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胎儿脑组织体外保存获取神经干细胞的时限
目的探讨人胎儿脑海马组织体外保存不同时限后培养获取神经干细胞的可行性. 方法利用无血清培养,从死亡后孵育在4℃ Hank液0 h、4 h、2 4 h、48 h、72 h及96 h的胎儿海马分离细胞,在体外连续传代培养;采用免疫荧光细胞化学方法检测培养细胞的神经上皮干细胞蛋白(nestin)表达、经BrdU孵育后的BrdU表达以及诱导分化后的神经元标记(tubulin)或星型胶质细胞抗原(GFAP)表达;比较不同时限的细胞在Nestin的表达、增殖能力和诱导分化后神经元及胶质细胞比例的差异. 结果从保存在4℃ Hank液72 h以内的各组胎儿海马中均可获得具有连续增殖能力的神经球,培养出的细胞Nestin表达为阳性,通过BrdU的摄取表明细胞处于活跃的有丝分裂状态,在此期限内各组之间无明显差异;诱导分化后的神经元和胶质细胞比例在各组之间亦相似;但随着在Hank液中孵育时间的延长,所获得的神经球数量呈减少趋势;在96 h组则未能获得神经球. 结论人胎儿海马组织在4℃ Hank液中孵育72 h内可培养出呈神经球样生长的神经干细胞,但神经球数量与孵育时间呈负相关.
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人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原的表达及定位
目的 探讨人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原(CEA)的表达水平及定位与胎儿发育的关系. 方法自附属医院妇产科收集流产死亡的胎儿12例,其中,小于4个月的4例列为早期,5个月的8例列为晚期.早晚期标本各分为两等份,一份制备冷冻切片进行HE染色、α-醋酸萘酯酶(ANAE)组织化学染色、CD80及CEA免疫组织化学染色,另一份以Trizol提取蛋白后进行CD80的免疫印迹和CEA的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测. 结果 早期胎儿胸腺髓质发育差,晚期胎儿胸腺CD80阳性网状上皮细胞可分为6型:Ⅰ型扁平细胞分布于被膜内面和小梁表面;Ⅱ型呈小星形分布于皮质内;Ⅲ型及Ⅳ型呈扁平状,位于皮髓质交界处;Ⅴ型呈大星形状,突起多而细长相连成网状;Ⅵ型位于哈氏小体.在胎儿胸腺髓质网孔处可见ANAE点型(CD+CD8-)和散粒型(CD4-CD8+)细胞各呈丛状分布.早期组CEA阳性分布于髓质上皮细胞和哈氏小体,晚期组CEA阳性更集中于哈氏小体.CD80的免疫印迹和CEA的ELISA检测皆显示晚期组表达高于早期组. 结论 研究结果提示,人胎儿胸腺内CD80和CEA的表达及定位与胎儿胸腺细胞的发育及功能密切相关.
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人胎儿结肠及直肠内胰岛淀粉样多肽及5-羟色胺免疫反应细胞的研究
目的探讨胰岛淀粉样多肽(IAPP)在人胎结肠、直肠中的个体发生及其与其他生物活性物质的关系.方法用免疫组织化学SABC法,对31例9～27周人胎结肠及直肠中IAPP免疫反应(IR)细胞和5-羟色胺(5-HT)-IR细胞进行定位研究.结果人胎9周结肠内已可见较多的5-HT-IR细胞,而IAP-IR细胞于18周出现,直肠内5-HT-IR细胞和IAPP-IR细胞均于11周出现.随胎龄增长,5-HT-IR细胞由少至多,20周达到高峰,21周后逐渐减少;而IAPP-IR细胞在整个胎期始终分散存在,数量较少.经邻片比较观察发现,IAPP-IR细胞与部分5-HT-IR细胞定位一致.免疫组织化学双染法显示有的细胞内IAPP与5-HT共存.结论胎儿期结肠及直肠的内分泌细胞已开始合成IAPP,并在部分细胞内IAPP和5-HT有共存.
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人胎小肠内胰岛淀粉样多肽及5-羟色胺免疫反应细胞的个体发生
目的探讨胰岛淀粉样多肽免疫反应(IAPP-IR)细胞和5-羟色胺(5-HT)免疫反应细胞(EC细胞)在人胎小肠中的个体发生及IAPP与5-HT的关系.方法免疫组织化学技术.结果胎期小肠内IAPP-IR细胞仅见于十二指肠.16周开始,在十二指肠绒毛上皮细胞间可见单个散在的IAPP-IR细胞;22～27周,其细胞数量则逐渐增多,主要分布于肠腺中.EC细胞可见于胎期小肠各段,并随着胎龄增长,其细胞密度大小依次为十二指肠、空肠、回肠.11周,在小肠3段绒毛上皮和尚未分化完全的肠腺细胞间已可见该种细胞;17～21周,数量达多,主要分布于绒毛根部和肠腺的上皮细胞间;22周后,EC细胞呈渐少趋势.免疫组织化学邻片单染比较,未见IAPP和5-HT在同一细胞内有共存现象.结论IAPP、5-HT在人胎小肠的内分泌细胞中已有表达.IAPP-IR细胞及EC细胞随着胎儿的发育而发生不同变化.
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胰岛淀粉样多肽在人胎胃的定位研究
目的探讨胰岛淀粉样多肽(IAPP)在人胎胃的表达和定位. 方法免疫组织化学SABC法对12例11～20周人胎胃体部IAPP免疫反应(IR)细胞进行定位研究. 结果人胎11周,胃黏膜中已有IAPP-IR细胞,主要定位于胃底腺.14～20周,胃黏膜中IAPP-IR细胞数量逐渐增多,免疫反应显色也逐渐加深.经与HE染色的邻片比较,部分IAPP-IR细胞与壁细胞定位一致. 结论 IAPP-IR细胞在人胎儿期已存在于胃体部.
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血栓调节蛋白在成人及胎肺组织中的表达
目的研究血栓调节蛋白在成人肺组织及胎肺组织中的表达意义.方法以发育18周的人胎肺组织、正常成人肺组织为研究对象,应用免疫组织化学SP法检测血栓调节蛋白的存在.结果在18周人胎肺组织中,血栓调节蛋白表达于围绕原始肺泡上皮细胞团周围的血管内皮细胞中,在原始肺泡上皮细胞及原始支气管上皮细胞、软骨均呈阴性表达.正常成人肺组织内的血管内皮细胞呈阳性表达.结论血栓调节蛋白在人胎中期肺组织中未见表达.
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人胎阑尾IAPP-、SS-及5-HT免疫反应性细胞的免疫组织化学研究
为了探讨胰岛淀粉样多肽(IAPP)在人胎阑尾中的个体发生及其与其他生物活性物质的关系,用免疫组织化学PAP法,对36例12～38周人胎阑尾中IAPP免疫反应性(IR)细胞、生长抑素(SS)-IR细胞和5-羟色胺(5-HT)-IR细胞进行定位研究.结果表明,胎12周,阑尾上皮中已可见到SS-IR细胞,而IAPP-及5-HT-IR细胞于14周才见到.在整个胎期,阑尾中的IAPP-及SS-IR细胞始终分散存在,数量较少;而5-HT-IR细胞数量随胎龄增长而发生变化,胎15～21周为高峰期.经邻片比较观察,未见到IAPP与SS或5-HT在同一细胞有共存现象.本研究表明,胎期阑尾的内分泌细胞已可合成IAPP、SS及5-HT.
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人胚胎无瘢痕愈合模型的建立及组织学初步观察
创面愈合后瘢痕形成一直是困扰整形外科医师的临床难题,孕中期胎儿皮肤创面愈合后无瘢痕形成,成为人们期望的理想愈合方式[1],我们将孕中期人胎儿皮肤异种移植至裸鼠的皮下,建立人胎儿无瘢痕愈合的模型,并对其愈合过程进行了组织学观察,以期为人胎儿无瘢痕愈合机制的研究提供一定依据.
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雌激素受体βmRNA在胎儿心血管的表达及其序列分析
雌激素对心血管的保护作用已被大量研究证实,但至今很难确定起关键作用的特异性调节机制.Hodges等[1]发现雌激素受体β(ER β)是ER在人心血管平滑肌细胞的主要表达形式,并且推测雌激素对心血管的保护作用,可能以血管组织中ER β基因组的作用为主要机制.本研究采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测人胎儿心血管组织ER β mRNA的表达情况,并与目前已有的ER β基因进行DNA序列比较分析,以确定ER β在人心血管组织中的表达及存在的意义.
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分娩时脐血管断裂致胎死官内临床分析
脐带是连接于胎儿与胎盘之间索条状结构,长40～60cm,粗1.5～2.0 cm,含一条脐静脉,两条脐动脉,血管周围为华通胶,通过脐血管将氧及营养物质送人胎儿体内,同时又将胎儿产生的CO2及代谢物质自脐血管经胎盘渗出体外由母体排出.
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人胎儿肝干细胞分离鉴定及体内移植
目的分离鉴定人胎儿肝干细胞,并观察其对急性肝损伤严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠进行异种移植的治疗效果.方法以改进Seglen胶原酶(Ⅳ型)原位灌注结合Percoll密度梯度离心法分离纯化要求终止中期妊娠而流产的男性胎儿肝干细胞,经光镜、电镜下观察细胞特点,进行肝干细胞细胞标志SABC免疫组化染色.经肝脏直接注射移植人胎儿肝干细胞(106细胞)以治疗D-氨基半乳糖(800mg/kg)诱发的急性肝损伤雌性SCID小鼠,于移植前及移植后24、48、72 h、1周取血测定ALT、TBiL,于移植后1、2、4周取受体肝脏组织,PCR方法检测受体肝组织性别决定因子.结果人胎儿肝干细胞平均细胞产量(2.10±0.50)×107,细胞活性率为(92.30±1.23)%;光镜下呈游离状态、大小不等的单个细胞,约为正常肝细胞1/5～1/3大小;电镜下细胞表面可见少量短而小的微绒毛状突起,卵圆形细胞核,核/浆比例较大等特点;甲胎蛋白、细胞角蛋白8、19及α-1-抗胰蛋白酶免疫组化染色呈阳性,白蛋白及白细胞共同抗原染色呈阴性表现,培养3周可形成克隆样结构.人胎儿肝干细胞移植组急性肝损伤SCID小鼠移植24h后血清ALT、TBiL水平降低,各时间点均低于对照组(P＜0.05),且肝脏病理损伤逐渐减轻;存活2周小鼠肝脏组织中PCR测定性别决定因子呈阳性表达,随时间延长表达增强.结论该方法能成功分离高产量、高活性人胎儿肝干细胞,在急性肝损伤SCID小鼠体内移植存活,并改善其肝功能、肝脏病理指标.
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人胎儿发生过程中PCNA在睾丸组织细胞的表达
目的:观察人胎儿发生过程中PCNA在睾丸组织细胞的表达特征,探讨PCNA在睾丸发生中的作用.方法:用SP免疫细胞化学技术检测了人胎儿12～32周睾丸间质细胞、支持细胞、生殖细胞PCNA阳性细胞表达率.结果:PCNA在胎儿睾丸间质细胞、支持细胞、生殖细胞有不同程度表达,16～20周为表达高峰,阳性细胞核为桔黄色或棕黄色,随着胎龄的增长呈逐渐下降趋势(P＜0.01).结论:人胎儿发育过程中PCNA在睾丸间质细胞、支持细胞、生殖细胞有不同程度的表达.
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EGF在胎儿晶状体上皮细胞中的表达
目的:观察表皮生长因子(EGF)在人胎儿晶状体上皮细胞的表达.方法:用SP免疫组织化学法对48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞作EGF免疫组织化学染色.结果:EGF在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达.EGF阳性细胞胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状;免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少.结论:EGF在胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达;并且随着胎儿的增长而减少.
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血型鉴定结果错误或正反定型不符原因分析
血型鉴定是保证临床病人输血安全不可少的一项重要检查,但是造成鉴定血型结果错误或正反定型不符原因很多,可有技术问题或ABO血型本身的问题,血型问题大致原因如下.1 患者为产生ABO抗体或抗体被抑制(1)新生儿检测血型时应十分慎重,因抗体效价低,而凝聚不明显,4-6个月内婴儿作反向定型时是可能不凝聚或凝聚很弱,5-6岁时才达高峰,因新生儿也可因母亲的IgG抗A或抗B通过胎盘进人胎儿体内而影响到检测结果.
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人胎结肠及直肠内SP-及5-HT免疫反应细胞的个体发生
目的探讨人胎结肠、直肠粘膜P物质免疫反应(SP-IR)细胞的个体发生及其与5-羟色胺免疫反应(5-HT-IR)细胞的关系.方法取9～27周因故终止妊娠的人胎结肠、直肠组织31例,用免疫组织化学SABC法及邻片单染法进行定位研究.结果胎期直肠的SP-IR细胞于11周出现,14周结肠内可见.15～27周,结肠及直肠中的SP-IR细胞始终分散存在;与结肠相比,同一胎龄直肠SP-IR细胞数量较多;邻片比较观察发现直肠内部分SP-IR细胞与5-HT-IR细胞定位一致.结论在胎儿期结肠及直肠的内分泌细胞已开始合成SP,且SP和5-HT在直肠部分细胞内有共存.
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人胚胎期心脏蒲肯野细胞结构的光镜和电镜研究
为了揭示人胚胎期蒲肯野细胞的形态学构筑,本实验选用医院水囊引产发育正常胎儿6例,固定后取包含有心内膜的左心室心肌组织,分别采用普通光镜、扫描电镜化学消化法和镀银染色方法对心脏传导系统蒲肯野细胞的形态及立体构筑进行研究.结果表明人胚胎期蒲肯野细胞为椭圆形,直径较普通心肌细胞大2倍左右,闰盘复杂,细胞周围有明显的网状纤维鞘.蒲肯野细胞的上述构象有利于冲动沿细胞单一方向快速传导.
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人胎儿股骨发生过程中血管内皮生长因子的表达
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)与人胚胎骨发生及发育的关系.方法 用免疫组化技术对11～36 W人胎儿股骨中血管内皮生长因子的分布和表达情况进行了研究.结果 VEGF阳性反应主要见于成骨细胞、破骨细胞及新生骨细胞中,血管内皮细胞及骨髓细胞也呈阳性反应;骺软骨钙化区肥大的软骨细胞为VEGF阳性反应,但其它区域的软骨细胞中无VEGF表达.结论 VEGF在胚胎发生时期在血管内皮细胞和成骨细胞的表达,说明VEGF在人胎儿骨发生及发育过程中发挥重要作用.
关键词： 人胎儿 股骨 血管内皮生长因子(VEGF) 免疫组织化学 -
人胎肠系膜淋巴结组织发生及相关T、B细胞的发育
目的:从形态学的角度探讨人胎肠系膜淋巴结组织发生及相关T、B细胞的发育.方法:收集人胎33例,测量顶臀长,按Patten法确定胎龄.采用常规组织学H-E染色,免疫组织化学法,观察人胎肠系膜淋巴结组织发生及相关T、B细胞的发育.结果:9周,人胎肠系膜淋巴结原基形成,IgM阳性细胞出现,散在分布;11周,出现CD3阳性细胞,原基中有高内皮微静脉;15周,形成早期髓质;23周,IgM阳性细胞集聚形成小结状.连续切片显示,CD3阳性细胞分布在小结深面形成薄层副皮质区,可辨认皮质和髓质;至28周时,淋巴小结内均未发现生发中心.结论:9周淋巴结原基出现.15周早期髓质形成,髓质形成早于皮质.23周皮、髓质明显可辨,皮质内出现淋巴小结,但至28周时小结仍为初级淋巴小结;9周出现B细胞;11周出现T细胞.
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维生素D依赖性钙结合蛋白-D28K样阳性神经元在人胎儿和新生儿脊髓和背根神经节内的表达和分布
目的:观察24～27 w人胎儿和新生儿的脊髓和背根神经节(DRG)内维生素D依赖性钙结合蛋白-D28K (CB) 样阳性神经元的表达和分布.方法:采用免疫细胞化学ABC法对24～27 w人胎儿和新生儿进行观察.结果:(1)CB样阳性产物的表达在胎儿DRG和脊髓灰质的神经元胞体及树突内可观察到.在脊髓各段有不同分布;(2)新生儿脊髓和DRG内CB样阳性胞体的数量、大小及染色强度均有所增加,但在空间分布上无大的变化.结论:人胎儿的脊髓和DRG在发育的24～27 w至出生时,CB样阳性神经元的表达在定位分布上无差异,但随年龄增长,CB样阳性神经元的数量、大小和染色强度均有所增加.
关键词： 人胎儿 新生儿 维生素D依赖性钙结合蛋白 免疫细胞化学 脊髓 -
人胎结肠及直肠内胃泌素、血管活性肠肽、胰多肽、生长抑素免疫反应阳性细胞的个体发生
目的:探讨人胎结肠及直肠胃泌素(Gas)、血管活性肠肽(VIP)、胰多肽(PP)和生长抑素(SS)免疫反应阳性(IR)细胞的个体发生及其相互关系.方法:免疫组织化学SABC法及细胞计数.结果:结肠内Gas-、PP-、SS-IR细胞始见于第9 w,VIP-IR细胞于第18 w出现.直肠内未见Gas-IR细胞,PP-IR细胞始见于第9 w,SS-、VIP-IR细胞于第11w出现.结肠内Gas-IR细胞随胎龄增长数量减少,于第26 w未见.PP-IR细胞数量在结肠内随胎龄增长先少后多,直肠内未见明显变化.VIP-IR细胞在胎期结肠、直肠少,而SS-IR细胞较多,整个胎期VIP-、SS-IR细胞数量无明显增减.结论:VIP、PP和SS存在于人胎结肠、直肠的内分泌细胞,Gas仅在结肠内分泌细胞中有表达,提示各种内分泌激素对胎儿结肠及直肠的发育起调节作用.
