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p14ARF基因在大肠癌中的表达及意义
目的:探讨p14ARF基因在大肠癌中的表达及其生物学意义.方法:应用免疫组织化学(S-P)法和TdT介导的dUTP缺口末端标记技术原位观察60例大肠癌患者的癌组织、癌旁组织和正常组织中p14ARF基因蛋白的表达和细胞凋亡.结果:癌组织p14ARF基因的阳性表达相对含量(PU)(9.57±1.03)明显低于癌旁(28.17±5.26,t=2.51,P=0.02<0.05)和正常组织(43.76±7.14,t=3.61,P=0.006<0.01);癌旁凋亡指数(AI)(8.51±2.63%)高于癌组织凋亡指数(AD(5.65±1.76%,t=2.18,P=0.04<0.05);p14ARF基因蛋白的阳性表达按患者的性别、年龄、肿瘤大小分组比较各组间无明显区别:按癌组织的分化程度、淋巴结转移和Dukes分期比较,低分化组、有淋巴结转移组和Dukes C+D期组的p14ARF基因蛋白表达分别低于高分化组(7.93±1.89 vs 12.76±2.28,t=2.36,P=0.03<0.05)、无淋巴结转移组(7.21±1.95 vs13.12±2.33,t=2.34,P=0.03<0.05)和Dukes A+B期组(7.87±1.18 vs 12.03±2.15,t=2.36,P=0.03<0.05).结论:p14ARF基因在大肠癌组织中表达下调,从而抑制大肠癌的细胞凋亡,这可能是大肠癌发生、发展的机制之一:p14ARF基因的表达下调与大肠癌的恶性生物学行为有关.
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大肠腺癌组织Survivin蛋白的表达意义
目的:检测凋亡抑制蛋白Survivin在大肠腺瘤、腺癌组织中的表达,观察其与细胞增生、凋亡的关系,探讨Survivin基因表达在大肠癌发生、发展过程中的作用.方法:应用DNA缺口未端标记技术和免疫组织化学S-P法,原位观察20例正常大肠黏膜组织、35例大肠腺瘤和60例大肠腺癌组织中的凋亡细胞和Survivin、Ki-67蛋白阳性表达.结果:Survivin蛋白在正常大肠黏膜组织中不表达,在大肠腺癌和腺瘤中阳性表达率分别为60.0%和17.1%,二者比较差异有显著性(P<0.01).Survivin蛋白表达与大肠腺癌分化程度呈负相关,与Dukes'分期和淋巴结转移无明显相关.大肠腺癌Ki-67标记指数(1abelingindex,LI)为39.1±10.4%,较腺瘤22.3±6.2%显著增高(P<0.01),大肠腺癌Survivin阳性组Ki-67 LI 25.1±7.6%与Survivin阴性组19.7±5.8%比较差异有显著性(P<0.01).大肠腺瘤和腺癌细胞凋亡指数(AI)显著高于正常大肠黏膜(P<0.01),高分化癌凋亡指数显著高于低分化癌(P<0.05),大肠腺癌Survivin阳性组凋亡指数0.85±0.52%与Survivin阴性组1.25±0.58%比较差异有显著性(P<0.01).结论:Survivin基因在大肠腺癌组织中表达上凋,通过促进肿瘤细胞增生和抑制凋亡参与大肠癌的发生、发展过程.检测大肠组织Survivin蛋白表达,对预测癌变及判断预后有重要意义.Survivin基因为肿瘤的基因治疗提供一理想靶点.
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大肠上皮恶性转化不同阶段中Fas,p53表达及其与凋亡的关系
目的:研究大肠腺癌、腺瘤恶变、管状绒毛状腺瘤、管状腺瘤中Fas及p53的表达,探讨Fas在大肠癌发生发展中的作用.方法:收集石蜡包埋的大肠腺癌组织37例,腺瘤恶变组织26例,管状绒毛状腺瘤30例,管状腺瘤24例,以6例非肿瘤大肠黏膜作为对照.通过原位杂交,免疫组化及TUNEL等技术,原位观察不同病变组织大肠上皮中的Fas mRNA和p53蛋白表达及细胞凋亡的状况及相互关系.结果:Fas mRNA阳性细胞密度:非肿瘤黏膜39.60±6.51,管状腺瘤50.93±21.64,管状绒毛状腺瘤45.91±24.15,腺瘤非恶变区25.47±14.76,腺瘤恶变区11.92±9.47,腺癌5.88±5.10;Fas mRNA在腺瘤中有较高表达,而在恶性病变中表达明显下降(P<0.001).大肠非肿瘤黏膜、管状腺瘤、管状绒毛状腺瘤、腺瘤非恶变区、腺瘤恶变区和腺癌中p53蛋白阳性细胞密度分别为8.40±2.67,13.19±8.95,13.50±7.29,12.24±7.16,73.31±28.57和80.99±44.54;p53蛋白在非肿瘤黏膜中表达低,腺瘤中略增加,在恶性病变中明显增加(P<0.001).上皮凋亡细胞密度:非肿瘤黏膜15.02±11.14,管状腺瘤46.31±18.86,管状绒毛状腺瘤29.43±16.66,腺瘤非恶变区68.42±19.61,腺瘤恶变区22.01±12.07,腺癌18.64±12.88;上皮凋亡细胞密度在腺瘤中明显升高,在恶性病变中较低(P<0.001).p53蛋白阳性表达细胞密度与上皮凋亡细胞密度呈负相关(r=-0.389,P<0.001),Fas mRNA阳性表达细胞密度与上皮凋亡细胞密度呈正相关(r=0.190,P<0.05).结论:本文证实大肠腺癌可通过下调Fas表达,上调p53表达,抑制细胞凋亡,形成"Fas抵抗".
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Fas/Fas-ligand介导的凋亡与胃癌免疫逃逸的关系
本研究通过原位观察胃癌细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的Fas/ Fas-ligand (FasL)表达和凋亡情况,并结合胃癌的临床病理特征,评价Fas/ FasL系统对胃癌生物学行为的影响.
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以细胞凋亡指数为指标研究视网膜神经元细胞损伤中存在的问题
笔者在近几年的审稿、研究生学位论文答辩和文献阅读中,注意到在部分涉及以细胞凋亡和细胞凋亡指数为指标,评价视网膜神经元细胞受损伤情况的基础研究工作,尤其以末端核苷酸转移酶介导的生物素dUTP切口末端标记(TDT-mediated biotinylated-dUTP nick-end labeling,TUNEL)技术原位观察细胞凋亡和以此为基础计算细胞凋亡指数的研究工作中,存在一些明显且原则性的问题,集中表现为TUNEL技术的显色结果图片质量较低,无法反映细胞凋亡概念中所述的基本表现,由此计算的细胞凋亡指数缺乏准确性和可重复性。
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根管治疗失败感染根管中微生物定植模式研究
采用公认的根管治疗原则进行根管治疗,一般可获得较高的治愈率,但对治疗失败的根管进行重新治疗的治愈率则明显低于初次治疗的根管[1].本研究通过扫描电镜和光学显微镜在原位观察根管中微生物的形态、分布和相对位置来初步了解微生物在未治疗及根管治疗失败的无症状感染根管中的定植模式,为治疗失败根管的再治疗提供参考.
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松质骨细观分析及破坏机理的实验研究
本文对人胫骨近段的松质骨的变形破坏机理进行了实验和理论分析:在对松质骨力学性能实验及对进行了拉伸扫描电镜观察实验,拍摄的松质骨在不同受力载荷级别下原位观察SEM照片和断口SEM照片,可从细观的角度探讨松质骨的变形和破坏现象.
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细胞增殖和凋亡与肝癌浸润转移的相关性
肿瘤的发生发展不仅与肿瘤细胞的增殖而且与其凋亡(apoptosis)有着密切的联系[1].本文利用DNA末端标记法(ISEL)、光镜、电镜和免疫组化法分别对肝癌(HCC)凋亡和增殖细胞核抗原(PCNA)进行原位观察和比较,并结合计算机图像技术定量分析,与HCC各生物学参数对比,以探讨细胞增殖和凋亡在HCC浸润和肝内转移过程中的可能机制.
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扁平苔藓皮损区p53、bcl-2、c-myc基因的表达及意义
近年来认为扁平苔藓是多基因遗传背景下T细胞介导的免疫性疾病,我们用免疫组化SP法对扁平苔藓的细胞凋亡及其调控基因p53、bcl-2和c-myc的蛋白表达进行原位观察并比较,以探讨其在扁平苔藓发病过程中的作用.
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040 去甲肾上腺素预处理对缺血/再灌注大鼠心脏5'-核苷酸酶的保护作用
目的: 在在体大鼠模型上从生化和酶组化的角度观察比较了去甲肾上腺素预处理和经典缺血预处理对缺血/再灌注大鼠心脏的保护作用及5'-核苷酸酶(5'-NT)活性的影响, 以期为一种非创伤性预处理方式提供实验依据并探讨其机制. 方法: 将24只体重200~250 g的雄性SD大鼠分为4组, 即: Ⅰ组, 假手术组; Ⅱ组, 缺血/再灌注组, 左冠状动脉前降支结扎使心肌缺血30 min后恢复再灌20 min; Ⅲ组, 经典缺血预处理组, 按Murry法进行; Ⅳ组, 去甲肾上腺素预处理组, 在缺血前15 min开始由舌静脉在5 min内缓慢滴入NE 1.6 μg. 再灌结束后, 测血清肌酸激酶活性; 原位观察心肌细胞色素C氧化酶、 5'-核苷酸酶活性. 结果: 经典缺血预处理或去甲肾上腺素预处理后缺血/再灌注心肌心肌细胞色素C氧化酶损伤性反应明显减轻(P<0.05)、血清肌酸激酶漏出减少(P<0.01); 5'-核苷酸酶活性升高(P<0.05). 结论: 去甲肾上腺素预处理及经典缺血预处理均能保护缺血/再灌注大鼠心脏超微结构、减少心肌酶漏出, 具有相似的抗心肌缺血/再灌注损伤作用, 这种作用可能与保护5'-核苷酸酶活性, 使内源性腺苷增多有关.
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041 缺血预处理对缺血/再灌注大鼠心脏有关酶保护作用的研究
目的: 在在体大鼠模型上原位观察比较了经典缺血预处理对缺血/再灌注大鼠心肌有关酶活性的影响, 以期进一步探讨预处理保护作用的机制. 方法: 将24只体重200~250 g的雄性SD大鼠分为4组, 即: Ⅰ组, 假手术组; Ⅱ组, 缺血/再灌注组, 左冠状动脉前降支结扎使心肌缺血30 min后恢复再灌20 min; Ⅲ组, 经典缺血预处理组, 按Murry法进行; Ⅳ组, 去甲肾上腺素预处理组, 在缺血前15 min开始由舌静脉在5 min内缓慢滴入NE 1.6 μg. 再灌结束后原位观察过氧化氢酶、 5'-核苷酸酶及Ca2+-ATP酶活性及琥珀酸脱氢酶损伤性反应. 结果: Ⅲ组心肌琥珀酸脱氢酶损伤性反应较Ⅱ组明显减轻(P<0.05); 过氧化氢酶、 5'-核苷酸酶及Ca2+-ATP酶活性较Ⅱ组(P<0.05)升高. 结论: 经典缺血预处理能保护缺血/再灌注大鼠心脏超微结构, 这种作用可能与经典缺血预处理保护5'-核苷酸酶活性, 使内源性腺苷增多; 保护Ca2+-ATP酶活性, 减轻细胞内钙超载及抗氧自由基损伤有关.
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细胞凋亡原位检测方法的改进
细胞凋亡不仅在生物体发育过程中与细胞增殖、分化保持动态平衡以维持机体结构和功能的正常,而且细胞凋亡的异常可能是艾滋病、老年性痴呆等神经退变性疾病、缺血性损伤、肿瘤和自身免疫性疾病的重要发病机制.因此,细胞凋亡检测技术可广泛应用于实验研究和临床检验,目前正倍受关注.现将我们在实验研究中使用宝灵曼公司原位细胞死亡检测药盒(POD)的具体做法和一些改进与体会报道如下:1 工作原理本方法是应用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导缺口末端标记法(TdT mediated dUTP nick ending labelling, TUNEL)原位检测凋亡细胞的DNA片段来显示凋亡细胞.细胞凋亡时,核酸内切酶被激活,染色质或DNA被切割,出现单链或双链缺口,产生与DNA断点相同的3'-OH末端,在一定缓冲液体系下脱氧核苷酸末端转移酶将结合有荧光素的核苷酸dUTP,不需要模板标记到缺口3'-OH末端,再用免疫细胞化学方法将结合有HRP的抗荧光素抗体与标记后的DNA断点处荧光素结合,扩大信号,加入HRP显色底物DAB-H2O2后则呈棕色反应沉淀.从而可在光镜下原位观察到凋亡细胞.
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去甲肾上腺素预处理对缺血/再灌注大鼠心脏有关酶保护作用的研究
目的:本实验在在体大鼠模型上原位观察比较了去甲肾上腺素预处理和经典缺血预处理对缺血/再灌注大鼠心肌有关酶活性的影响,以期探讨一种非创伤性预处理保护作用的机制.方法:将24只体重200~250 g的雄性SD大鼠分为4组, 即:Ⅰ组,假手术组;Ⅱ组,缺血/再灌注组,左冠状动脉前降支结扎使心肌缺血30 min后恢复再灌20 min;Ⅲ组,经典缺血预处理组,按Murry法进行;Ⅳ组,去甲肾上腺素预处理组,在缺血前15 min开始由舌静脉在5 min内缓慢滴入NE 1.6 μg.再灌结束后测血清一氧化氮含量,原位观察过氧化氢酶、5'-核苷酸酶及Ca2+-ATP酶活性及琥珀酸脱氢酶损伤性反应.结果:Ⅲ、Ⅳ组心肌琥珀酸脱氢酶损伤性反应较Ⅱ组明显减轻(P<0.05);Ⅲ、Ⅳ组过氧化氢酶、5'-核苷酸酶及Ca2+-ATP酶活性较Ⅱ组(P<0.05)升高.结论:去甲肾上腺素预处理及经典缺血预处理均能保护缺血/再灌注大鼠心脏超微结构,具有相似的抗心肌缺血/再灌注损伤作用,这种作用可能与去甲肾上腺素预处理模拟经典缺血预处理保护5'-核苷酸酶活性,使内源性腺苷增多;减轻细胞内钙超载及抗氧自由基损伤有关.
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牛松质骨在疲劳过程中微孔形成机制的研究
采用配置疲劳台的扫描电镜,直接观察牛松质骨疲劳损伤的动态过程,研究牛松质骨在疲劳载荷下微孔形成过程及机制,探讨骨质疏松骨小梁刚度、脆性增加机理.试验发现在拉伸疲劳载荷下垂直骨小梁的板层骨塑性变形,并形成大量微孔,微孔内尚有撕裂的胶原纤维.在压缩疲劳载荷下,横行骨小梁的板层骨胶原纤维在载荷作用下逐渐转向、颈缩、胶原纤维内原纤维滑移,与无机质脱黏,断裂,并回缩形成微孔.研究提示在疲劳载荷下,骨胶原纤维颈缩、滑移,与骨矿化物脱黏、形成微孔,是松质骨疲劳损伤的常见形式之一.骨小梁内板层骨形成的微孔的生物学修复可能主要由矿化物的沉积完成,而变细、抗拉强度下降的断裂骨胶原纤维未能完全更新,会逐渐导致骨小梁骨脆化、刚度相对增加,成为老年性骨质疏松发生的机制之一.
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细菌鞭毛镀银染色方法在细菌原位观察中的应用
目的 采用细茵鞭毛镀银染色方法,进行细菌原位观察.方法 用盖玻片轻轻印在菌落边缘,取菌后用细菌鞭毛镀银染色法染色,于普通光学显微镜下观察.结果 一株迁徙速度快的奇异变形杆菌层次生长菌落边缘细菌成丝状体单层紧密排列,菌体周边鞭毛浓密,茵群大体呈放射状指向无菌空白处.结论 通过印片和鞭毛镀银染色相结合,可在生理条件下原位观察细菌即时形态和菌间关系.