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通络起废针刺法治疗缺血性脑卒中的动物实验研究
目的:通过对运用通络起废针刺法治疗缺血性中风的动物实验,探索其对中风的治疗作用.方法:将25只SD大鼠随机分为模型组、针刺治疗组及假手术组,术后用“通络起废针刺法”对针刺治疗组行针刺干预治疗,用激光散斑时间衬比成像技术观察大鼠大脑皮层区域血流分布.结果:运用“通络起废针刺法”针刺大鼠治疗组与对照组相比,治疗组缺血3h后缺血的区域和程度无扩大,动脉血管的管径明显收缩,缺血6h后,成像皮层中先前缺血的大部分区域的血流基本恢复到基线水平.结论:“通络起废针刺法”能够明显改善大鼠中风后皮层缺血区域的灌注水平并缓解血管的痉挛,是治疗缺血性脑卒中的有效临床方法之一.
关键词： 通络起废针刺法 MCAo模型 激光散斑时间衬比成像技术 -
针刺足三里、曲池对MCAO模型大鼠梗死周围组织PI3K/AKT信号通路表达的影响
目的:评价针刺曲池穴及足三里穴对MCAO模型大鼠运动功能的影响及观察脑梗死灶周围组织PI3K/AKT信号通路表达的变化.方法:将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及干预组,各15只.假手术组仅予切开皮肤分剥离神经血管后缝合,模型组及干预组大鼠予线栓法进行MCAO模型制备,造模成功后干预组大鼠予针刺曲池穴及足三里穴,1次/d,30 min/次,假手术组及模型组大鼠仅模仿捉拿、回笼,连续干预14 d,用Homecage Scan行为学评价大鼠不同时间段运动能力的变化,免疫组化检测PI3K、Bax的表达差异,免疫蛋白印迹(Western blotting)观察AKT、p-Akt的浓度变化.结果:1)Homecage Scan行为学检测显示:假手术组大鼠未见明显异常,造模大鼠出现明显偏瘫,随着时间的推移模型组及干预组大鼠花费在行走、后肢站立、舔毛3种行为的时间逐渐延长,其中干预组改善得更为明显(P＜0.05).2)造模组大鼠脑组织TTC染色出现明显白色梗死区域,干预组大鼠梗死区域明显小于模型组.3)免疫组化显示造模后大鼠PI3K降低,Bax升高,针刺足三里穴及曲池穴可上调PI3K及AKT的磷酸化程度,抑制了Bax的表达;4)Western blotting显示针刺足三里、曲池穴可上调造模大鼠AKT的磷酸化程度.结论:针刺曲池穴、足三里穴可改善脑缺血大鼠的神经缺损症状,其作用机制可能与PI3 K/AKT信号通路有关.
关键词： MCAo模型 大鼠 曲池穴 足三里穴 PI3K/Akt信号通路 -
依达拉奉联合疏血通注射液治疗急性脑梗死大鼠的疗效与安全性评价
目的:评价依达拉奉联合疏血通注射液治疗急性脑梗死大鼠的疗效和安全性.方法:将SD大鼠随机分为:假手术组、模型组、依达拉奉组、疏血通组、依达拉奉联合疏血通组,采用线栓法复制大鼠左侧大脑中动脉脑缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,除假手术组外,每组按不同时间点(1、3、5、7d)分为4个亚组,术后各组腹腔注射相应药物,1次/d,连续给药1、3、5、7d,模型组、假手术组分别予以等体积0.9％氯化钠溶液,观察比较各组大鼠神经功能缺损评分、脑组织梗死体积、脑组织含水量、脑组织形态学改变及白细胞计数(WBC)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、活化部分凝血活酶时间(APTT)等变化.结果:与假手术组比较,其余各组神经功能缺损评分、脑组织含水量、脑梗死体积均显著增高(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,各用药组的神经功能缺损评分、脑组织含水量、脑梗死体积和安全性评价指标(WBC、AST、APTT)均有不同程度降低(P＜0.05,P＜0.01);与依达拉奉组、疏血通组比较,联合用药组的神经功能缺损评分、脑组织含水量、脑梗死体积减少更明显(P＜0.05,P＜0.01),安全性指标差异无统计学意义.结论:依达拉奉联合疏血通在改善大鼠神经功能缺损症状、减少脑梗死体积、减轻脑水肿3个方面均优于依达拉奉组、疏血通组,且不良反应发生率低,安全性较好.
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地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠HPA轴影响的实验研究
目的:通过对MCAO模型大鼠缺血不同时点及地黄饮子灌胃后HPA轴水平的检测,观察其变化特点及地黄饮子的干预效应.方法:采用放射免疫分析法测定MCAO模型大鼠缺血后6h,48h和灌胃地黄饮子7d后的血浆HPA轴水平.结果:①脑缺血6h时模型组HPA轴水平低于正常组,其功能呈抑制状态;②脑缺血48h时,模型组ACTH,COR的含量较正常组明显升高,CRH含量进一步降低;③地黄饮子能够提高MCAO模型大鼠CRH,ACTH的血浆含量并降低COR的含量.结论:地黄饮子加减方能够提高MCAO模型大鼠CRH、ACTH的血浆含量并降低COR的含量,通过改善HPA轴功能的紊乱在脑缺血急性期发挥保护作用.
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MCAO模型大鼠中医证候研究
目的:探讨大脑中动脉拴塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠中医证候.方法:SD大鼠70只随机分为正常组、假手术组、手术组,假手术组与手术组按不同时间分为6h、48 h、72 h组,每组10只.以大脑中动脉栓塞法建立MCAO大鼠模型,分别在手术完成后6h、48 h、72 h时观察大鼠的一般状况、Zea-longa神经功能评分、放射免疫法检测大鼠血清皮质酮(cortisone,CORT)水平,光镜下观察大鼠脑组织形态结构变化.结果:模型大鼠偏瘫症状明显,行走呈顺钟向追尾状,甚则向一侧倾倒;精神萎靡、活动减少、身体蜷缩、体质量明显下降、舌质紫暗、神经功能Zea-longa评分明显增高,血清CORT水平明显增高,脑组织形态结构发生明显改变.结论:MCAO大鼠存在明显的肾虚血瘀证证候.
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通心络胶囊对大脑中动脉栓塞模型大鼠Caspase-3、P53、HSP70表达的影响
目的:观察通心络胶囊对大脑中动脉栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO)模型大鼠Caspase-3、P53、HSP70表达的影响,探讨通心络胶囊在缺血脑保护中的作用及可能机制.方法:MCAO模型雄性SD大鼠随机分3组:MCAO模型组、MK-801组、通心络胶囊组.各组大鼠在缺血24h后冰冻切片机切各组大鼠大脑,分别行Caspase-3、P53、HSP70免疫组化染色,于高倍物镜下选择标记阳性细胞表达明显的区域,对其相邻5个视野区采用HP1000高清晰度彩色病理图像分析系统计算免疫阳性细胞.结果:缺血24h后,Caspase-3、P53值在通心络组、MK-801组的表达较模型组明显减少(P＜0.05),且通心络组较MK-801组表达更少(P＜0.05);HSP70在通心络组和MK-801组的表达较模型组明显增多(P＜0.05),且通心络组较MK-801组表达更多(P＜0.05).结论:通心络胶囊能够明显抑制Caspase-3、P53的表达,促进HSP70的表达.
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经颈总动脉和经颈外动脉制作大鼠MCAO模型的比较
大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO)是局灶性脑缺血再灌注的标准动物模型,该模型为研究人类局灶性脑缺血的疾病特点、发病机制及防治策略提供了可靠平台.本文综述了MCAO模型成功的评价标准,并从动物、线栓、原理、制备方法及改进等方面比较了经颈总动脉进线法和经颈外动脉进线法分别制备大鼠MCAO 模型的特点,并对影响大鼠MCAO 模型制备成功率的主要因素进行了综述和优化配置.
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脑梗死大鼠外周血促炎/抗炎细胞因子的动态变化
目的 探讨脑梗死大鼠外周血促炎/抗炎细胞因子的动态变化规律.方法 建立成年雄性SD大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,分为MCAO后6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 72 h, 1周, 2周组和假手术组.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清促炎细胞因子IL-1β、INF-γ和抗炎细胞因子IL-10的水平,以评估机体的免疫状态.结果 与假手术组相比,脑梗死大鼠血清促炎细胞因子IL-1β和INF-γ的水平在MCAO后6 h和12 h均升高,但自24 h起逐渐下降,72 h降至低(P<0.01),其中血清INF-γ水平至2周仍低于假手术组(P<0.01);相反,抗炎细胞因子IL-10的水平则在脑卒中后6~12 h时有短暂降低,12 h起开始回升,在72 h升至高(P<0.01),至1周仍高于假手术组(P<0.01).结论 MCAO后大鼠外周血促炎细胞因子降低和抗炎细胞因子升高,表明脑卒中后机体处于免疫抑制状态.
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神经生长抑制因子Nogo-A在大鼠脑梗死后功能恢复中的作用机制
目的 探讨大鼠脑梗死后功能恢复过程中神经生长抑制因子Nogo-A的表达水平.方法 选取雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为对照组和模型组,每组各30只.模型组制备MCAO模型,对照组行假手术处理,各组于术后第3、7、28天三个时间点随机取10只进行检测,原位杂交法和Western blot法检测Nogo-A mRNA和蛋白表达,采用Longa评分标准对神经功能评分,HE染色观察分析神经元形态.结果 模型组术后Nogo-A mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05);模型组术后第7天Nogo-A mRNA和蛋白表达量明显高于术后第3、28天(P＜0.05),而术后第28天明显低于术后第3天(P＜ 0.05);HE染色显示,对照组神经元形态正常,模型组神经元形态异常,其中模型组第7天细胞形态、梗死状况及周围炎性反应较第3、28天重;模型组术后神经功能评分明显高于对照组(P＜0.05);模型组术后第28天神经功能评分明显低于术后第3、7天(P＜0.05).结论 大鼠脑梗死后Nogo-A表达明显升高,可能与损伤后神经再生障碍有关.
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养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究
目的:探讨养血清脑颗粒对MCAO大鼠脑损伤的保护机制.方法:选用22月龄纯种健康大白鼠,采用线栓法阻塞大脑中动脉诱发脑缺血模型,治疗组给以养血清脑颗粒治疗,对照组和假手术组则给以等量生理盐水灌胃.结果:治疗组可以显著减轻模型鼠神经缺损症状,改善阻断侧额顶区脑电图波幅降低和频率减慢;脑组织形态学观察发现,缺血区星形细胞增殖明显,神经元较对照组仅轻度减少.脑血流量也有显著改善,血中GSH、GSHPX水平升高,MDA水平则受抑制而降低.结论:养血清脑颗粒对脑缺血损伤的保护机制是多方面的,而增强星形细胞活性,保护神经元缺血性损害,改善脑血流量及抗自由基损伤是其治疗缺血性脑损伤的主要机制之一.
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移植Noggin基因修饰的神经干细胞对于大鼠MCAO模型梗死区域生长相关蛋白GAP-43 MAP-2表达的影响
目的 探讨移植携带Noggin基因的神经干细胞对MCAO动物模型神经功能修复及相关蛋白表达的作用.方法 应用RT-PCR技术扩增大鼠Noggin基因,构建载体pEGFP-N1-Noggin,转染入原代培养的大鼠神经干细胞(NSCs).线栓法制作大鼠MCAO模型,造模后3d,移植人Noggin基因修饰的NSCs.分别于移植后2d、7d、14d,应用免疫组化方法检测移植后缺血脑组织中GAP-43、MAP-2的表达情况.结果 转染神经干细胞后可以稳定表达Noggin,神经干细胞移植后2d、7d、14d,NOG组MAP-2表达显著高于生理盐水移植组(NS组)和空质粒组(P＜0.05),神经干细胞移植后2d、7d、l4 d,NOG组GFAP表达显著低于生理盐水移植组(NS组)和空质粒组(P＜0.05).结论 Noggin可以促进脑梗死区域生长相关蛋白GAP-43及微管结合蛋白MAP-2的表达.
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水蛭素对MCAO模型大鼠大脑皮质细胞凋亡影响的实验研究
1 实验材料动物:雄性Wistar大鼠,体重(300±20)g,鼠龄4～5个月,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供,许可证号:黑动字P00101004.仪器:ELITEESP型流式细胞仪:美国Coulter公司;LDZ522型低速离心机:北京医用离心机厂;TGL-16G台式离心机:上海安亭科学仪器厂.试剂及药品:碘化丙啶(propidiumiodide,PI):美国Sigma公司生产;RNA酶A(RnaseA):美国Sigma公司;10×PBS(磷酸缓冲液,pH=7.4,自制);尼莫地平片:西安博爱制药有限公司生产;银杏叶片:唐山荣大药业有限公司;水蛭素:自制.
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3β-双水杨酰薯蓣皂苷元对脑缺血/再灌注损伤大鼠的梗死体积及PI3K/Akt信号通路的影响
目的 观察3β-双水杨酰薯蓣皂苷元对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠的损伤保护作用及机制.方法 ♂ SD 大鼠120只,随机分为假手术组、缺血/再灌注组、3β-双水杨酰薯蓣皂苷元低(25 mg·kg-1)、中(50 mg·kg-1)、高(100 mg·kg-1)剂量组和尼莫地平(20 mg·kg-1)组,参照改良的线栓法,建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral antery occlusion,MCAO)模型,脑缺血2 h后再灌注24 h,行神经功能症状评分,断头处死大鼠,TTC染色后,利用图像分析软件 Image J(ver1.37c NIH)测定脑梗死面积和脑梗死体积,采用HE染色、Nissl 染色用于组织学观察、凋亡细胞检测及免疫荧光检测,并采用Western blot 法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达.结果 薯蓣皂苷元各组相对于模型组,神经功能缺损及梗死体积均明显减少(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性.其中高剂量组神经功能评分及梗死体积与尼莫地平组相似(P>0.05).薯蓣皂苷元能减轻MCAO大鼠的氧化应激水平,降低MDA及MPO水平,并呈剂量依赖性.尼莫地平对大鼠MCAO氧化应激水平无影响.薯蓣皂苷元可诱导P-Akt蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,降低 Bax 及 Caspase-3 蛋白的表达,激活PI3K/Akt信号通路,降低细胞凋亡水平.另外,薯蓣皂苷元诱导Nrf2 及 NQO1 的蛋白表达(P<0.05),降低MCAO氧化应激水平.结论 薯蓣皂苷元具有抗脑缺血/再灌注引起的脑损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt途径、调控凋亡相关基因及抗氧化基因有关.
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局灶性脑缺血再灌注损伤对小鼠脑组织平滑肌细胞α-SMA表达的影响
目的 探讨局灶性脑缺血再灌注损伤对小鼠脑组织平滑肌细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 采用C57BL/6小鼠模型,通过右侧大脑栓塞缺血方法建立局灶性脑缺血再灌注小鼠模型,使用qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学等方法,对比观察脑缺血再灌注组小鼠组脑缺血2 h再灌注24 h(实验组)和假手术组及空白对照组大脑组织平滑肌细胞a-SMA的表达情况.结果 氯化三苯四氮唑(TTC)染色结果显示实验组小鼠脑梗死面积明显大于假手术组和空白对照组,实验组小鼠脑水肿明显. Western blot及qRT-PCR结果显示局灶性脑缺血再灌注小鼠组脑缺血2 h再灌注24 h后脑a-SMA的表达明显高于假手术组和空白对照组(P＜0.05).结论 局灶性脑缺血再灌注损伤能刺激小鼠脑组织平滑肌细胞a-SMA的表达.小鼠脑缺血2 h再灌注24 h后脑a-SMA的表达明显高于假手术组和空白对照组.
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中风Ⅱ号对急性脑缺血大鼠血清TNF-α、IL-1β含量的影响
目的 观察中风Ⅱ号对急性脑缺血大鼠脑组织血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量的影响.方法 将60只SD大鼠随机分为正常对照组、缺血组、中风Ⅱ号低剂量组、中风Ⅱ号高剂量组,线栓法制备大脑中动脉缺血(MCAO)模型,用双抗体夹心ELISA法测定大鼠血清TNF-α、IL-1β含量.结果 中风Ⅱ号低剂量组、高剂量组均能明显改善MCAO大鼠神经功能缺损评分,降低血清TNF-α、IL-1β含量,高剂量组作用更为明显.结论 中风Ⅱ号可通过抑制促炎细胞因子TNF-α、IL-1β的过高表达,抑制炎症级联反应,减轻急性脑缺血大鼠的炎症损伤.
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DWI检测超急性期兔大脑中动脉梗死模型神经血管单元损伤的初步研究
目的：评价磁共振弥散加权成像（diffused weighted imaging, DWI）对兔脑超急性期脑梗死模型中神经血管单元（neurovascular unit , NVU）损伤的诊断价值。方法15只健康新西兰大白兔，随机分为对照组（5只）和实验组（10只）。其中实验组用微导丝超选择性栓塞法制作兔大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型，并根据存活时间分为0.5 h和4 h组。所有动物行磁共振DWI扫描和T2-flair扫描并分析表观弥散系数（apparent diffusion coefficient，ADC）和相对表观弥散系数（relative apparent diffusion coefficient，rADC），之后立即取全脑固定，切片进行尼氏染色、GFAP（glial fibrillary acidic protein，星形胶质细胞标记物）和CD31（血管内皮标记物）染色。结果和对照组相比，0.5 h组缺血区DWI成像见高信号，ADC成像见低信号，T2-Flair成像未见异常信号，尼氏染色未见异常， GFAP染色表达增加；4h组缺血区DWI成像见高信号，ADC成像见低信号，二者成像范围和强度较0.5h组扩大增强，T2-Flair成像见高信号，尼氏染色见尼氏体数目显著减少，GFAP染色表达较0.5h组显著增加。与0.5h组比，4h组缺血区的ADC值及rADC值均有显著差异（P<0.01）。实验组rADC值与GFAP荧光强度值呈负直线相关关系（r=－0.672，P<0.001）。结论 DWI对超急性期兔脑梗死可以及时准确的进行诊断，对应时间点梗死模型的NVU损伤特点符合影像学特征。
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冰片注射液对实验性脑缺血的保护作用
目的研究冰片注射液对实验性脑缺血的保护作用及机制.方法分别采用小鼠不完全脑缺血模型、KCN致小鼠急性脑缺血模型及大鼠MCAO模型,观察小鼠不完全脑缺血后的脑卒中指数、KCN致小鼠急性脑缺血后的翻正反射消失时间及MCAO缺血再灌大鼠脑组织内MDA含量、SOD及LDH酶活力.结果冰片注射液可降低不完全脑缺血小鼠的脑指数,缩短KCN致小鼠急性脑缺血后的存活时间,降低MCAO大鼠脑组织内MDA含量、提高SOD及LDH酶的活力.结论冰片注射液对实验性脑缺血具有保护作用.
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小蔓长春花提取物对脑梗死大鼠的治疗作用
目的:研究小蔓长春花提取物(vinca minor linn extract,VMLE)对大鼠局灶性脑缺血损伤的治疗作用.方法:应用线栓法可逆性阻断大鼠大脑中动脉,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型-MCAO模型,并分别给予相应药物灌胃.观察不同时间点VMLE对MCAO大鼠神经行为、认知和脑梗死体积的影响.结果:VMLE能使MCAO大鼠的神经行为明显改善,脑梗死体积明显减小,认知功能明显提高.结论:VMLE对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠具有很好的脑保护作用.
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小蔓长春花提取物对脑梗死大鼠抗氧化能力的作用
目的:观察小蔓长春花提取物(vinca minor linn extraction,VMLE)对实验性脑缺血大鼠血液及抗氧化能力的影响.方法:根据Zea-Longa线栓法制作SD大鼠右侧大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,清醒后lh,即参考Bederson方法对模型大鼠进行神经功能缺损评分,入选大鼠被随机分为模型组(model)、尼莫地平组(nimodipine)、VMLE高、低剂量组4组,另加假手术组(sham)共5组,各组遂即分别给予相应药物灌胃2d.48 h后测定大鼠血液流变学和抗氧化能力.结果:VMLE 10 g/kg、5 g/kg均能明显降低,实验性脑缺血大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积(Hct)、红细胞聚集指数(EAI)、红细胞刚性指数(ERI);增强了SOD和GSH-PX活性,降低了MDA含量,有统计学意义(P＜0.05);尼莫地平10 g/kg能增强SOD和GSH-PX活性,降低了MDA含量,但对实验性脑缺血大鼠全血黏度、血浆黏度、红细胞压积无显著影响.结论:VMLE可以改善脑缺血大鼠血液流变学及抗氧化能力.
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线栓法制备MCAO模型大鼠的经验体会
线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型具有不开颅、损伤小、重复性高等优点,是制备该模型常用的方法,但目前仍存在很多因素的制约,如技术要求高、模型成功率和存活率较低、术后差异较大等,这些都是亟待解决的问题.笔者从实验动物的选择、术前禁食与否、麻醉剂的选择、线栓制备、手术操作、护理及并发症7个方面对模型制备进行探讨,以期能为各位同仁提供参考.
