首页 > 文献资料
-
人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原的表达及定位
目的 探讨人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原(CEA)的表达水平及定位与胎儿发育的关系. 方法自附属医院妇产科收集流产死亡的胎儿12例,其中,小于4个月的4例列为早期,5个月的8例列为晚期.早晚期标本各分为两等份,一份制备冷冻切片进行HE染色、α-醋酸萘酯酶(ANAE)组织化学染色、CD80及CEA免疫组织化学染色,另一份以Trizol提取蛋白后进行CD80的免疫印迹和CEA的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测. 结果 早期胎儿胸腺髓质发育差,晚期胎儿胸腺CD80阳性网状上皮细胞可分为6型:Ⅰ型扁平细胞分布于被膜内面和小梁表面;Ⅱ型呈小星形分布于皮质内;Ⅲ型及Ⅳ型呈扁平状,位于皮髓质交界处;Ⅴ型呈大星形状,突起多而细长相连成网状;Ⅵ型位于哈氏小体.在胎儿胸腺髓质网孔处可见ANAE点型(CD+CD8-)和散粒型(CD4-CD8+)细胞各呈丛状分布.早期组CEA阳性分布于髓质上皮细胞和哈氏小体,晚期组CEA阳性更集中于哈氏小体.CD80的免疫印迹和CEA的ELISA检测皆显示晚期组表达高于早期组. 结论 研究结果提示,人胎儿胸腺内CD80和CEA的表达及定位与胎儿胸腺细胞的发育及功能密切相关.
-
曲古菌素A诱导急性髓系白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86的研究
目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)诱导急性髓系白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86.方法:应用流式细胞仪检测TSA诱导急性髓系白血病患者单核细胞、HL-60细胞和K562细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;应用RT-PCR分析CD80和CD86 mRNA表达情况;在75 Gy照射TSA诱导的HL-60细胞和K562细胞后,应用CCK-8检测共刺激分子表达提高后HL-60细胞和K562细胞对健康人单核细胞的增殖作用.结果:TSA上调HL-60细胞表达CD86,也可上调急性髓系白血病患者单核细胞表达CD86,但TSA不能上调K562细胞表达CD86,TSA诱导HL-60细胞和K562细胞后,提高表达CD86的HL-60细胞对健康人单核细胞有增殖作用,而K562细胞无此作用.结论:TSA诱导HL-60细胞和急性髓系白血病患者单核细胞表达共刺激分子CD86,促进健康人单核细胞的增殖作用.
关键词： 曲古菌素A CD80 CD86 同种异基因混合淋巴细胞反应 -
特发性血小板减少性紫癜患者外周血淋巴细胞共刺激分子的表达及白介素18的作用
本研究探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血淋巴细胞共刺激分子CD80、CD86及其配体CD28的表达水平及白介素18的作用.应用免疫荧光标记和流式细胞技术检测34例ITP患者和34名正常人外周血淋巴细胞共刺激分子CD80、CD86及其配体CD28的表达,酶联免疫(ELISA)法测定血浆IL-18.结果表明:ITP患者外周血淋巴细胞CD80、CD86表达率(4.21 4±2.27%,7.19±5.16%)均明显高于正常对照组(2.34±0.87%,4.08±1.96%,P＜0.01).ITP组血浆IL-18含量为(538.31±111.33)pg/ml,正常对照组血浆IL-18含量为(489.44±49.07)pg/ml.IL-18含量与血小板数量呈显著性负相关(r=-0.395,P＜0.05).结论:ITP患者CD80和CD86共刺激分子过度表达,患者血浆中IL-18水平比正常对照组明显升高(P＜0.05),共刺激分子CD80、CD86与ITP发病密切相关,IL-18在ITP发病机理中起重要作用.
-
小鼠急性粒-单核白血病WEHI-3细胞表面免疫应答分子的表达与Fas配体功能研究
为了研究小鼠急性粒-单核白血病细胞株WEHI-3细胞表面免疫应答分子Fas、Fas配体(FasL)、CD80分子表达以及FasL的功能,应用流式细胞术检测WEHI-3细胞表面Fas、FasL和CD80分子表达情况,同时采用氚胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测FasL功能.结果表明:WEHI-3细胞表面CD80和Fas表达率分别为(5.06±0.41)%、(6.75±2.31)%(n=5),但FasL表达率高达(63.73±5.23)%(n=5),当WEHI-3(效应细胞,E)和Fas+YAC-1细胞(靶细胞,T)以3:1、10:1和30:1混合培养时,YAC-1细胞的凋亡率分别为(26±4.5)%,(35±3.2)%和(43±2.7)%(n=5).结论:WEHI-3细胞高表达FasL,低表达Fas和CD80,并能诱导Fas+YAC-1细胞凋亡.
关键词： 急性粒单核细胞白血病 FasL Fas CD80 WEHI-3细胞 -
重组溶瘤腺病毒Ad-CD80-TPE-GM对Hep2细胞移植瘤的杀伤效应
目的 研究自行构建的重组溶瘤腺病毒Ad-CD80-TPE-GM对裸鼠Hep2细胞移植瘤的杀伤效应.方法 裸鼠皮下接种Hep2细胞悬液建立荷人喉癌动物模型.将裸鼠分为单次治疗组和连续治疗(每天1次、连续5 d)组,每组据治疗药物不同再分为PBS组、携带增强型绿色荧光蛋白报告基因的复制缺陷型5型重组腺病毒(Ad-GFP)组、Ad-CD80-TPE-GM组,以PBS、Ad-GFP组为对照组.单次治疗组于治疗后4 d取外周血并剥离肿瘤,分别用有限稀释法、BCA蛋白质定量试剂盒和流式细胞术检测肿瘤组织中的病毒感染滴度、总蛋白浓度和CD80表达阳性率,ELISA法检测血清和肿瘤组织中粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CS)表达水平,并计算肿瘤组织中病毒感染滴度量和总蛋白中GM-CSF的表达量.连续治疗组于首次给药后观察裸鼠肿瘤体积的变化,待对照组肿瘤直径>1 cm,或肿瘤表面出现明显溃疡时剥离肿瘤,计算Ad-CD80-TPE-GM组分别与2个对照组相比的相对肿瘤增殖率和抑瘤率.结果 单次治疗组中,Ad-CDS0-TPE-GM组肿瘤组织中病毒感染滴度量(IU/tumor)为1.13×106(1.40×105～7.25×107),明显高于Ad-GFP组[1.17×102(7.80×101～2.40×102),P=0.01],而PBS组未检测到病毒;GM-CSF表达量(pg/mg)为397.32±179.67,明显高于PBS组(4.02 4±0.93,P<0.01)和Ad-GFP组(6.92±2.79,P<0.01):CD80表达阳性率为31.6%±9.0%,而PBS和Ad-GFP组均基本不表达(均P<0.001).连续治疗组中,Ad-CD80-TPE-GM组与PBS和Ad-GFP组相比,相对肿瘤增殖率分别为31.8%(P<0.05)、25.9%(P<0.01);抑瘤率分别为73.4%、77.9%(均P<0.001).结论 Ad-CD80-TPE-GM能在端粒酶阳性的人喉癌Hep2细胞移植瘤组织内大量复制并有效表达目的 基因,具有明显的抗肿瘤效应.
-
HSP70/CD80嵌合DNA疫苗对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的作用
目的 研究HSP70/CD80嵌合DNA质粒对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的作用,为安全可靠的新型免疫调节性疫苗奠定基础.方法 将40只雌性健康BALB/c小鼠随机分为4组:对照组、哮喘组、pcDNA3.1载体组、HSP70/CD80嵌合DNA疫苗组,每组10只.用HSP70/CD80嵌合疫苗免疫小鼠后,建立鸡卵清蛋白致敏的小鼠哮喘模型,观察其气道阻力变化,支气管肺泡灌洗液中IL-13、IFN-γ含量的变化.取肺组织进行病理组织学分析,观察肺内炎症情况.结果 HSP70/CD80嵌合DNA疫苗免疫小鼠后,能有效减轻气道炎症(P＜0.05),降低气道阻力(P＜0.05),肺泡灌洗液中IFNl的分泌增加(P＜0.05),IL-13降低.结论 HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可促进免疫反应向Th1偏移并增加IFN-γ的生成,减轻气道炎症,降低气道阻力,这为过敏性哮喘新型免疫调节性疫苗的机制及应用研究提供了实验资料.
-
阿糖胞苷上调耐药白血病细胞共刺激分子表达及其分子机制研究
目的 研究阿糖胞苷(Ara-C)对耐药白血病细胞共刺激分子表达的影响,并探讨其分子机制.方法 以流式细胞术检测K562和K562/A02细胞经Ara-C处理后CD80、CD86分子的表达,进而用RT-PCR方法检测CD80、CD86tuRNA表达以及NF-κB、IAP家族基因表达.结果 经Ara-C处理后,K562和K562/A02细胞的CD80、CD86分子表达较对照组明显升高,并且能够下调NF-κB、Survivin、XIAP(X-ljnked inhibitor of apoptosis)基因表达,而cIAP1、cIAP2(cellular inhibitor of apoptosis-1,2)基因表达变化不明显.结论 Ara-C可上调耐药白血病细胞共刺激分子CD80、CD86,相关基因NF-κB、IAP家族为参与其上调CD80和CD86分子的重要基因.
-
CD80双价抗体对降植烷诱导的小鼠狼疮样肾炎模型的免疫干预效应研究
目的 运用CD80双价抗体抑制CD80/CD28信号通路,研究观察双价抗体对小鼠狼疮样肾炎的逆转效应并探究其分子机制.方法 运用化学法建立小鼠狼疮样肾炎模型,一次性腹腔注射0.5 ml降植烷(Pristane),4个月时小鼠出现蛋白尿,外周ANA、抗dsDNA抗体水平也明显升高,模型建立成功.取成模小鼠分为2组,CD80双价抗体干预组:每只小鼠分别于第1、3、5、8、15天尾静脉注射200μg CD80双价抗体,随后3个月每隔1个月注射1次;模型组注射同型蛋白,给药方式及剂量与双价抗体干预组相同.同时设立正常对照组.Albustix试纸法监测小鼠尿蛋白动态变化,流式细胞术分析脾脏中免疫相关细胞的活化程度,间接免疫荧光法检测小鼠血清中自身抗体(ANA和抗dsDNA抗体)的表达水平及IFN-γ、IL-4的含量,取肾脏组织进行HE染色分析、免疫复合物(IC)检测.结果 小鼠尿蛋白显示双价抗体干预组的尿蛋白程度显著低于建模组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术分析双价抗体干预组脾脏中巨噬细胞(CD11b+)、树突状细胞(CD11c+)、中性粒细胞(Gr1+)及B细胞(CD21+)活化程度显著低于模型组(P<0.05),并且T细胞中CD4+、CD154+细胞数量干预组明显少于模型组(P<0.05);血清中ANA、dsDNA的阳性率和滴度干预组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);干预后小鼠血清中IFN-γ及IL-4的含量与建模组相比出现下降,差异具有统计学意义(P<0.05);肾脏HE染色和免疫荧光结果显示,肾小球炎症损伤和坏死程度减轻,肾脏免疫复合物沉积情况减少.结论 CD80双价抗体高效特异地结合抗原提呈细胞表面的CD80分子,阻断了CD80/CD28协同刺激信号,下调机体的免疫应答,对小鼠狼疮样肾炎病理损伤具有缓解和逆转作用.
-
AIHA/Evans综合征CD80、CD86和CD4+CD25+调节性T细胞的研究
目的 探讨自身免疫性溶血性贫血(AIHA)/Evans综合征(AIHA同时或相继发生免疫性血小板减少性紫癜)患者外周血淋巴细胞共刺激分子CD80、CD86和CD4+ CD25+调节性T细胞的表达水平,初步探讨共刺激分子CD80、CD86和CD4+ CD25+调节性T细胞在AIHA/Evans综合征细胞免疫功能紊乱中的机制及其意义.方法 应用流式细胞术检测24例次AIHA/Evans综合征患者治疗前后外周血淋巴细胞CD80、CD86和CD4+CD25+调节性T细胞比例的变化,并与正常对照组相比较.结果 AIHA/Evans综合征患者治疗前后与正常对照组比较CD80比例水平均无明显变化(P＞0.05)；发作时CD86表达水平高于对照组和治疗缓解组,差异具有统计学意义(P＜0.05)；CD4+ CD25+调节性T细胞表达水平在AIHA/Evans综合征发作患者中表达明显下降,差异具有高度统计学意义(P＜0.01).结论 淋巴细胞共刺激因子CD86和CD4+ CD25+调节性T细胞异常表达可能参与AIHA/Evans综合征细胞免疫功能紊乱方面的发病机制.
-
环孢素对小鼠树突细胞体外成熟及同种免疫刺激活性的影响
目的:观察环孢素(cyclosprine A,CSA)对小鼠树突状细胞(dendritic cell,DC) 体外成熟和免疫学功能的影响,以期进一步探讨CSA免疫抑制作用机理.方法:在小鼠DC体外培养时加入两种剂量(0.5 μg/ml和1.0 μg/ml) 的CSA处理,观察DC的生成情况,以流式细胞仪分析各处理组细胞的免疫表型,并作体外混合淋巴细胞反应观察其对同种T细胞的刺激增殖能力.结果:经CSA培养后,DC的生成和形态没有影响,表达低水平的共刺激分子CD40,CD80,DC的抗原呈递功能和刺激同种T细胞的功能显著下降.结论:CSA在早期阶段干扰免疫应答是通过影响DC的活化而实现,DC是CSA初的作用位点.
-
肾组织中CD80和CD86的表达及其与肾间质损伤的关系
目的 探讨T淋巴细胞活化分子CD80与CD86在原发性肾小球肾炎肾小管间质损伤中的作用.方法采用免疫组织化学法检测原发性肾小球肾炎患者肾组织中的CD80与CD86的表达情况,免疫比浊法检测24 h尿蛋白定量,全自动生化分析仪检测血尿素氮、血清肌酐及血浆白蛋白等临床指标.结果 CD80和CD86在原发性肾小球肾炎肾组织中的表达情况不同.CD80在肾小管上皮细胞、肾间质有阳性表达,在肾小球无表达,而CD86在肾小管上皮细胞、肾间质及肾小球均有表达.CD80和CD86在肾小管间质中的表达水半随着原发性肾小球肾炎患者肾小管间质病变程度的加重而增强(相关系数分别为0.741和0.736,P<0.001),并且CD80的表达与CD86的表达成正相关.CD80和CD86的表达与患者24h尿蛋白定量、血尿素氮和血清肌酐水平成正相关;与肌酐清除率成负相关.结论 T细胞的活化可能参与了原发性肾小球肾炎肾间质损伤.
-
小鼠白细胞免疫球蛋白样受体2干扰RNA对树突状细胞表面CD11c、CD80和CD86的影响及意义
目的：探讨小鼠树突状细胞（DC）表面白细胞免疫球蛋白样受体2（LILRB2）改变对DC的CD11c、CD80和CD86表型的影响及意义。方法应用20 ng/ml重组小鼠粒细胞集落刺激因子（rGM-CSF）＋20 ng/ml IL-4刺激小鼠骨髓细胞生长，隔日进行细胞换液，第5天实验组转染LILRB2受体干扰RNA，空白对照组转染空质粒，对照组单纯换液。培养过程中观察细胞形态学变化，并于转染72 h后，光镜下观察DC形态，用流式细胞仪测定细胞表面CD11c、CD80和CD86分子表达。结果光镜下对照组与实验组均可见 DC 细胞形态，流式细胞仪测定实验组 CD11c （0.662±0.174）（n=12）与空白对照组 CD11c（0.675±0.237）和对照组（0.688±0.076）分子表达无明显差异（P＞0.05）。实验组 DC 细胞表面 CD80（0.626±0.060）较空白对照组 CD80（0.406±0.163）（n=12）和对照组CD80（0.409±0.100）表达均增加（P＜0.05）。实验组DC细胞表面CD86（0.730±0.102）较空白对照组CD86（0.497±0.278）和对照组CD86（0.368±0.073）表达均增加（P＜0.05）。结论应用LILRB2受体干扰RNA不影响DC细胞表面CD11c分子表达，而增加细胞表面CD80和CD86分子表达。细胞表面CD80和CD86分子作为免疫反应的重要协同刺激分子在抗原提呈细胞表面表达升高，则激活T细胞免疫反应的能力增强。
-
IL-4对小鼠骨髓树突状细胞表面分子CD11c、CD80、CD86表达的影响及其意义
目的：探讨IL-4对小鼠骨髓树突状细胞（DC细胞）表面分子CD11c、CD80、CD86表达的影响及其意义。方法对照组（n＝5只，30孔）应用20 ng/ml GM-CSF，实验组（n＝5只，30孔）应用20 ng/ml GM-CSF＋20 ng/ml IL-4分别刺激小鼠骨髓细胞生长，隔日进行细胞换液，观察并对比细胞形态学变化，流式细胞仪测定 DC 细胞表面相关分子表达。结果实验组诱导小鼠骨髓细胞第7日观察可见DC细胞形态，对照组第7日未发现明显DC细胞形态，流式细胞仪测定实验组 CD11c（0.546±0.289）、CD80（0.506±0.085）、CD86（0.562±0.260）表达分别较对照组CD11c（0.236±0.058）、CD80（0.279±0.096）、CD86（0.237±0.070）表达明显增高（P＜0.05）。结论 IL-4可以促进小鼠骨髓DC细胞表面分子CD11c、CD80、CD86表达，促进DC细胞分化成熟。
-
免疫治疗对支气管哮喘小鼠树突细胞共刺激分子的影响
目的应用卵白蛋白(OVA)建立特异性免疫治疗小鼠模型,探讨特异性免疫治疗对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠树突细胞(DC)表面分子CD80、CD86表达的影响.方法 120只BALB/c小鼠按随机数字表法分为哮喘模型组(A组)40只:用0.1% OVA 10 μg连续腹腔注射(共70 μg)及1% OVA雾化吸入(共300 mg);免疫治疗模型组(B组)40只:用与A组同剂量的OVA致敏和激发,同时连续尾根部皮下注射OVA 1 mg;对照组(C组)40只:以磷酸盐缓冲液代替OVA,其余同A组.留取各组肺组织切片,经苏木精-伊红(HE)染色观察炎症反应;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清OVA特异性免疫球蛋白IgE(sIgE)及脾脏T淋巴细胞中白细胞介素2(IL-2)和IL-4的分泌.分离各组小鼠脾脏DC,用流式细胞仪检测其表面CD80、CD86分子表达.分离正常小鼠脾脏T淋巴细胞,与上述各组DC共培养;用ELISA法检测T淋巴细胞IL-4、IL-5的分泌量;用3H-胸腺嘧啶核苷(3H -TdR)掺入法检测其增殖反应.结果 (1)B组小鼠肺组织中支气管及血管周围以大量淋巴细胞和嗜酸粒细胞为主的炎性细胞浸润明显轻于A组,但并未完全消失;A组血清sIgE吸光度(A)值为712±129,B组为124±59,C组为20±13,A、C组间比较差异有统计学意义(P<0.05),B、C组比较差异无统计学意义(P>0.05).B组T淋巴细胞分泌IL-2、IL-4水平分别为(8±3)、(8.4±4.3) pg/ml,A组分别为(22±8)、(32.4±12.1) pg/ml,C组分别为(6±4)、(5.1±1.1) pg/ml,A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05); (2)B组DC表面CD86、CD80阳性表达率分别为58.23%、95.63%,A组分别为77.59%、96.98%,C组分别为77.37%、77.84%; (3)与B组DC共培养的正常小鼠T淋巴细胞体外经OVA刺激后,IL-4、IL-5水平分别为 (10.8±2.3)、(18.8±3.8 ) pg/ml,A组分别为 (17.3±4.7)、(35.7±7.9) pg/ml,C组分别为(5.7±2.7)、(11.0±2.2) pg/ml,A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05);B组DC与正常小鼠T淋巴细胞共培养时,刺激指数(SI)为3.8±0.7,A组为11.5±3.2,C组为5.8±1.5,A、B组间比较差异有统计学意义(P<0.05);B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论建立了OVA特异性免疫治疗小鼠模型;DC表面CD86分子表达的下调可能是OVA特异性免疫治疗诱导T淋巴细胞功能丧失的机制之一.
-
狼疮性肾炎肾组织CD80与CD86的表达及其意义
目的 研究T淋巴细胞活化分子CD80与CD86在狼疮性肾炎患者肾组织中的表达变化及其与临床指标之间的相关性.方法 肾组织标本来源于2004年12月-2008年10月哈尔滨医科大学附属第一医院住院患者,其中女性44例,男性5例,年龄(28±16)岁.用免疫组织化学法检测狼疮性肾炎及微小病变患者肾组织中的CD80与CD86的表达情况,免疫比浊法检测24 h尿蛋白定量,全自动生化分析仪检测血尿素氮、血肌酐及血浆白蛋白等临床指标.结果 CD80在肾小管上皮细胞、肾间质有阳性表达,在肾小球无表达,而CD86在肾小管上皮细胞、肾间质及肾小球均有表达.CD80与CD86在肾小管间质中的表达水平随着狼疮性肾炎患者肾小管间质病变程度的加重而增强(r=0.574,P<0.001;r=0.534,P<0.001),且CD80的表达与CD86的表达成正相关.CD80与CDB6的表达与患者系统性红斑狼疮疾病活动指数积分(r=0.319,P=0.011;r=0.324,P=0.011)、24 h尿蛋白定量(r=0.424,P=0.003;r:0.408,P=0.004)、肌酐清除率(r=-0.535,P=0.000;r=-0.543,P=0.000)及抗dsDNA抗体滴度(r=0.353,P=0.012;r=0.359,P=0.013)具有明显相关性.结论 CD80与CD86在狼疮性肾炎患者肾组织中的表达水平与肾间质病变具有明显相关性,并且与狼疮性肾炎患者肾活检时的肾功能及活动性明显相关.
-
妊娠早期阻断协同刺激分子诱导自然流产模型孕鼠脾脏细胞母-胎免疫耐受的研究
目的探讨阻断协同刺激分子--CD80和CD86对自然流产模型孕鼠妊娠结局及孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原免疫耐受状态的影响.方法将雌性小鼠(CBA/J)分别与BALB/c及DBA/2两种雄性小鼠合笼交配,分别建立正常妊娠模型CBA/J×BALB/c(20只,对照组)和自然流产模型CBA/J×DBA/2(20只,研究组).CBA/J小鼠于妊娠第4天(着床期)腹腔分别注射大鼠同型IgG 0.2 mg(10只),或大鼠抗小鼠CD80和CD86单克隆抗体(10只).妊娠第9天,采用单向混合淋巴细胞反应,分析孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力,并测定细胞培养上清液中白细胞介素2(IL-2)水平,以研究脾脏细胞母-胎免疫耐受状态;妊娠第14天观察两组的胚胎吸收率.结果 (1)研究组中,腹腔注射大鼠IgG的孕鼠胚胎吸收率为24.3%,而注射大鼠抗小鼠CD80和CD86单克隆抗体的孕鼠胚胎吸收率为9.8%,两者比较,差异有显著性(P<0.05).(2)应用大鼠抗小鼠CD80和CD86单克隆抗体,使妊娠 9 d的孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的增殖能力及IL-2水平显著下降(P<0.05).结论孕早期阻断协同刺激分子,可诱导产生孕鼠脾脏免疫细胞对父系抗原的免疫耐受,从而使自然流产模型孕鼠的妊娠结局达到正常妊娠水平.
-
共刺激分子B7基因诱导小鼠抗子宫颈癌主动免疫的研究
目的探讨共刺激分子B7基因能否在体内诱导小鼠抗宫颈癌主动免疫应答。方法将B7基因转染小鼠宫颈癌细胞株即U14，建立高表达B7的U14细胞株即B7+U14。随后分4组进行体内实验：(1)实验A组：将B7+U14（1×107个细胞）接种于同系615小鼠的右侧背部皮下（n=6）。(2)实验B组：用B7+U14（1×106个细胞）皮下注射免疫615小鼠，7 d后将U14（1×107个细胞）接种于免疫后的小鼠背部皮下（n=6）。(3)对照A组：在615小鼠右侧背部皮下接种U14（1×107个细胞），其余条件同实验A组。(4)对照B组：用U14（1×106个细胞）免疫615小鼠，其余条件同实验B组。观察4组小鼠的成瘤情况、生存时间；体外分别检测经B7+U14和U14免疫后的小鼠（n=4×2）T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 (1)小鼠皮下接种B7+U14后，体内的致瘤能力明显降低（P<0.01）。(2)用B7+U14免疫后再皮下接种U14可有效预防移植瘤产生（P<0.01）。(3)体外检测经B7+U14和U14免疫后的小鼠T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞作用，前者明显高于后者（P<0.01）。结论 B7基因转染小鼠宫颈癌细胞株U14能诱导机体有效的抗肿瘤主动免疫应答，提示应用B7基因转染法可能成为临床治疗宫颈癌的有效方法。
-
白细胞介素12和共刺激分子B7-1联合修饰肿瘤细胞疫苗诱导抗肿瘤免疫治疗的实验研究
目的探讨经白细胞介素12(IL-12)和共刺激分子(costimulatory molecule)B7-1基因联合修饰的肿瘤细胞疫苗诱导机体抗肿瘤免疫反应,对大鼠卵巢上皮癌腹腔转移瘤的治疗效果.方法采用酶切、去磷酸化、连接、重组的方法,构建携带B7-1基因的逆转录病毒表达载体pLmB7-1SN ,以脂质体介导法,建立高表达细胞株NuTu-19/B7-1、NuTu-19/IL-12及双基因联合表达细胞株NuTu-19/IL-12-B7-1,并以转染空载体pLXSN的细胞NuTu-19/Neo为对照组.观察各组细胞在大鼠体内的致瘤性;将经丝裂霉素C处理的各组肿瘤细胞,以皮下接种方式免疫动物,观察其对卵巢癌腹腔转移大鼠模型生存期的影响,及对大鼠脾淋巴细胞增殖及诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的作用.结果本研究构建pLmB7-1SN成功.建立的NuTu-19/B7-1、NuTu-19/IL-12和NuTu-19/IL-12-B7-1细胞株中mB7-1和mIL-12稳定表达.与对照组细胞相比,各组肿瘤细胞在动物体内的致瘤性有不同程度下降.B7-1组[NuTu-19/BT-1(B7-1单独免疫)]和IL-12组[NuTu-19/IL-12(IL-12单独免疫)]大鼠的脾淋巴细胞增殖指数(PI)分别为2.4和4.6,后者与对照组(PI=1.05)相比,差异有显著性(P<0.05),而联合组[NuTu-19/IL-12-B7-1(IL-12+B7-1联合免疫)]PI为10.2,与对照组和B7-1组、IL-12组相比,差异有极显著性(P<0.01).诱导CTL杀伤活性的作用,B7-1组(15.0%)和IL-12组(31.5%)明显强于对照组(2.6%)(P<0.05,P<0.01);而联合组(52.4%)与对照组、B7-1组及IL-12组相比,差异均有显著性(P<0.05).B7-1组或IL-12组荷瘤动物生存期均有所延长(分别为56.2 d和59.8 d),但与对照组(53.4 d)相比,差异无显著性(P>0.05),而联合组(66.0 d)与对照组相比,差异有显著性(P<0.05). 结论 IL-12和B7-1联合制备的肿瘤细胞疫苗,通过刺激CTL增殖、成熟和增强CTL对肿瘤细胞的识别及杀伤活性,诱导机体抗肿瘤免疫反应, 对提高卵巢癌的治疗效果具有重要意义.
-
CD80基因导入人卵巢癌细胞系及其体外诱导细胞毒T淋巴细胞的研究
目的 用逆转录病毒载体将CD80基因导入人卵巢癌细胞系TYK，观察表达CD80基因的TYK(TYK-hCD80)细胞体外诱导细胞毒T淋巴细胞（CTL）的增殖及其杀瘤活性。方法 用逆转录病毒载体将CD80基因导入TYK细胞，流式细胞仪测定其CD80基因的表达。用TYK-hCD80细胞在抗CD3单克隆抗体(单抗)存在下刺激外周血单个核细胞（PBMC），诱导CTL，3H-胸腺嘧啶核苷掺入法测定其增殖活性，四甲基偶氮唑蓝法测定CTL的杀瘤活性。结果 转染后经G418(geneticin, 是一种氨基糖甙类抗生素)筛选，流式细胞仪检测，CD80基因表达率高为84.9%。TYK-hCD80、TYK在抗CD3单抗存在下刺激PBMC增殖时，3H-胸腺嘧啶核苷掺入量分别为（40 604±842）、（8 000±594） cpm，两者比较，差异有显著性（P<0.05）。TYK-hCD80体外诱导的CTL较TYK诱导者对TYK细胞的杀伤率显著增高(P<0.05)。 结论 表达CD80基因的卵巢癌细胞在抗CD3单抗存在下能诱导产生CTL，增殖快且有较高的杀伤活性，可能为卵巢癌的免疫基因治疗提供实验依据。
-
过敏性紫癜患儿外周血树突状细胞诱导自体T淋巴细胞增殖反应水平的研究
目的 研究过敏性紫癜(HSP)患儿外周血树突状细胞诱导自体T淋巴细胞增殖反应的能力.方法 采用粒-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-4和肿瘤坏死因子-α联合培养诱导HSP患儿外周血树突状细胞,通过流式细胞仪检测树突状细胞协同刺激分子CD80、CD86的表达及MTT法检测树突状细胞诱导自体T淋巴细胞增殖反应的水平.结果 HSP患儿外周血树突状细胞诱导自体T淋巴细胞增殖反应的能力明显高于对照组,差异有非常显著性(P<0.01).协同刺激分子CD86的平均荧光强度(51.2±7.4)明显高于对照组(37.3±6.5),差异有非常显著性(P<0.01);CD80的表达虽然较对照组稍有升高,但差异无显著性(P>0.05).结论 HSP患儿外周血树突状细胞诱导自体T淋巴细胞增殖反应的能力明显增高.
