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常见舌苔舌上皮细胞凋亡及其相关基因表达研究
目的:检测常见舌苔舌上皮细胞凋亡情况及凋亡相关基因bax、fas、 TGF-β3 mRNA和蛋白产物,探讨舌苔厚度变化与舌上皮细胞凋亡、凋亡相关基因表达的关系.方法:运用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记)技术、原位杂交、免疫组化和图像分析技术.结果:与正常薄苔比较,剥苔bax、fas基因过度表达伴随细胞凋亡增多,而厚苔bax、TGF-β3基因低表达伴随细胞凋亡减少.舌苔上皮细胞中促凋基因bax、fas、TGF-β3表达水平变化趋势与细胞凋亡水平变化趋势一致.结论:凋亡相关基因bax、fas、TGF-β3表达水平的变化可能是影响舌苔上皮细胞凋亡并导致舌苔厚度变化的重要原因.
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还脑益聪方对认知功能障碍大鼠认知功能及海马Bcl-2,Bax蛋白表达的影响
目的:观察还脑益聪方对复合因素所致大鼠认知功能障碍模型认知功能、海马区细胞凋亡情况及相关基因表达的干预作用.方法:SD大鼠60只,按随机方法分为中高组、中低组、阳性组、模型组及空白组.空白组每日皮下注射等量生理盐水,共10周,并饲喂普通饲料至第10周末;其他各组每日皮下注射D-半乳糖50 mg·kg~(-1)体重,共10周,并于第5周开始同时给予半高脂饲料饲喂.第7周开始,中药高、低剂量组均给予还脑益聪方混悬液0.01 mL·g~(-1)体重灌胃(用药量分别为生药14 g·kg~(-1)体重及生药7 g·kg~(-1)体重);阳性药对照组给予盐酸多奈哌齐混悬液0.01 mL·g~(-1)体重灌胃(用药量为0.4 mg·kg~(-1)体重);模型与空白对照组均给予等量蒸馏水;灌胃每日1次至第10周末.观察各组动物行为学的变化海马区细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白Bcl.2,Bax的变化.结果:水迷宫试验显示,模型组潜伏期明显延长,穿台次数明显减少,和空白组比较有显著差异(P<0.05,P<0.01),中高组及阳性组穿台次数与模型组比较,有显著性差异(P<0.05,P<0.01);模型组海马凋亡细胞数量明显增加,和空白组比较有显著差异(P<0.01),中高组、中低组及阳性组均可减少海马细胞凋亡数量,提高Bcl-2与Bax的比值,差异有统计学意义(P<0.01).结论:还脑益聪方能改善认知功能障碍大鼠学习记忆能力,通过抑制海马细胞凋亡,调节相关基因表达,加速细胞修复,保护损伤脑组织作用,可能是其临床效应的部分途径.
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肺癌组织中细胞凋亡的初步观察
目的探讨肺癌组织中细胞凋亡的状况。方法对38例肺癌组织及21例肺良性疾病组织，应用TUNEL技术对细胞凋亡情况进行了检测，并对阳性细胞进行计数，对凋亡指数予以定义。结果肺癌组织中的凋亡指数(3.73%±2.42%)高于肺良性病组织(0.77%±0.50%)(P<0.01)；Ⅰ～Ⅱ期肺鳞癌的凋亡指数(1.9%±0.96%)明显低于Ⅲ期肺鳞癌的凋亡指数(5.28%±1.89%)( P<0.01)；而在肺腺癌中各期之凋亡指数无明显差异(P>0.05)。结论细胞凋亡可能在肺癌的发生发展中发挥一定的发作用，对肺癌的诊断、判断预后有重要的参考价值。
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以细胞凋亡指数为指标研究视网膜神经元细胞损伤中存在的问题
笔者在近几年的审稿、研究生学位论文答辩和文献阅读中，注意到在部分涉及以细胞凋亡和细胞凋亡指数为指标，评价视网膜神经元细胞受损伤情况的基础研究工作，尤其以末端核苷酸转移酶介导的生物素dUTP切口末端标记(TDT-mediated biotinylated-dUTP nick-end labeling,TUNEL)技术原位观察细胞凋亡和以此为基础计算细胞凋亡指数的研究工作中，存在一些明显且原则性的问题，集中表现为TUNEL技术的显色结果图片质量较低，无法反映细胞凋亡概念中所述的基本表现，由此计算的细胞凋亡指数缺乏准确性和可重复性。
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细胞凋亡及bax基因表达与舌苔变化关系的研究
目的:检测常见舌苔舌上皮细胞凋亡情况及凋亡相关基因bax mRNA和蛋白产物,探讨舌苔厚度变化与舌上皮细胞凋亡、bax基因表达的关系.方法:运用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端标记)技术、原位杂交、免疫组化和图像分析技术.结果:与正常薄苔比较,剥苔bax基因过度表达伴随细胞凋亡增多,而厚苔bax基因低表达伴随细胞凋亡减少.bax基因表达水平变化趋势与细胞凋亡水平变化趋势一致.结论:bax基因表达水平的变化可能是影响舌苔上皮细胞凋亡并导致舌苔厚度变化的重要原因.
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增生性玻璃体视网膜病变增殖膜的免疫组织化学及细胞凋亡研究
目的检测增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增殖膜标本中细胞Fas、Fas配体(Fas ligand,FasL)的表达和凋亡,并探讨Fas/FasL与凋亡的关系.方法通过免疫组织化学的方法检测12例增殖膜标本Fas和FasL的表达,TUNEL技术检测凋亡细胞.结果PVR增殖膜标本中Fas和FasL阳性细胞百分率分别为60.6%和43.75%,偶见两者同时表达的细胞.5例前膜和2例下膜标本可见TUNEL染色阳性细胞核.凋亡与Fas、FasL相关系数均为0.77(t=3.82,P＜0.05),PVR病程与凋亡的r值为0.74(t=3.11,P＜0.01).结论Fas、FasL高表达与凋亡的正相关性提示,通过Fas/FasL系统诱导增殖细胞及炎症细胞凋亡,可能成为临床防治PVR的新策略.
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TUNEL技术方法的探讨
探讨末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术（TUNEL）的染色方法，以期提高特异性与敏感性。采用以去势（经手术切除睾丸）后天数不同的大白鼠前列腺，用TUNEL法染色，观察不同时期的细胞凋亡水平，对经典的TUNEL法进行改良，将染色结果与TUNEL经典法和HE染色法进行对比。结果表明：采用改良法后，阳性细胞明显增加，而且着色深，凋亡指数明显增高(P<0.01) 。
关键词： TUNEL技术 凋亡 去势 末端脱氧核苷酸转移酶 凋亡指数 -
根除幽门螺杆菌对胃窦黏膜萎缩的逆转作用
目的评价5 a随访根除幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对胃窦黏膜萎缩的逆转作用并探讨其机制.方法采用前瞻性队列研究方法,选择110例慢性萎缩性胃窦炎患者作为观察对象.Hp阳性患者根据自愿原则采用根除Hp治疗或采用对照治疗.全部病例跟踪随访5 a.采用TUNEL技术及免疫组化染色检测胃黏膜上皮细胞凋亡和增殖情况.结果Hp阳性观察组患者胃黏膜萎缩程度在5 a中加重的比例高达43%,显著高于Hp根除观察组及Hp阴性对照组(13%和20%,P＜0.05).Hp根除观察组胃窦黏膜萎缩程度减轻的病人比率为29%,显著高于Hp阳性观察组(9%,P＜0.01).Hp阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数及PCNA指数(12.7%,14.6%)均显著高于Hp阴性患者(2.9%,8.0%,P＜0.01),Hp根除后胃黏膜上皮细胞PC-NA指数和凋亡指数(14.3%,12.9%)均显著下降(9.2%,3.6%,P＜0.01),而Hp未根除者上述指标则无显著性变化.结论Hp感染可能通过刺激胃黏膜上皮细胞凋亡与增殖的调节紊乱,促进胃窦黏膜萎缩的形成与发展.根除Hp治疗可以使胃窦黏膜萎缩程度减轻和逆转.
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丁型肝炎病人肝组织中HDAg和肝细胞凋亡双标记表达
目的探讨肝细胞凋亡在丁型肝炎发病机制中的作用.方法采用免疫组化双重染色和TUNEL技术,检测79例丁肝病人肝组织HDAg和肝细胞凋亡分布及其关系,以54例乙型肝炎病人肝组织作对照.结果 HDAg以肝细胞核表达为主,HDAg、凋亡细胞表达分布与肝组织病理损害程度一致(P<0.01).多数凋亡细胞位于HDAg阳性部位或附近,肝细胞凋亡在各型肝炎中的分布强度差别有显著性意义(P<0.01).结论 HDAg表达与肝细胞凋亡分布之间有显著的相关性,肝细胞凋亡在丁型肝炎发病机制中可能有一定的重要作用.
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FLIP在非小细胞肺癌中的表达及其与细胞凋亡的关系
目的研究FLIP在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达并观察其与细胞凋亡的关系.方法采用免疫组化技术检测FLIP在48例NSCLC和16例肺良性疾病组织中的表达,并应用TUNEL技术检测48例NSCLC的凋亡情况.结果肺癌组织中FLIP的表达率为83.33%(40/48),明显高于肺良性病变组织(25.00%)(P＜0.01).FLIP的表达水平与TNM分期及淋巴结转移有密切关系,但与肿瘤组织学分型、分化程度无明显关系.FLIP在肺癌组织中的表达水平与癌细胞凋亡指数(AI)未见明显相关性(r＝-0.211,P＞0.05).结论 FLIP的过量表达在NSCLC的发生发展中起重要作用,但与细胞凋亡无明显关系.
