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产气荚膜梭菌选择性显色培养基的研制
目的 通过筛选各种选择性成分添加至培养基中以快速筛选产气荚膜梭菌,研制产气荚膜梭菌选择性显色培养基.方法 通过单因素试验评价促生长因子甘露醇、丙酮酸钠、硫酸镁对目标菌生长的促进作用,比较抗生素环丝氨酸、新霉素、多粘菌素和磺胺嘧啶对目标菌和非目标菌的抑制作用,比较显色剂5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸二钠盐(BCIP)、对硝基苯磷酸二钠(PNPP)、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷(X-Gal)、4-甲基伞形酮酰-β-D-吡喃糖苷(Mu-Gal)、邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷(ONPG)对目标菌的显色效果,将酶促因子硫酸镁、硫酸钙、硫酸锰、硫酸锌与目标菌反应筛选佳成分并确定其用量,制成产气荚膜梭菌选择性显色培养基.结果 筛选出的培养基佳成分促生长因子为丙酮酸钠,用量200rg,抗生素环丝氨酸0.5rg,显色剂为BCIP和Mu-Gal,用量均为6mg,酶促因子硫酸镁72mg,以上成分加入到100ml营养肉汤基础培养基中,制备的选择性培养基培养效果与TSC培养基、SPS培养基无差异.结论 本实验所研制的选择性培养基可以用于产气荚膜梭菌的检测.
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双重免疫组化技术在乳腺癌组织芯片中的应用
在生物医学和临床研究实践中,经常需要检测两种不同物质是否在同一样品或同一种细胞中共存,好使用双重染色法在同一个组织样本上进行杂交.双重染色的方法有两种类型,免疫酶组织化学和免疫荧光化学法.目前,在实体肿瘤中,由于甲醛固定石蜡包埋组织过高的荧光信号,免疫荧光法更适合用于冰冻保存的组织[1].双重免疫酶组织化学需要选择不同显色底物、不同的抗体、不同修复方法进行搭配,操作繁琐,在科研使用比较广泛,但临床操作要求稳定性高、操作简单,所以在临床不常规使用.
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产气荚膜梭菌特异性显色培养基研究进展
产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种革兰阳性厌氧菌,能够引起食物中毒和坏死性肠炎等疾病,该菌是临床上气性坏疽病原菌中常见的一种梭菌,在体内能形成荚膜,能分解肌肉和结缔组织中的糖,产生大量气体,从而导致组织严重气肿,继而影响血液供应,造成组织大面积坏死,美国疾病预防控制中心数据显示,产气荚膜梭菌已成为继弯曲菌和沙门菌之后的又一大引起细菌性食物中毒的致病菌[1-4].
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细胞凋亡原位检测方法的改进
细胞凋亡不仅在生物体发育过程中与细胞增殖、分化保持动态平衡以维持机体结构和功能的正常,而且细胞凋亡的异常可能是艾滋病、老年性痴呆等神经退变性疾病、缺血性损伤、肿瘤和自身免疫性疾病的重要发病机制.因此,细胞凋亡检测技术可广泛应用于实验研究和临床检验,目前正倍受关注.现将我们在实验研究中使用宝灵曼公司原位细胞死亡检测药盒(POD)的具体做法和一些改进与体会报道如下:1 工作原理本方法是应用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导缺口末端标记法(TdT mediated dUTP nick ending labelling, TUNEL)原位检测凋亡细胞的DNA片段来显示凋亡细胞.细胞凋亡时,核酸内切酶被激活,染色质或DNA被切割,出现单链或双链缺口,产生与DNA断点相同的3'-OH末端,在一定缓冲液体系下脱氧核苷酸末端转移酶将结合有荧光素的核苷酸dUTP,不需要模板标记到缺口3'-OH末端,再用免疫细胞化学方法将结合有HRP的抗荧光素抗体与标记后的DNA断点处荧光素结合,扩大信号,加入HRP显色底物DAB-H2O2后则呈棕色反应沉淀.从而可在光镜下原位观察到凋亡细胞.
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用氰化高铁血红蛋白液作标准测定血清游离血红蛋白
测定血清(浆)游离血红蛋白的经典方法是以联苯胺作显色底物的 比色法.在此方法中,其血红蛋白标准液存在配制繁杂、保存时间短的缺点,加之临床样本零散,每次测定要花费很多时间配制标准液.作者通过在传统方法的基础上,用氰化高铁血红蛋白(HiCN)作标准,进行了血清游离血红蛋白测定的探索,证实血红蛋白转化为HiCN后仍有类似过氧化物酶的作用.因而,用HiCN作标准解决了原方法之不足.