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老年糖尿病患者周围神经病变与视网膜神经纤维层厚度的关系
目的 探讨老年糖尿病患者糖尿病周围神经病变与视网膜神经纤维层厚度的关系.方法 回顾性收集我院内分泌科老年(年龄≥60岁)糖尿病患者资料,采用光学相干断层扫描仪(optical coherence tomography,OCT)测定视网膜神经纤维层(retinal nerve fiber layer RNFL)厚度,并行神经传导速度检查.糖尿病周围神经病变的诊断采用2010年美国糖尿病学会(ADA)糖尿病周围神经病变指南的诊断标准.比较糖尿病无周围神经病变组(对照组30例)和糖尿病周围神经病变组(病变组17例)以及不同亚组间RNFL厚度. 结果 病变组视盘颞侧、鼻侧、上侧、下侧象限和平均RNFL值均小于对照组,其中上侧[(107.7±27.4)μm比(128.1±17.3)μm,F=7.446,P=0.009],下侧象限[(112.9±20.8)μm比(130.8±21.8)μm,F=7.468,P=0.009]和平均RNFL值[(88.2±15.5)μm比(100.5±11.3)μm,F=7.988,P=0.007]比较,差异均有统计学意义;从对照组→亚临床病变组→临床病变组,RNFL厚度逐渐减少,三组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 老年糖尿病患者视网膜RNFL厚度与糖尿病周围神经病变具有一定相关性,神经病变严重者更显著.
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影响视网膜神经元和色素上皮细胞发育的因子及相关的分子机制
在眼的发育过程中,视网膜神经元及色素上皮细胞(RPE)先后由同一视网膜前体细胞(RPC)分化而来.RPC的增殖与分化的调节受多种因素影响,涉及细胞间、细胞与基质间以及细胞内部多种转录因子间相互作用的复杂过程.本文围绕视网膜的发育,聚焦影响视网膜发育的重要细胞外因子和细胞内调节的分子机制,对近年来的研究进展进行了综述.其中,细胞外因子的重点放在神经营养因子和细胞因子,而细胞内调节机制的重点则围绕碱性螺旋一环一螺旋(bHLH)和同源框两种模式的转录因子对视网膜细胞定向特化的联合调节作用同时,也讨论了锌指结构、Maf家族、Forkhead家族等其他类型的转录因子如Bm3b、Nrl、Foxn4等在视网膜发育过程中的调节作用.
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全细胞膜片钳技术在视网膜神经元电压门控离子通道研究中的应用
了解视网膜各种神经元神经电信号特点、产生机制及影响因素,对从功能角度评价视网膜神经细胞培养状态和移植效果具有重要意义。本文介绍一种先进的电生理学研究方法——全细胞膜片钳法在视网膜神经生理学中的应用,以及通过该方法对视网膜神经节细胞、双极细胞、水平细胞和无长突细胞部分电压门控离子通道进行研究所取得的进展。
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以细胞凋亡指数为指标研究视网膜神经元细胞损伤中存在的问题
笔者在近几年的审稿、研究生学位论文答辩和文献阅读中,注意到在部分涉及以细胞凋亡和细胞凋亡指数为指标,评价视网膜神经元细胞受损伤情况的基础研究工作,尤其以末端核苷酸转移酶介导的生物素dUTP切口末端标记(TDT-mediated biotinylated-dUTP nick-end labeling,TUNEL)技术原位观察细胞凋亡和以此为基础计算细胞凋亡指数的研究工作中,存在一些明显且原则性的问题,集中表现为TUNEL技术的显色结果图片质量较低,无法反映细胞凋亡概念中所述的基本表现,由此计算的细胞凋亡指数缺乏准确性和可重复性。
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体外培养视网膜神经元电压门控钾离子通道特性的研究
目的 探讨体外培养不同时期新生小牛视网膜神经元电压门控钾离子通道的特性.方法 分别取培养2、4、6周的视网膜神经元,进行全细胞膜片钳记录,并进行统计学分析.结果 去极化刺激可诱导3组细胞产生IK电流,各组检出率差异无统计学意义(P>0.05);随培养时间延长,IK电流平均峰值增高(P<0.05).超极化刺激可诱导培养6周的部分细胞产生内向整流钾电流.结论 体外培养新生小牛视网膜神经元表达不同电压门控钾电流.某些神经元的电生理学特性在不同培养阶段发生变化.
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糖尿病大鼠早期视网膜NT-3和GFAP的表达
用链尿佐菌素(STZ)腹腔注射制作大鼠糖尿病(DM)模型.分别于模型建立后1周、2周、1 月处死大鼠,取眼球做冰冻切片.用免疫组化法定量、半定量分析视网膜神经营养因子3(NT-3)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的含量.结果: 与正常对照组比较,DM 1周、2周大鼠视网膜NT-3、GFA P表达无明显改变,DM 1月大鼠视网膜含NT-3的神经元数量及神经元内NT-3的含量减少( P <0.01),GFAP阳性细胞数量增加(P<0.05).提示:糖尿病大鼠早期视网膜神经元即已发生损害,同时视网膜含NT-3神经元数和神经细胞内NT-3含量均减少;视网膜神经细胞的损害可能与NT-3的减少有关.
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Bcl-2在视网膜内的表达及意义
原癌基因Bcl-2的表达产物Bcl-2蛋白与细胞凋亡密切相关,其分布广泛.近年来研究证明发育及成年时期中枢神经系统Bcl-2表达及分布不同.正常视网膜内Bcl-2仅见于Mtiller细胞突起内,当视网膜受损后Bcl-2的表达增强,但不同类型的损伤诱导不同的细胞表达Bcl-2.切断视神经后表达Bcl-2的细胞为Miller细胞,而视网膜缺血诱导节细胞、移位与无长突细胞表达Bcl-2.正常及病理状态下视网膜内Bcl-2的表达情况提示Bcl-2不仅与视网膜神经元的分化发育、正常功能及自动平衡的维持有关,而且与视网膜神经元突起的生长及延缓受损细胞的死亡有关.
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不冷冻巩膜扣带眼内气体填充术治疗脉络膜脱离型视网膜脱离
目的:评价不冷冻巩膜扣带眼内气体填充术治疗脉络膜脱离视网膜脱离(脉脱型网脱)的疗效.方法:对11眼周边孔的脉脱型网脱PVRB-c1者施行不冷冻巩膜扣带眼内气体填充术,术后辅以氩激光光凝.出院观察6个月随访期视力、视网膜复位、PVR变化,并与同期施行冷冻病例对照.结果:不冷冻巩膜扣带眼内气体填充术对周边视网膜裂孔的脉脱型网脱PVRBc1者疗效;出院时与冷冻组无明显差异(P>0.05);随访期其视网膜复位率、视力增进水平、PVR逆转率明显优于冷冻组(P<0.01).结论:不冷冻可以减轻手术及病程中视网膜色素上皮细胞的释放和血视网膜屏障的破坏,从而减轻或扭转患眼PVR的进程,使患眼安静康复,大限度地降低了术眼内细胞增生和视网膜神经元的死亡,减少了术后复发率,提高了术后视力恢复水平,是治疗脉脱型网脱值得推荐的术式.
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在人羊膜上培养牛视网膜神经元的初步探讨
目的研究在具有完整基底膜的人羊膜上培养牛视网膜神经元的可能性.方法用胰蛋白酶消化法消化视网膜神经上皮层,以1.0×105/ml细胞密度接种于羊膜基底膜面,置于37℃ 5%CO2培养箱内培养2天后,用含5~10 umol/L胞嘧啶阿拉伯糖的培养液培养24小时,然后改用常规培养液培养,并以NSE及NF染色进行免疫组化鉴定.结果培养牛视网膜神经元的羊膜基底膜面大部分细胞阳性着色,其NSE及NF染色阳性细胞的百分数分别为94.6%和92.8%,二周后NSE及NF染色阳性细胞数消失.结论 1.牛视网膜神经元可以在人羊膜基底膜面生长.2.人羊膜基底膜可能含有对神经组织生长和再生起着重要作用的成分.
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新生大鼠视网膜神经元及节细胞体外短期培养方法
目的建立新生大鼠视网膜神经元原代培养体系,观察视网膜神经元和神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)在体外短期培养的生长特点.方法将新生大鼠视网膜细胞悬液接种于预先用鼠尾胶原包被的96孔细胞培养板中,按400×103·cm-2(高密度)及200×103·cm-2(低密度)2种密度接种,抑制非神经元生长,MTT比色法评价细胞活力;上述细胞悬液按高密度接种于24孔细胞培养板中,进行HE染色和Thy1单克隆抗体的免疫化学染色,测量视网膜神经元和RGC轴突的长度.结果视网膜神经细胞有聚集成簇生长的倾向,细胞活力在高密度培养时明显高于低密度培养;第3天细胞活力高;视网膜神经元在体外形态多样,初2d轴突生长速度快,超过12.0μm·d-1;大多数RGC从第1天就再生出2个或2个以上的突起,第1天的平均轴突长度为12.5μm·d-1,从第2天起保持在8.0μm·d-1.第4天的平均轴突长度为29.45μm.结论以鼠尾胶原为支持物,经过酶消化法得到的新生大鼠视网膜神经元,包括RGC,能够在短期内表现出较高的细胞活力并再生出较长的轴突;高密度培养(400×103·cm-2)更有利于视网膜神经元在体外生长存活.
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维主素B12及其衍生物甲钴胺对低糖导致的视网膜神经元损伤的保护作用
目的评价维生素B12及其衍生物甲钴胺对低糖导致的视网膜神经元损伤的保护作用.方法新生大鼠视网膜单细胞悬液接种到细胞培养板中.低糖(葡萄糖浓度为0.56mmol*L-1)处理的同时加入不同浓度的维生素B12和甲钴胺,继续培养至第4天,用四唑盐微量比色法检测细胞活力,细胞损伤程度用乳酸脱氢酶释放量进行评价.对数据进行统计分析.结果低糖处理组与未处理组相比,视网膜神经元活力显著下降(P<0.01);甲钴胺浓度为0.5~1.0μmol*L-1时,用药组视网膜神经元活力明显高于未加药组(P<0.05;P<0.01);维生素B12在0.5~1.5μmol*L-1时对低糖损伤的视网膜神经元活力无明显影响.维生素B12和甲钴胺在1.0μmol*L-1时均能够有效抑制低糖损伤引起的乳酸脱氢酶释放.如果低糖处理后才开始应用维生素,则各用药组均无明显神经保护作用.结论维生素B12和甲钴胺在一定药物浓度时对低糖引起的视网膜神经元损伤有保护作用,并且甲钴胺的神经保护作用高于B12.低糖损伤后延迟给药则未发现其神经保护作用.
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Müller细胞与视网膜神经元的关系
Müller细胞是脊椎动物视网膜中重要的胶质细胞,它贯穿视网膜全层,与视网膜三级神经元共同构成致密的"神经-胶质"网.近年来,随着对Müller细胞功能研究的深入,逐渐发现它在视网膜神经元的发育、营养、代谢中均发挥着重要作用.它诱导神经元在发育中的迁移、分化,参与神经元能量供应,并通过控制视网膜神经元的微环境和释放神经活性物质而主动调制神经元活动,此外,还以谷氨酸代谢和神经营养因子的分泌等形式保护神经元免受各种病理损害.
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玻璃体腔注射促红细胞生成素对大鼠视网膜结构和功能的影响
促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对视网膜光损伤、视网膜缺血-再灌注损伤、高眼压视网膜神经节细胞损伤、视神经损伤诱导的神经节细胞损伤及视神经轴突再生、早期糖尿病视网膜病变视网膜神经元、血-视网膜屏障和变应性视神经脱髓鞘病变均具有保护作用.本研究将重组大鼠EPO注入大鼠玻璃体腔,旨在观察EPO对视网膜的结构和功能的影响以及是否会诱发视网膜新生血管形成.
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视网膜病变过程中的重塑
在视网膜病变过程中会出现一系列神经元和神经胶质细胞的重塑改变.这种重塑对于视网膜结构的改造不仅不利于治疗的开展,且往往使预后更差.研究视网膜神经元和神经胶质细胞重塑的发生机制、发展过程以及各成分之间的相互作用有助于视网膜疾病临床治疗方案的选择和开展,具有重要的临床和科研价值.
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糖尿病患者视网膜神经元的机能障碍及神经胶质细胞的改变
全世界糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者的人数正已惊人的速度增长着.虽然以前所做的大量研究集中于同DM有关的血管病理生理改变方面,但近新提出的观点是DM患者在眼底血管出现异常改变之前已存在视网膜神经元和神经胶质细胞机能的障碍,并认为视网膜神经元和神经胶质细胞的改变是糖尿病复杂眼底改变的一项早期表现,将终导致视网膜的血管病变和/或黄斑水肿.这篇综述的目的就是论证视网膜神经元的机能障碍及神经胶质细胞的改变是否与其后并发的血管异常有关联.首先,我们对DR血管异常的发生机制做一个简单的阐述;然后,论述视网膜神经元和神经胶质细胞发生怎样的改变与血管异常相关联.
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大鼠视网膜神经细胞的原代培养
目的:在前人建立的方法上优化SD大鼠视网膜神经细胞体外培养的技术和方法,为后续研究提供实验基础.方法:使用胰酶消化法分离新生1~3d SD大鼠视网膜神经细胞,以DMEM/F12为培养基体外培养,免疫组织化学染色的方法进行鉴定.结果:观察光镜下培养的细胞贴壁生长,部分细胞伸出突起,且有些突起相互连接.免疫细胞化学染色显示,培养的细胞大多数抗神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)抗体反应阳性.结论:视网膜神经细胞体外培养成功为进一步进行视网膜疾病的研究创造了条件.
关键词: 细胞培养 视网膜神经元 胰蛋白酶消化法 神经元特异性烯醇化酶