首页 > 文献资料
-
双重免疫组化技术在乳腺癌组织芯片中的应用
在生物医学和临床研究实践中,经常需要检测两种不同物质是否在同一样品或同一种细胞中共存,好使用双重染色法在同一个组织样本上进行杂交.双重染色的方法有两种类型,免疫酶组织化学和免疫荧光化学法.目前,在实体肿瘤中,由于甲醛固定石蜡包埋组织过高的荧光信号,免疫荧光法更适合用于冰冻保存的组织[1].双重免疫酶组织化学需要选择不同显色底物、不同的抗体、不同修复方法进行搭配,操作繁琐,在科研使用比较广泛,但临床操作要求稳定性高、操作简单,所以在临床不常规使用.
-
5′-核苷酸酶-碱性磷酸酶双重染色法在鉴别微淋巴管和微血管中的应用
我们采用5′-核苷酸酶-碱性磷酸酶(5′-Nase-Apase)双重酶组织化学法[1-5]对40例喉鳞癌新鲜标本冷冻切片进行染色,光镜下观察发现该染色法能在同一切片上将淋巴管染成棕色,血管染成蓝色.因此,可明显地将淋巴管和血管区别开来,特别是能显示HE染色所不能显示的微淋巴管和微血管,为从形态学上研究癌组织微淋巴管和微血管以及转移机制提供了可靠的实验方法.
-
声门上型喉癌中微淋巴管密度的意义及其与颈淋巴转移的关系
声门上型喉癌患者有无颈部淋巴转移对其预后有着重要的影响.为探索颈淋巴转移与淋巴管形成的关系,我们采用5'-核苷酸酶-碱性磷酸酶(5‘-Nase-ALPase)双重染色法检测声门上型喉癌中微淋巴管密度(lymphatic microvessel density,LMVD),以期对其有所了解.
-
舌癌毛细淋巴管的酶组织化学研究进展
舌癌发病率高且易向淋巴结转移,研究舌部淋巴管分布有助于了解舌癌的转移和预后,毛细淋巴管的形态学研究比较困难,毛细淋巴管内皮细胞在形态学上与毛细血管相似,常规染色在光镜水平难以区分,而淋巴管内皮细胞的核苷酸酶(5'-Nase)活性明显高于血管,在血管内皮细胞则具有高度活性的碱性磷酸酶(Alpase),应用核苷酸酶-碱性磷酸酶双重染色法,可有效地显示舌部的淋巴管和毛细淋巴管的分布和走向.在肿瘤和正常组织交界区域的丝状乳头内含有丰富的毛细淋巴管,并与黏膜固有层内的毛细淋巴管汇合,结缔组织乳头内毛细淋巴管和黏膜固有层的毛细淋巴管,核苷酸酶活性有减低倾向.在肿瘤的中央部,结缔组织乳头及乳头内毛细淋巴管的分布,随上皮基底层形态的不规则变化而变化,且核苷酸酶活性显著下降,毛细淋巴管口径增大,舌部肿瘤组织周围的口径增大的新生淋巴管网,可能与舌癌易发生早期转移有关.
-
酶组织化学双重染色法在牙周组织淋巴管研究中的应用
淋巴管和血管在组织液的引流,恶性肿瘤细胞转移和炎症扩散中起着重要的作用.以往有关研究中,常用的染色方法难以将淋巴管和血管、毛细淋巴管和毛细血管以及组织间隙相区分.近年来有学者报道了免疫组化双重染色应用于毛细淋巴管的研究,但较为昂贵.牙周组织的组织液和大分子物质皆通过淋巴管引流,对牙周组织微环境中与组织液相关的管状构筑,虽有作者进行过研究,但是多年来未获得较理想的方法,牙周组织中淋巴管在光镜下的确认尚未见报道.我们应用5'-Nase-Alpase酶双重染色法对大鼠牙周组织中淋巴管进行实验观察.
-
Calu-3细胞内琥珀酸脱氢酶活性及表达的双重染色法研究
目的:利用Calu-3细胞探讨肿瘤细胞琥珀酸脱氢酶活性及表达双重染色技术.方法:体外培养Calu-3细胞,将细胞爬片分为三部分,第一部分采用氯化硝基四唑氮蓝法对细胞进行琥珀酸脱氢酶活性染色,并分别孵育40 min、1h和2h.第二部分进行该酶的免疫组织化学染色.第三部分进行琥珀酸脱氢酶的组织化学和免疫组织化学的双重染色.在光学显微镜下观察并比较琥珀酸脱氢酶活性及表达染色结果的差异.结果:(①相比于孵育40 min和1h的细胞,孵育2h的细胞则反应更加充分,蓝紫色双甲臜颗粒明显增多.②免疫组织化学染色的细胞内出现黄棕色DAB颗粒.③在活性和表达双重染色中,孵育1h时蓝紫色双甲臜颗粒和DAB黄棕色颗粒较其他孵育时间的更加明显.结论:在Calu-3细胞中,琥珀酸脱氢酶活性染色时孵育2h效果较好,而在活性和表达双重染色中,孵育1h时染色效果好.
-
双重染色法在免疫组化中应用的体会
双重染色法是在一张切片上做两种不同的染色的方法,如免疫组化、原位杂交等,我们选用两种不同的显色方法,在一张切片上分别在不同部位两种标记不同的抗原,可直接区别两种抗原的含量.
-
染色胃镜对胃黏膜病变的诊断价值
染色内镜子检查技由日本学者Yamakawa于1966年提出,目前广泛应用于内镜检查过程,弥补了普通内镜的诊断缺点[1].染色素内镜较一般内镜更能获得确切的形态学判断,黏膜染色可显示肉眼不易辨认的病灶,提高活检的准确率[2].根据染色原理,将色素内镜分为直视染色法、对比染色法、反应染色法、标记染色法、双重染色法等[3].目前采用的是直视染色法色素内镜,又称MB吸收法.笔者将33例慢性胃黏膜病变者染色前后胃镜诊断结果及与病理诊断结果对比分析,以评价和探讨色素内镜对慢性萎缩性胃炎、早期胃癌及癌前病变的诊断价值.现报告如下.
-
斑马鱼颅骨骨组织发育特征的研究
目的:采用两种骨组织双重染色方法研究斑马鱼颅骨骨组织的发育特征,找出适合于不同发育时期斑马鱼骨组织的染色方法.方法:将不同发育阶段的斑马鱼分为两组,分别用A、B两种方法进行染色,体视显微镜下观察染色结果并拍照.结果:不同发育阶段的斑马鱼分别经A、B染色法染色软骨都被染成蓝色,但两者在骨骼上的染色有差别,对于15 d以内骨化不完全的斑马鱼适合用A染色法,15d以上的斑马鱼骨化程度加重更适合用B染色法突出骨骼特征.整体来看,斑马鱼颅骨的骨化过程存在特定的程序化特征,即不同的颅骨组织按照一定的时间顺序逐步完成骨化.结论:可利用颅骨的程序化骨化特征研究人类颅颌面畸形,积极开展口腔医学领域斑马鱼模式生物学的研究.
-
卢戈液-美蓝双重染色联合超声小探头诊断食管早期癌及癌前病变的临床研究
目的 探讨内镜下卢戈液-美蓝双重染色联合超声小探头诊断食管早期癌及癌前病变的临床价值. 方法 对食管可疑病变先后用3%卢戈液和0.5%美蓝喷洒病变黏膜,观察病变染色程度及范围.对卢戈液不染或淡染-美监染色病变行活组织病理学检查,并用超声小探头探查病变浸润深度.结果卢戈液不染或淡染-美蓝染色217例,病理为食管早期癌89例,不典型增生128例(轻度34例,中度68例,重度26例),卢戈液小染或淡染-美监染色诊断食管早期癌及不典型增生准确率为100%.超声小探头显示116例浸润至黏膜上皮层,37例浸润至黏膜肌层,30例浸润至黏膜下层,6例出现淋巴结转移.术后病理:上皮内癌18例,黏膜肌层痛32例,黏膜下癌39例.与其对照,超声小探头鉴别黏膜内癌和黏膜下癌的准确性为89.9%(80/89). 结论 卢戈液-美蓝双重染色联合超声小探头有助于提高食管早期癌及癌前病变的检出率和诊断率,对合理选择治疗方法有指导意义.
-
人胎儿结肠及直肠内胰多肽及生长抑素免疫反应细胞的个体发生
近年来,胃肠激素对生长发育和肿瘤的影响已引起人们的关注.为了探讨人胎结肠及直肠内胰多肽(PP)、生长抑素(SS)免疫反应细胞的个体发育及两种细胞的相互关系.本实验收集9~28wk因故中止妊娠人胎33例,取结肠、直肠组织,Bouin液固定,常规石蜡包埋,制成4μm厚的连续切片.取相邻切片按免疫组织化学SABC法和免疫组织化学双重染色法分别显示PP-、SS-IR细胞.结果显示,9~11wk人胎结肠及直肠内可见PP-IR细胞,单个分散于尚未分化完全的绒毛及肠腺上皮;18~25wk结肠内 PP-IR细胞数量有所增加,直肠内PP-IR细胞数量未见明显变化;26wk后结肠及直肠内PP-IR细胞均明显减少.SS-IR细胞分散存在于9~11wk胎儿结肠早期绒毛上皮中,数量较多,11wk直肠内也可见;结肠及直肠在15~26wk时各胎龄组SS-IR细胞数量无明显增减,26wk后明显减少.与结肠相比,直肠中PP-IR 细胞数量略少,而SS-IR细胞较多.将各时期胎儿结肠及直肠的PP-、SS-IR细胞(以有核阳性细胞数/视野)进行计数,表明PP-IR细胞数目比SS-IR细胞稍多. 胎期结肠及直肠的SS-及PP-IR细胞有多种形态,有开放型,也有闭合型.PP-I R细胞胞体略小且免疫染色强度稍弱.两种细胞多单个分布,少数聚集成群.细胞发出突起伸至肠腔、腺腔或邻近细胞.主要分布于绒毛及肠腺上皮,偶见位于固有层.免疫组织化学双染法未见这两种免疫反应物质共存在于同一细胞内.结果提示,人胎结肠及直肠内PP- IR细胞和SS-IR细胞随胎儿的发育而发生变化,PP和SS分别表达于两种细胞.