成4组,假手术组(sham组)、损伤对照组(SCI组)、溶剂对照组(vehicle组)和 BMSCs治疗组(BMSCs组),24只,组.采用改良Allen法制作大鼠急性SCI模型,BMSCs移植前用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,BMSCs组于造模成功 10min 后自大鼠尾静脉注射BMSCs悬液1ml(5x106个BMSCs);vehicle组则注射1ml 0.01m的磷酸盐缓冲液(PBS).术后第1天、第3天、第7天和第14天通过进行BBB神经行为学评分对神经功能进行评估,观察其恢复状况,免疫组化及RT-PCR法检测Nogo-A表达.结果:BMSCs组损伤周边区脊髓组织中观察到CFSE染色的阳性细胞:BMSCs组术后第7天和第14天神经功能评估明显优于SCI组、vehicle组;BMSCs组术后第3天、第7天和第14天脊髓损伤区周边组织中Nogo-A表达较SCI组和Vehicle组明显降低(P<0.01).结论:BMSCs移植可以通过下调SCI中Nogo-A的生成来促进脊髓损伤后大鼠神经功能的恢复.
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电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆功能及海马组织Nogo-A/NgR表达的影响
目的:观察电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆功能及海马组织Nogo-A/NgR表达的影响,探讨电针治疗脑卒中后认知功能障碍的作用机制.方法:将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组均15只.模型组和电针组参照Longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.电针组针刺“百会穴”和“神庭穴”,共干预7天;假手术组和模型组在同等条件下饲养和抓取.利用Morris水迷宫实验评估大鼠的学习记忆功能;TTC染色法观察脑梗死体积;免疫印迹法检测脑梗死侧海马组织Nogo-A及其受体NgR的表达.结果:与模型组相比,电针组大鼠逃避潜伏期和找到平台所经过的路程缩短,跨越平台次数增加(P＜0.05);电针组大鼠脑梗死体积减小(P＜0.05);电针组大鼠海马区Nogo-A及其受体NgR的表达量降低(P＜0.05).结论:电针可改善脑缺血再灌注大鼠的学习记忆功能,其作用机制可能与抑制脑梗死侧海马组织中Nogo-A及其受体NgR的表达有关.
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定量检测神经生长抑制因子及受体在脑梗死大鼠脑组织中的表达
目的 观察神经生长抑制因子(Nogo-A)及其受体(NgR)在脑梗死大鼠不同时间点表达的变化规律. 方法 将80只SD大鼠制成易脑卒中型肾血管性高血压大鼠模型后,随机分为脑梗死组和对照组(各40只),脑梗死组大鼠施行右侧大脑中动脉闭塞术,用免疫组织化学法和荧光定量RT-PCR法检测术后第1、2、4和8周脑梗死灶周围Nogo-A及NgR mRNA表达的变化规律. 结果 免疫组织化学显示脑梗死组Nogo-A和NgR含量在病灶周围先呈逐渐上升趋势,第4周达到高峰,较对照组显著升高(P＜0.05),Nogo-A在第8周降低,与对照组无显著性差异(P＞0.05);而NgR略微下降,但仍高于对照组(P＜0.01).荧光定量RT-PCR显示脑梗死组Nogo-A与NgR mRNA表达均先上升,在第4周达到高峰,与对照组差异有显著性意义(P＜0.01),第8周Nogo-A mRNA表达下降仍高于时照组(P＜0.01);NgR mRNA表达在第8周时与对照组无显著性差异(P＞0.05). 结论 脑梗死损伤可使梗死灶周围组织中Nogo-A及NgR表达增加,可能与脑梗死后神经再生障碍有关.
