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痰脂消汤调控PCOS-IR模型大鼠卵巢PI3K/Akt途径探讨
目的:观察痰脂消汤对来曲唑灌胃联合高脂膳食诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗(PCOS-IR)模型大鼠卵巢胰岛素信号转导途径的影响.方法:来曲唑灌胃联合高脂膳食喂养SD大鼠建立PCOS-IR模型,大鼠随机分为模型组、痰脂消汤组(35 g·kg-1·d-1)、二甲双胍组(200 mg·kg-1·d-1),连续灌胃20 d;另设正常组.实验结束后,腹主动脉采血,测定血清空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS)浓度,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测大鼠卵巢胰岛素受体(INSR),胰岛素受体底物(IRS)-1,酯酰肌醇-3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt) mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织INSR,IRS-1,PI3K,Akt蛋白及其相应磷酸化水平表达.结果:与空白组比较,模型组大鼠空腹胰岛素(FINS),HOMA-IR水平均显著升高(P＜0.01),FPG无明显升高;模型组大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平明显降低(P ＜0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显降低(P ＜0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显降低(P＜0.05).与模型组比较,中药和二甲双胍治疗后大鼠FINS,HOMA-IR均显著降低(P＜0.01);大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平均明显升高(P ＜0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显升高(P ＜0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显升高(P＜0.05).结论:PCOS大鼠存在IR,卵巢内PI3 K/Akt信号途径转导存在异常.痰脂消汤能够显著改善大鼠胰岛素抵抗,可能与调控胰岛素信号转导通路中关键的蛋白表达有关.
关键词： 多囊卵巢综合征 胰岛素抵抗 痰脂消汤 PI3K/Akt途径 信号转导 -
SDF-1/CXCR4轴对人绒毛膜癌细胞侵袭、迁移能力的影响及意义
目的 研究SDF-1/CXCR4轴对人绒毛膜癌细胞株JAR细胞侵袭、迁移能力的影响及AMD3100对CXCR4的阻断作用,同时研究对下游PI3K/AKT信号通路的影响作用,进而探讨SDF-1/CXCR4轴在子痫前期发病中的作用机制.方法 将JAR细胞分为4组:AMD3100处理组(100 ng/ml)、SDF-1处理组(50 ng/ml)、SDF-1+AMD3100混合组(100 ng/ml AMD3100孵育2 h后再加入50 ng/ml SDF-1)、空白对照组.RT-PCR检测SDF-1和AMD3100处理后JAR细胞中CXCR4 mRNA表达水平的变化;Western blot 检测CXCR4及下游p-AKT蛋白的表达水平.采用MTT增殖试验,在0 h、24 h、48 h、72 h时间点分别检测不同浓度的SDF-1(10、30、50、100 ng/ml)对JAR细胞增殖能力的促进作用;Transwell侵袭试验、划痕试验分别检测不同处理因素条件下4组JAR细胞侵袭和迁移能力的变化情况.结果 (1)RT-PCR结果显示:SDF-1处理组JAR细胞中CXCR4 mRNA的表达(1.839±0.083)明显高于空白对照组(1.372±0.086)、AMD3100处理组(0.694±0.045)、SDF-1+AMD3100混合组(0.703±0.093),差异有统计学意义(F=30.67,P<0.05);与空白对照组比较,AMD3100处理组JAR细胞中CXCR4 mRNA的表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01).(2)Western blot结果显示SDF-1处理组JAR细胞中CXCR4及p-AKT蛋白表达水平明显高于空白对照组、AMD3100处理组、SDF-1+AMD3100混合组;与空白对照组比较,AMD3100处理组JAR细胞中CXCR4及p-AKT蛋白表达水平显著降低.(3)MTT结果显示:与10、30、100 ng/ml浓度的SDF-1处理组相比,50 ng/ml SDF-1对JAR细胞的促增殖作用强;且在48 h时,促增殖效应大,与调零组及空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).(4)Transwell侵袭试验显示:SDF-1组侵袭细胞数(70.49 ± 2.42)明显多于空白对照组(54.36±2.26)、AMD3100处理组(21.68±8.31)、SDF-1+AMD3100混合组(28.18±4.61),差异有统计学意义(F=116.26,P<0.01);与空白对照组比较,AMD3100处理组侵袭细胞数显著减少,差异有统计学意义(P<0.05).(5)划痕试验结果显示,24 h之后,SDF-1组相对迁移距离(1.162±0.034)明显高于空白对照组(0.823±0.101)、AMD3100处理组(0.160±0.047)、SDF-1+AMD3100混合组(0.183±0.064),差异有统计学意义(F=30.500,P<0.05);与空白对照组比较,AMD3100处理组相对迁移距离显著减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论SDF-1可增强人绒毛膜癌细胞株JAR的侵袭、迁移能力,但能被AMD3100阻断,因此推测在子痫前期发病过程中SDF-1/CXCR4轴可能受到抑制,并引起下游PI3K/AKT信号通路活化异常,进而引起滋养细胞的增殖异常、侵袭迁移不足,导致胎盘形成异常.
关键词： SDF-1/CXCR4轴 侵袭 迁移 PI3K/Akt途径 滋养细胞 子痫前期 -
Embelin通过PI3K/Akt信号途径抑制甲状腺癌细胞增殖
目的 探讨Embelin对甲状腺癌细胞增殖的影响并探讨相关机制.方法 体外培养甲状腺癌细胞,经Embelin处理后,RT-PCR和Western印迹检测XIAP mRNA和蛋白的表达水平;MTT法测定细胞生长抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期;免疫印迹检测PI3K、Akt蛋白表达水平.结果 Embelin处理甲状腺癌细胞48 h后,XIAP mRNA和蛋白表达水平明显降低.在高剂量组中,MTT法检测其细胞生长抑制率为42.78％±4.29％,明显高于对照组(t=20.14,P＜0.01);流式细胞仪检测高剂量组细胞凋亡率为37.94％ ±2.29％,明显高于对照组(t=42.09,P＜0.01);流式细胞仪检测高剂量组细胞周期,发现其处于G1期细胞的百分比为68.23％±2.13％,明显高于对照组(t高剂量组=5.70,P＜0.01);检测PI3K、Akt蛋白在高剂量组中的表达水平,发现pAkt蛋白表达水平明显低于对照组(t高剂量组=6.47,P＜0.05).结论 Embelin下调XIAP表达可抑制甲状腺癌细胞增殖,其作用机制可能与PI3 K/Akt信号途径相关.
关键词： 甲状腺癌 Embelin XIAP PI3K/Akt途径 增殖 -
白细胞介素-6信号通路在银屑病发病机制中的研究进展
银屑病是一种病因不明的自身免疫性炎症性多基因遗传的皮肤疾病,其病理变化的形成需要多种信号通路和细胞因子的共同参与.近年来关于银屑病相关细胞因子信号转导通路及细胞调控信号的研究受到广泛关注,其中IL-6触发的三条途径,包括Ras/Raf/MEK/ERK途径、PI3K/AKt途径和JAK/STAT途径,共同促进银屑病角质形成细胞增殖、炎症反应及血管生成等病理变化;下面针对IL-6信号通路在银屑病发病机制中的研究进展做一综述.
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岩大戟内酯B对人卵巢癌Skov3细胞的增殖抑制作用
目的 探讨岩大戟内酯B(JB)对人卵巢癌Skov3细胞的增殖抑制作用及可能机制.方法 采用不同浓度的JB处理卵巢癌Skov3细胞48 h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Skov3细胞的增殖抑制率,Hoechst法检测Skov3细胞凋亡指数,Western blot检测Akt、P-Akt(Ser473)、Bax、Caspase-3和Bcl-2蛋白水平.结果 0.1,1.0,5.0,10.0,20.0,50.0μmol/L的JB可呈剂量依赖的方式抑制Skov3细胞的增殖,IC50为5.28μmol/L;20.0 μmol/L JB和30.0 μmol/L LY294002(PI3K抑制剂)均可增加Skov3细胞凋亡指数,降低P-Akt(Ser473)/Akt水平,增加促凋亡基因(Bax、Caspase-3)的蛋白水平,降低抑制凋亡基因(Bcl-2)的蛋白水平,且均与对照组有显著差异;而LY294002可增强JB的效应,且与JB组有显著差异.结论 JB可抑制人卵巢癌Skov3细胞的增殖,促进细胞凋亡,可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路和诱导死亡受体表达来发挥抗肿瘤作用的.
关键词： 岩大戟内酯B 人卵巢癌SKOV3细胞 增殖抑制 PI3K/Akt途径 -
亚低温通过PI3K/Akt途径对脑缺血/再灌注起保护作用
目的 通过观察亚低温(32℃,3 h)对大鼠全脑缺血/再灌注5天后海马CA1区锥体细胞的保护作用及PI3K抑制剂LY294002的作用,探讨亚低温神经保护的可能机制.方法 采用四动脉结扎法建立大鼠脑缺血模型,15 min全脑缺血后再灌注5天.大鼠随机分为假手术组、常温缺血/再灌注组、低温缺血/再灌注组、低温缺血/再灌注给药组和低温缺血/再灌注溶剂对照组.给药方法为缺血前20 min脑室注射.复灌5天后用焦油紫染色法检测海马CA1区的细胞.结果 3 h亚低温可有效降低大鼠缺血/再灌注5天后海马CA1区细胞的死亡;缺血前20 min脑室注射PI3K抑制剂LY294002显著抑制了3 h亚低温对海马CA1区细胞的保护作用.结论 3 h亚低温对大鼠15 min全脑缺血有确切的保护作用.PI3K/Akt信号通路介导了亚低温的保护作用.
关键词： 脑缺血 亚低温 PI3K/Akt途径 -
七氟烷通过激活低氧诱导因子途径对胶质瘤干细胞增殖的影响
目的 探讨体外环境下,七氟烷对胶质瘤干细胞增殖的影响.方法 由手术标本获取并培养胶质瘤干细胞,研究七氟烷处理后干细胞增殖改变,并检测七氟烷处理前后干细胞内CD133、低氧诱导因子(HIF)-1α、HIF-2α以及蛋白激酶(p-Akt)的表达变化情况.结果 七氟烷处理后,胶质瘤干细胞增殖显著增快,细胞内HIF-1α、HIF-2α以及p-Akt的表达呈时间及浓度依赖性上升,CD133表达水平无显著改变.结论 七氟烷可通过激活PI3K/Akt途径,上调HIF-1α和 HIF-2α的表达,促进胶质瘤干细胞的增殖.
关键词： 七氟烷 胶质瘤干细胞 细胞增殖 PI3K/Akt途径 -
3β-双水杨酰薯蓣皂苷元对脑缺血/再灌注损伤大鼠的梗死体积及PI3K/Akt信号通路的影响
目的 观察3β-双水杨酰薯蓣皂苷元对局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠的损伤保护作用及机制.方法 ♂ SD 大鼠120只,随机分为假手术组、缺血/再灌注组、3β-双水杨酰薯蓣皂苷元低(25 mg·kg-1)、中(50 mg·kg-1)、高(100 mg·kg-1)剂量组和尼莫地平(20 mg·kg-1)组,参照改良的线栓法,建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral antery occlusion,MCAO)模型,脑缺血2 h后再灌注24 h,行神经功能症状评分,断头处死大鼠,TTC染色后,利用图像分析软件 Image J(ver1.37c NIH)测定脑梗死面积和脑梗死体积,采用HE染色、Nissl 染色用于组织学观察、凋亡细胞检测及免疫荧光检测,并采用Western blot 法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达.结果 薯蓣皂苷元各组相对于模型组,神经功能缺损及梗死体积均明显减少(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性.其中高剂量组神经功能评分及梗死体积与尼莫地平组相似(P>0.05).薯蓣皂苷元能减轻MCAO大鼠的氧化应激水平,降低MDA及MPO水平,并呈剂量依赖性.尼莫地平对大鼠MCAO氧化应激水平无影响.薯蓣皂苷元可诱导P-Akt蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,降低 Bax 及 Caspase-3 蛋白的表达,激活PI3K/Akt信号通路,降低细胞凋亡水平.另外,薯蓣皂苷元诱导Nrf2 及 NQO1 的蛋白表达(P<0.05),降低MCAO氧化应激水平.结论 薯蓣皂苷元具有抗脑缺血/再灌注引起的脑损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt途径、调控凋亡相关基因及抗氧化基因有关.
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达沙替尼对人脐静脉内皮细胞的损伤与PI3K/Akt途径抑制有关
目的 探索达沙替尼对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移和凋亡等生物学特性的影响,为完善其临床应用提供资料.方法 实验分组:达沙替尼组(达沙替尼处理浓度为50 nmol/L)、LY294002组(PI3K抑制剂,处理浓度为20 μmol/L)、联合处理组(达沙替尼处理浓度为50 nmol/L、LY294002处理浓度为20 μmol/L)及溶媒对照组(DMSO浓度为0.1％).CCK8法检测细胞活性,划痕法检测细胞迁移,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blot检测Akt和p-Akt蛋白水平.结果 达沙替尼(1～400 nmol/L)不仅抑制HUVEC增殖,而且诱导其凋亡、抑制其迁移、阻滞细胞周期G1-S期转化.随浓度的升高与处理时间的延长(50 nmol/L,24 h～96 h)达沙替尼对细胞增殖抑制作用和诱导凋亡作用明显,同时HUVEC的迁移能力随达沙替尼浓度(50～ 100 nmol/L)的升高而降低.达沙替尼和PI3K抑制剂LY294002两者单独处理时均具有细胞增殖抑制作用,两者均明显抑制Akt蛋白磷酸化水平;两者联合处理时虽然细胞增殖抑制作用增强,但对Akt蛋白磷酸化水平的影响与单独处理相比差异不明显.结论 达沙替尼可通过PI3K/Akt通路促进HUVEC损伤,抑制HUVEC增殖和迁移,改变细胞形态,阻滞HU-VEC G1-S期转化,诱导细胞凋亡.
