甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响

目的:探讨大剂量甲基强的松龙(MP)对急性脊髓损伤(SCI)大鼠脊髓组织中Nogo-A蛋白表达的影响.方法:将56只成年SD大鼠分为正常对照组(A组,n=8)、急性脊髓损伤组(B组,n=24)和急性脊髓损伤后大剂量MP治疗组(C组,n=24),C组在损伤后早期从尾静脉注射大剂量MP治疗.分别在术后3、7、14d对B、C组大鼠后肢运动功能行BBB评分,再在各时间点处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色观察形态学变化和Nogo-A在脊髓组织中的分布特点;同时应用Western-blot方法测定各组相应时间点Nogo-A表达量,并与A组比较.结果:B、C组大鼠在损伤后各个时间点后肢运动功能均有一定程度的恢复,Nogo-A蛋白在各组大鼠脊髓组织中均呈阳性表达,分布于神经细胞的细胞浆和脊髓神经纤维周围呈包裹神经纤维的状态.B、C组各个时间点Nogo-A表达均显著高于A组(P＜0.05),7d时高,14d时的表达量仍高于正常组;C组在各个时间点的表达量显著低于B组,差异有显著性(P＜0.05).结论:大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A显著升高,早期应用大剂量MP对Nogo-A的表达具有明显的抑制作用.

以NgR为靶点治疗脊髓损伤的研究进展

目前对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的治疗方式有细胞移植[1]、化学药物[2]、基因治疗[3]、针刺[4]等.由于在SCI过程中,常伴有少突胶质细胞受损后释放的Nogo-A、髓鞘相关蛋白(MAG)、少突胶质细胞相关髓鞘糖蛋白( OMgp)三种髓鞘相关抑制分子,它们可以与Nogo -66受体(NgR)结合而抑制轴突再生[5].近几年,有些学者设计出针对NgR的拮抗性肽NEP-1[6]、NgR蛋白疫苗[7]、NgRDNA疫苗[8]等尝试治疗动物SCI.笔者拟就该领域以NgR为靶标促进SCI后轴突再生的研究进展进行综述.

The mechanism involved in neural regeneration after spinal cord injury is unclear. The my-elin-derived protein Nogo-A, which is speciifc to the central nervous system, has been identiifed to negatively affect the cytoskeleton and growth program of axotomized neurons. Studies have shown that Nogo-A exerts immediate and chronic inhibitory effects on neurite outgrowth.In vivo, inhibitors of Nogo-A have been shown to lead to a marked enhancement of regenerative axon extension. We established a spinal cord injury model in rats using a free-falling weight drop device to subsequently investigate Nogo-A expression. Nogo-A mRNA and protein expression and immunoreactivity were detected in spinal cord tissue using real-time quantitative PCR, immu-nohistochemistry and western blot analysis. At 24 hours after spinal cord injury, Nogo-A protein and mRNA expression was low in the injured group compared with control and sham-operated groups. The levels then continued to drop further and were at their lowest at 3 days, rapidly rose to a peak after 7 days, and then gradually declined again after 14 days. These changes were observed at both the mRNA and protein level. The transient decrease observed early after injury followed by high levels for a few days indicates Nogo-A expression is time dependent. This may contribute to the lack of regeneration in the central nervous system after spinal cord injury. The dynamic varia-tion of Nogo-A should be taken into account in the treatment of spinal cord injury.

Nogo-A与中枢神经系统疾病和肿瘤抑制作用

中枢神经系统神经元损伤后的再生一直是困扰着医学界的难题之一,而Nogo-A的发现和认识让人们看到了攻克这一难题的希望.自2000年成功克隆出Nogo基因以来,人们对Nogo-A在中枢神经系统损伤后再生过程中的抑制作用及其原理的认识越来越清楚,同时在这些研究中,发现了Nogo-A与一些中枢神经系统疾病的发生、发展有关,并可能具有肿瘤抑制作用.

Nogo受体拮抗剂对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经修复作用的研究

目的 探讨早期应用Nogo-A受体拮抗剂NEP1-40对大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)轴突再生的影响.方法 将96只新生7日龄Wistar大鼠随机分为24h、72h和7d时段的对照组、缺氧缺血性脑损伤模型组(HIBD组)、NEP1-40治疗组(NEP1-40组)及神经节苷脂治疗组(GM-1组),依次分别腹腔注射生理盐水、NEP1-40、GM-1,视分组情况连用72h和7d.用免疫组化法(SP法)观察各组Nogo-A蛋白的表达水平及轴突生长情况.P<0.05为差异有统计学意义.结果 HIBD组在24h、72h和7d的Nogo-A蛋白表达均高于同时点的对照组(P<0.05),呈现增加的趋势.NEP1-40治疗组和GM-1治疗组Nogo-A蛋白表达均低于同时段模型组(P<0.05);NEP1-40治疗组Nogo-A蛋白表达弱于同时段的GM-1组,差异有显著性(P<0.05).电镜下,模型组神经元胞膜破裂,核固缩,胞质溶解,可见较多的凋亡小体,GM-1组72h及7d胶质细胞增生,轴突再生不明显,而NEP1-40组72h及7d胶质细胞数量增加,轴突再生明显.结论 中枢神经系统损伤后,中枢神经抑制因子Nogo蛋白表达增加,抑制了轴突的再生.NEP1-40可拮抗这一作用,发挥促脑损伤后神经的修复与再生作用.

Nogo-A蛋白及Nogo受体抑制剂防治中枢神经系统疾病的研究进展

缺氧缺血、感染、脱髓鞘等多种因素均可造成儿童中枢神经系统损害,严重威胁儿童生命和健康,死亡率和致残率高.传统的观点认为中枢神经损伤后不能再生.研究证实,阻止中枢神经损伤后再生的重要原因是中枢神经的内环境中存在抑制神经再生的因子.其中,Nogo-A蛋白及其受体发挥着重要作用,近年来关于Nogo-A、Nogo受体及其抑制剂在中枢神经系统损伤和再生方面取得不少研究进展,现加以总结.

Nogo-A及其受体NgR的研究进展

中枢神经系统的神经元是一群高度分化的细胞,其损伤后修复与再生是非常困难和复杂的.Nogo是近研究发现的在中枢神经系统损伤后具有再生抑制作用的因子.Nogo基因的表达产物有3种:Nogo-A、Nogo-B、Nogo-C,其中,Nogo-A的抑制作用越来越受到研究者的重视,成为当前神经再生研究领域的热点.现就Nogo-A及其受体的结构、分布、作用机制及有关新研究进展做一简单综述.

电针对脑出血大鼠海马区Nogo-A表达的影响

目的 探讨电针对脑出血大鼠出血同侧海马区Nogo-A表达的影响及作用机制.方法 将66只成年SD大鼠按随机数字表法分为对照组和脑出血组,脑出血组再随机分为非干预组和电针组,Ⅶ型胶原酶脑内注射诱导大鼠尾状核出血,电针组于造模次日开始电针干预,各组大鼠于第2、5、10、15天取出血侧海马C1区脑组织石蜡切片行Nogo-A免疫组化检测,每例脑组织取3张切片,每张切片于400倍光镜下随机选取5个互不叠加视野计数阳性细胞并取其平均值.结果 脑出血组大鼠右侧尾状核区域有血肿形成;与对照组比较,非干预组与电针组海马区Nogo-A阳性表达水平均显著增强(P＜ 0.01),而电针组较非干预组表达水平明显下降(P＜ 0.01).结论 电针干预可显著抑制脑出血大鼠脑内Nogo-A的表达,有利于脑出血后中枢神经轴突的再生修复,促进神经功能恢复.

神经生长抑制因子Nogo-A在大鼠脑梗死后功能恢复中的作用机制

目的 探讨大鼠脑梗死后功能恢复过程中神经生长抑制因子Nogo-A的表达水平.方法 选取雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为对照组和模型组,每组各30只.模型组制备MCAO模型,对照组行假手术处理,各组于术后第3、7、28天三个时间点随机取10只进行检测,原位杂交法和Western blot法检测Nogo-A mRNA和蛋白表达,采用Longa评分标准对神经功能评分,HE染色观察分析神经元形态.结果 模型组术后Nogo-A mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05);模型组术后第7天Nogo-A mRNA和蛋白表达量明显高于术后第3、28天(P＜0.05),而术后第28天明显低于术后第3天(P＜ 0.05);HE染色显示,对照组神经元形态正常,模型组神经元形态异常,其中模型组第7天细胞形态、梗死状况及周围炎性反应较第3、28天重;模型组术后神经功能评分明显高于对照组(P＜0.05);模型组术后第28天神经功能评分明显低于术后第3、7天(P＜0.05).结论 大鼠脑梗死后Nogo-A表达明显升高,可能与损伤后神经再生障碍有关.

Nogo-A及Nogo受体抑制剂/拮抗剂的神经防护作用

Nogo 是中枢神经系统(CNS)少突胶质细胞分泌的一种髓磷脂蛋白,主要功能是抑制神经轴突生长,对受损神经元的再生与修复具有极强的抑制作用.Nogo-A 主要存在于中枢神经系统中,是Nogo 蛋白的同分导构体,对神经轴突的生长具有很强的抑制作用.近年来临床研究发现,对大鼠和小鼠脊髓损伤后给予Nogo 中和抗体、Nogo-A 受体拮抗剂或阻断信号后,均可导致轴突再生,并伴有神经功能的改善和恢复.本文就Nogo-A 及Nogo 受体抑制剂对神经的防护做一综述,来探讨Nogo-A 及Nogo 受体抑制剂对CNS 损伤后神经再生与修复方面的可能关系进行综述.

外周血内皮祖细胞移植对大鼠重型颅脑损伤后影响

目的:探讨外周血内皮祖细胞(EPCs)移植对大鼠重型颅脑损伤的影响.方法:体外复苏及培养大鼠外周血EPCs,采用液压冲击法对SD大鼠建立重型颅脑损伤模型.移植后3w取材行免疫组化法观测细胞存活情况.采用Western Blotting检测各组大鼠Nogo-A及OMGP蛋白的表达变化.结果:移植后3w检测结果显示:与假手术组比较,重型颅脑损伤组阳性细胞数明显增加,而EPCs移植组阳性细胞数与重型颅脑损伤组相比,明显减少.Western Blotting检测显示,与假手术组比较,重型颅脑损伤组大鼠大脑组织中的Nogo-A及OMGP出现过表达,EPCs移植组大鼠大脑组织中的Nogo-A及OMGP的表达较重型颅脑损伤组明显减少,(P＜0.05).结论:大鼠重型颅脑损伤后,大鼠大脑组织中的Nogo-A及OMGP出现表达增高,EPCs移植可能通过降低Nogo-A及OMGP的表达.

Nogo-A及NgR在脑外伤大鼠脑组织中的表达

目的 研究中枢神经系统损伤后Nogo-A及其受体NgR在颅脑外伤大鼠脑组织中的表达变化.方法 本课题采用SPF级SD大鼠100只,分为空白对照组(n=10)、假手术组(n=10)和损伤组(n=80).对实验损伤组大鼠采用Feeney等自由落体撞击法制成急性中型脑外伤模型,损伤组随机分为1 d(n=16)、3 d(n=16)、5 d(n=16)、7 d(n=16)和10 d(n=16)5个组.用免疫组织化学的方法测定测量各组各时间点脑切片Nogo-A及NgR蛋白的表达.结果 颅脑创伤后1 d时创伤灶边缘脑组织中Nogo-A表达显著升高,伤后3 d Nogo-A表达有所下降,但仍高于假手术组(P<0.05),到伤后7 d Nogo-A表达又上升达到高峰,直至伤10 d,Nogo-A表达仍维持在较高的水平.创伤组Nogo-A表达均显著高于假手术组(P<0.05).颅脑创伤后1天时创伤灶边缘脑组织中NgR呈基础表达,与假手术组比较差别无统计学意义(P>0.05).创伤后3 d NgR表达较假手术组明显升高(P<0.05),在伤后7 d达到高峰值,直至伤后10 d NgR表达仍处于峰值.结论 颅脑创伤后Nogo-A呈双峰的表达规律,Nogo-A在创伤后急性期可能参与颅脑创伤的急性病理过程,在创伤修复期发挥抑制神经再生的作用,为开辟颅脑创伤救治的新方法提供依据.NgR在颅脑创伤的恢复期显著升高,峰值持续时间长,NgR介导颅脑创伤后神经再生的抑制,阻碍神经功能的恢复,为探寻颅脑创伤后神经功能恢复的治疗方法指出新的方向,提供实验依据.

针刺对大鼠颅脑损伤后Nogo-A表达的实验研究

[目的]观察Nogo-A在大鼠颅脑损伤后表达变化,探讨针刺干预颅脑损伤后大鼠Nogo-A表达的影响.[方法]雄性SD大鼠随机分为针刺治疗组、模型对照组、正常对照组,用改良Feeney's打击法制成大鼠左顶叶局限性脑挫裂伤模型,分别于损伤后6、24、48 h和6d组取损伤局部脑组织,采用免疫组化法观察Nogo-A的表达变化并进行统计学分析.[结果]颅脑损伤后,从24 h开始,针刺组大鼠脑损伤组织中Nogo-A的表达开始下降.与模型组相比较,针刺组48 h、6d的Nogo-A表达均显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]针刺治疗对大鼠颅脑损伤后Nogo-A表达具有明显的抑制作用,表明针刺对脑损伤大鼠的神经再生具有促进作用.

依达拉奉对重度间歇低氧大鼠认知功能及Nogo-A表达的影响

目的 观察依达拉奉对重度间歇低氧大鼠认知功能及前额叶皮质神经元Nogo-A表达的影响.方法 将96只成年雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、慢性间歇低氧(CIH)模型组、依达拉奉组,每组32只.每天08:00~15:00将大鼠置于低氧箱内复制CIH大鼠模型:交替给予不同流量氮气和压缩空气,120 s为1个循环,保持低氧舱内氧浓度为5%~21%;正常对照组持续充入压缩空气.依达拉奉组每日07:00尾静脉注射依达拉奉注射液3 mg/kg.于制模后7、14、21、28 d采用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆功能,采用活性氧(ROS)试剂盒检测大鼠前额叶皮质组织ROS含量;采用免疫组化法检测前额叶皮质Nogo-A的蛋白表达水平.结果 ① 学习成绩:CIH模型大鼠逃避潜伏期随时间延长逐渐延长,制模后14 d起与正常对照组比较差异有统计学意义,但依达拉奉组明显短于CIH模型组(s:14 d为26.97±3.35比34.95±3.36,21 d为32.78±4.59比46.72±4.11,28 d为41.39±3.84比57.35±3.72,均P<0.05).② 记忆成绩:CIH模型大鼠跨越目标象限时间随时间延长逐渐缩短,制模后14 d起与正常对照组比较差异有统计学意义,但依达拉奉组明显长于CIH模型组(s:14 d为42.72±3.35比39.88±3.56,21 d为40.48±4.62比28.72±3.93,28 d为31.13±3.46比22.79±3.24,均P<0.05).③ROS含量:CIH模型大鼠ROS含量随时间延长逐渐升高,但各时间点依达拉奉组均明显低于模型组(MU/L:7 d为13.27±0.23比17.68±0.51,14 d为15.51±0.28比20.41±0.65,21 d为20.29±0.44比23.86±0.35,28 d为24.46±0.53比30.43±0.85,均P<0.05).④Nogo-A蛋白表达:CIH模型大鼠Nogo-A蛋白表达随时间延长逐渐增加,制模后14 d达峰值,但各时间点依达拉奉组Nogo-A蛋白表达水平〔吸光度(A)值〕 均明显低于CIH模型组(×103:7 d为4.80±0.70比5.99±0.62,14 d为5.89±0.90比7.42±0.66,21 d为4.92±0.64比5.90±0.37,28 d为3.59±0.59比4.27±0.40,均P<0.05).结论 依达拉奉对重度间歇低氧大鼠的认知障碍有一定治疗作用,其机制可能是通过清除氧自由基、抑制前额叶皮质区Nogo-A表达,从而在一定程度上减轻认知功能的损害.

内皮祖细胞对背根神经节细胞突起及Nogo-A和NgR表达的影响

目的:观察大鼠内皮祖细胞(EPCs)对乳鼠背根神经节(DRG)细胞突起影响,通过Nogo-A和NgR表达变化探究其可能机制.方法:培养DRG和制备EPCs后分别鉴定,实验组DRG和EPCs共培养,对照组2份等量的DRG共培养.第2和4日分别计算两组DRG突起数量、突起长和平均长度,统计两组DRG细胞纯度和活性,检测Nogo-A和NgR及mRNA表达.结果:实验组DRG细胞突起数量、突起长和平均长度在共培养第2和4日较对照组均明显增长(P＜0.05),实验组DRG细胞纯度和活性均高于对照组(P＜0.05),实验组Nogo-A和NgR mRNA表达量在共培养第2和4日均显著降低(P＜0.05),Western blot结果示实验组Nogo-A和NgR蛋白表达量在第2和4日明显低于对照组(P＜0.05).结论:EPCs通过介导Nogo-A和NgR表达下调,促进DRG细胞突起生长.

高压氧预处理对老龄大鼠全脑缺血再灌注损伤时脑皮质Nogo mRNA、Nogo-A及NgR蛋白表达的影响

目的 研究高压氧预处理对老龄大鼠全脑缺血再灌注损伤时Nogo mRNA、Nogo-A及NgR蛋白表达的影响,探讨其改善认知功能的可能机制.方法 雄性SD大鼠42只,月龄14月,随机分为4组:对照组(C组,n=6)、高压氧组(H组,n=12)、脑缺血再灌注损伤组(I/R组,n=12)和高压氧预处理组(HOP组,n=12).H组和HOP组每天置于高压氧舱内1h,氧压为0.2 MPa,连续5 d,后1次高压氧处理后24 h时I/R组和HOP组采用改良Pulsinelli四血管闭塞法制备大鼠全脑缺血再灌注损伤模型,全脑缺血10 min.再灌注24 h时H组、I/R组和HOP组随机取6只大鼠断头取脑,分离大脑皮质,采用实时荧光定量PCR法检测Nogo mRNA的表达水平,Western blot法检测Nogo-A及NgR蛋白的表达水平.余大鼠自由喂养5 d后采用Morris水迷宫实验测定认知功能.结果 与C组比较,I/R组和HOP组认知功能降低,Nogo mRNA及Nogo-A蛋白表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,H组和HOP组认知功能提高,Nogo mRNA及Nogo-A蛋白表达下调(P＜0.05).各组NgR蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高压氧预处理通过抑制脑皮质Nogo mRNA及Nogo-A蛋白表达上调,改善老龄大鼠全脑缺血再灌注损伤时的认知功能.

Nogo与轴突再生

目的:Nogo-A作为多种抑制神经突再生的成员之一,主要存在于少突胶质细胞(oligodendrocytes)和中枢神经(central nervous system,CNS)髓磷脂中Nogo在成年CNS损伤后,在抑制轴突再生和代偿性纤维生长中发挥重要作用.近研究发现在损伤大鼠和小鼠脊髓中体内应用Nogo中和抗体、Nogo受体(Nogo-66receptor,NgR)或阻断信号通路后受体Rho-A和ROCK均可导致轴突再生,并伴有功能的改善和恢复.

额尔敦·乌日勒对大鼠脊髓损伤后Nogo －A 的调节作用

目的：观察蒙药额尔敦·乌日勒在大鼠脊髓不完全损伤后的神经修复作用，探讨其对Nogo －A表达的调节作用。方法把成年Wistar大鼠48只随机分为损伤组（A组）和治疗组（B组），每组24只。利用改良Allen’s方法建立脊髓不完全损伤模型。损伤后用额尔敦·乌日勒对B组进行灌胃治疗。将A、B组分为3、7、14 d 3个时间点，每个时间点8只。分别在3个时间点对A、B组大鼠的运动功能进行BBB评分，评分完毕处死动物并取受损节段脊髓行免疫组化染色观察Nogo－A在脊髓组织中的分布情况，同时进行阳性细胞计数，并作比较。结果 A、B组大鼠的运动功能在损伤后都有不同程度的恢复，B组7 d和14 d的BBB评分明显高于A组对应时间点，差异有统计学意义（ P＜0．05）。Nogo －A蛋白在B组的表达量显著低于A组，差异有显著性（ P＜0．05）。结论大鼠脊髓损伤后Nogo－A表达明显升高，额尔敦·乌日勒具有抑制Nogo－A表达的作用。

Nogo-A及NgR的研究进展

Nogo-A是在中枢神经系统髓磷脂中发现的一种抑制轴突生长的蛋白,它含有两个完全独立的具有抑制活性的结构域;位于细胞内的amino-Nogo和位于细胞表面的Nogo-66.Nogo-66是通过与其受体复合体NgR/p75/Lingo-1结合发挥作用的.Nogo-A在发育的神经元胞体和轴突表面的表达,暗示它可能在初期参与了髓鞘的形成.Nogo蛋白及其受体的发现是中枢神经损伤修复分子机制的重大突破.本文就Nogo-A及其受体的结构、分布、功能及有关新研究情况作一简单介绍.

脊髓损伤中Nogo-A、RhoA与NGF调节作用研究进展

脊髓损伤后,中枢神经系统的再生修复就成了迫切需要解决的难题.对相关的促进和抑制CNS再生修复的一些因子的研究就显得格外重要.很多研究显示,神经生长因子NGF可以促进神经细胞存活,刺激轴突生长.Nogo蛋白可以抑制神经细胞轴突生长并导致细胞生长锥塌陷.RhoA是体内一些轴突再生抑制性因子作用的重要靶点,它们通过激活RhoA进而发挥抑制作用.现对上述研究进展作一综述.