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RNAi靶向沉默FLIP基因促进TRAIL诱导卵巢癌A2780细胞凋亡
目的 探讨RNAi靶向沉默FLIP基因对TRAIL诱导卵巢癌细胞凋亡的影响.方法 设计并体外化学合成FLIP序列特异性双链RNA,在脂质体(LipofectamineTM2000)介导下转染人卵巢癌细胞株A2780.采用半定量RT-PCR和Western blot法检测FLIP-siRNAs转染前后A2780细胞FLIP mRNA和蛋白表达的变化,并筛选出抑制作用强的FLIP-siRNA.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测FLIP-siRNA转染前后TRAIL对A2780细胞生长抑制作用的变化.以Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)比较FLIP-siRNA转染前后TRAIL诱导的细胞凋亡的情况.结果 特异性FLIP-siRNA片段能有效降低A2780细胞中FLIP mRNA和蛋白水平(P<0.01),并具有时间依赖性;转染FLIP-siRNA后,TRAIL对A2780细胞的生长抑制作用明显增强(P<0.05),TRAIL诱导的细胞凋亡也显著增加(P<0.05).结论 靶向FLIP基因的siRNAs可在转录和翻译水平抑制FLIP表达,并可增加细胞对TRAIL的敏感性.
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环孢菌素通过FLIP影响再生障碍性贫血患者CD8+T细胞亚群CD28的表达
目的 研究共刺激分子CD28在再生障碍性贫血(AA)患者的不同T细胞亚群中的表达变化,及其与凋亡抑制蛋白FLIP的关系.方法 取21例AA患者环孢菌素A(CyA)治疗前后的外周血,应用流式细胞仪检测T细胞CD4CD28、CD8CD28的表达;磁珠分选患者治疗前后外周血的CD8+T细胞,RT-PCR检测治疗前后FLIP、Caspase-8表达变化;分选获得的治疗前的CD8+T细胞体外经CyA处理后检测其CD28、FLIP、Caspase-8的表达变化.结果 AA患者的CD8+CD28-T细胞的比例较正常人显著升高,治疗有效者该亚群的细胞比例在治疗后趋于正常;患者CD8+T细胞的FLIP表达显著上调,但Caspase-8的表达无明显变化;CyA能下调患者CD8+T细胞的FLIP的表达.结论 AA患者CD8+CD28-T细胞亚群比例升高与FLIP表达增加有关,CyA能抑制FLIP的表达,降低CD8+CD28-T细胞的比例.
关键词： 再生障碍性贫血 CD8+CD28-T细胞 FLIP 环孢菌素A -
中药淫羊藿苷逆转肝癌HepG2.2.15细胞恶性表型及诱导分化研究
目的: 探讨淫羊藿苷(ICA)诱导HepG2.2.15细胞分化凋亡的作用机制.方法:MTT法检测细胞增殖;流式细胞术(FACS)检测细胞周期分布;RT-PCR方法检测P27基因、FLIP基因mRNA表达水平的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测ICA处理后HepG2.2.15细胞凋亡的变化;电化学发光法和速率散射比浊法分别检测ICA处理后HepG2.2.15细胞上清液中甲胎蛋白(AFP)和转铁蛋白(Tf)水平变化.结果: ICA作用HepG2.2.15细胞增殖呈抑制作用, 具有时间依赖性. ICA处理后, HepG2.2.15细胞周期各时相分布与对照组相比发生变化, G0/G1期升高, S期减小, 与对照组相比有显著性差异(56.26±1.56% vs 49.68±1.34%, 19.95±1.24% vs 28.02±1.03%;P<0.01). ICA分别上调HepG2.2.15细胞P27和下调FLIP基因mRNA的表达水平(0.78 vs 0.27, 0.54 vs 0.90);HepG2.2.15细胞凋亡率增加, AFP下降, Tf水平升高, 与对照组相比均有显著性意义(7.09% vs 0.59%, 156±46 mg/L vs 285±58 mg/L, 152.1±26 mg/L vs 67.1±24 mg/L;P＜0.05).结论:ICA可能通过升高G0/G1期, 减少S期抑制HepG2.2.15细胞的增殖;上调P27 mRNA和Tf水平, 下调FLIP mRNA的表达和AFP合成的水平来诱导细胞分化.
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FLIP干扰性小RNA促进大肠癌细胞的凋亡
目的:研究对应FLIP基因的siRNA片段对大肠癌细胞株HT-29凋亡的影响,明确FLIP在Fas介导的凋亡途径中的作用.方法:体外培养大肠癌细胞HT-29,通过电穿孔技术将特异性siRNA片段转染入细胞,半定量RT-PCR法判断干扰前后FLIP mRNA水平的变化,分析RNA干扰的特异性、时效性,并比较对应不同位点的两个siRNA片段对FLIP的干扰效果.经凋亡诱导型抗体激活后,以Annexin V染色法及DNA降解片段检测分析干扰前后HT-29细胞对Fas介导的凋亡敏感性的改变.结果:特异性siRNA片段能有效降低FLIP mRNA水平,大干扰效率达65.02%,明显高于作为对照的非相关片段;干扰作用于转染后24 h即可出现,48 h达高峰,72 h稍有降低;对应不同位点的两个siRNA片段对FLIP均可产生干扰作用,彼此间差别不大.在诱导型抗体的刺激下,与未转染细胞相比,转染siRNA的HT-29细胞中凋亡细胞所占比例明显增加.结论:特异性siRNA片段可显著降低FLIP基因mRNA的表达水平,并提高HT-29细胞对Fas介导的凋亡敏感性.以FLIP为靶点的RNA干扰技术可望成为大肠癌基因治疗的新方法.
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凋亡抑制蛋白FLIP在肝癌组织中的表达和意义
目的 检测凋亡抑制蛋白FLIP在人肝癌不同分化组织中的表达并揭示其在肝癌发生发展中的意义.方法 采用免疫组织化学技术,分析86例肝癌标本(采用经典的Edmondson四级分级法,Ⅰ级18例,Ⅱ级25例,Ⅲ级21例,Ⅳ级22例),肝癌Hepg2细胞系1株细胞爬片的10样本中FLIP蛋白的表达并进行统计学分析比较.结果 凋亡抑制蛋白FLIP在86例肝癌标本中有72例阳性表达(83.72%),Ⅰ级13/18(72.22%),Ⅱ级20/25(80.00%),Ⅲ级18/21(85.71%),Ⅳ级21/22(95.45%)(P＜0.05);在肝癌Hepg2细胞系细胞爬片10个样本中全部阳性表达(100%),(P＜0.01).结论 凋亡抑制蛋白FLIP在肝癌组织中呈阳性表达;不同分化的肝癌组织其表达阳性率不同,分化越差其阳性表达率越高;这可能为揭示肝脏恶性肿瘤的发生、发展提供新的理论依据,并为肝癌的有效治疗提供新的思路.
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骨肉瘤组织FLIP和FADD及Caspase-8蛋白表达与细胞凋亡相关性的研究
目的:探讨FLIP、FADD和Caspase-8在人骨肉瘤组织及骨软骨瘤组织中的表达及其与骨肉瘤细胞凋亡的关系.方法:应用免疫组化法检测FLIP、FADD和Caspase-8蛋白在43例骨肉瘤组织及30例骨软骨瘤组织中的表达,并经图像分析系统检测FLIP、FADD和Caspase-8蛋白的平均光密度(OD)值.用激光扫描共聚焦显微镜检测骨肉瘤及骨软骨瘤中细胞凋亡分布情况并对各因子之间进行相关性分析.结果:FLIP蛋白阳性物质在骨肉瘤中的表达高于骨软骨瘤,P<0.05;而FADD 和 Caspase-8蛋白在骨肉瘤中的表达低于骨软骨瘤,P<0.05.FLIP和Caspase-8蛋白在骨肉瘤中表达呈负相关,r=-0.843,P<0.05;而FLIP、FADD蛋白在骨肉瘤中表达无相关性.骨肉瘤组细胞凋亡指数(AI) 显著低于骨软骨瘤组,P<0.05;FLIP蛋白表达与细胞凋亡指数呈负相关,r=-0.726,P<0.05;而Caspase-8蛋白表达与骨肉瘤细胞凋亡呈正相关,r=0.446,P<0.05; FADD蛋白表达与与凋亡指数无相关性.结论:FLIP蛋白对骨肉瘤细胞凋亡有抑制作用,Caspase-8蛋白在骨肉瘤中呈低表达,抑制了肿瘤细胞凋亡.如能抑制FLIP的表达,促进Caspase-8的表达,可提高骨肉瘤细胞对凋亡的敏感性.
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FLIP基因在乳腺癌组织中表达的初步研究
目的:探讨FLIP基因(包括蛋白和mRNA水平)在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌生物学行为的影响.方法:采用免疫组化和荧光实时定量PCR技术,检测乳腺浸润性导管癌和正常乳腺组织中FLIP蛋白及mRNA的表达.结果:FLIPL/S蛋白在浸润性导管癌中的平均染色积分为6.13±0.34,在正常乳腺组织中的平均染色积分为2.68±0.30,两组有显著性差异(P＜0.05).FLIPL、FLIPS mRNA在浸润性导管癌中的含量均高于正常乳腺组织(P＜0.05).结论:FLIP在乳腺癌组织中高表达,可能通过阻断凋亡通路参与乳腺癌的发生.
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FLIP与肿瘤细胞TRAIL介导的凋亡信号调节
细胞凋亡是一种重要的调节程序,主要是在机体内维持细胞的稳定性.由于所有细胞都具有这种凋亡能力,强大的抗凋亡机制必须存在以调节细胞凋亡.因此.细胞内有广泛的抗凋亡蛋白,如Bcl-2和lAP家族.在大多数细胞类型中凋亡可以被Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(即FLIP)抑制,由于它在死亡受体介导的细胞凋亡信号传导中的抑制效应而被广泛关注.许多研究表明FLIP在肿瘤、自身免疫性疾病和心血管等疾病中表达失调.
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FLIP、FADD在上皮性卵巢癌中表达及其临床意义
目的:研究FLIP、FADD在上皮性卵巢癌组织中的表达情况,探讨二者在上皮性卵巢癌发生发展中的作用及其临床意义.方法:采用免疫组化SP法及RT-PCR法检测44例上皮性卵巢癌及17例正常卵巢组织中FLIP、FADD的表达,并检测上皮性卵巢癌中PCNA的表达,分析FLIP,FADD表达与上皮性卵巢癌临床病理参数及PCNA表达的关系.结果:FLIP、FADD在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率,与正常卵巢组织相比,差异有统计学意义(P<0.05). FLIP,FADD表达与上皮性卵巢癌病理分级及临床分期有关,FLIP、FADD在Ⅰ-Ⅱ期中的阳性表达率,与Ⅲ-Ⅳ期相比,差异有统计学意义(P<0.05). FLIP、FADD在病理组织学-1级中的阳性表达率,与2-3级相比,差异有统计学意义(P<0.05).FLIP、FADD的表达与患者年龄、组织学分型及淋巴结转移无关.上皮性卵巢癌组织中FLIP表达与PCNA表达成线性正相关,r分别0.880和0.564;FADD表达与PCNA表达成线性负相关,r分别为-0.591和-0.683.结论:FLIP、FADD与上皮性卵巢癌的发生发展密切相关,可能是治疗上皮性卵巢癌的潜在靶点.
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FLIP、Caspese 8及MTA1在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其临床意义
目的:研究凋亡抑制蛋白FLIP,Caspase8,肿瘤转移相关基因MTA1在上皮性卵巢肿瘤中表达及其意义,探讨它们与卵巢癌临床病理指标之间的关系.方法:应用免疫组化SP法,检测FLIP、Caspase8、MTA1在98例上皮性卵巢肿瘤(包括18例良性囊腺瘤,20例交界性囊腺瘤和60例卵巢癌)的表达情况.结果:FLIP、Caspase8及MTA1在卵巢交界性囊腺瘤和卵巢癌中的表达均分别明显高于卵巢良性囊腺瘤(P＜0.05),FLIP、MTA1的表达在组织学分型、分化程度之间无显著性差异(P＞0.05).而与卵巢癌的FIGO分期及有无转移之间有显著性差异(P＜0.05).并且FLAP和Caspase8成负相关关系.结论:FLIP、MTA1在卵巢癌中的发生发展中起重要作用.期望能为判断卵巢癌的生物学行为,决定治疗方案提供理论依据.
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淫羊藿苷联合丝裂霉素对肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用
目的 通过将淫羊藿苷(ICA)联合丝裂霉素(MMC)联合作用肝癌HepG2细胞的实验研究,探讨联合药物对HepG2细胞增殖的抑制作用及其可能的机制.方法 MTT法检测不同浓度ICA、MMC或两药联合处理48 h后及未处理组HepG2细胞的增殖活性,通过两药相互作用系数CDI评价两种药物的相互作用性质;RT-PCR检测药物处理后HepG2细胞内凋亡抑制蛋白质FLIP mRNA水平的变化.结果 单独ICA或MMC处理后,均可抑制HepG2细胞的增殖,其抑制率随着药物剂量增加而增强(P＜0.05),呈剂量依赖性;两药联合应用对HepG2细胞增殖的抑制作用明显,其抑制率呈荆量依赖性(P＜0.01),且两药作用具有协同效应(CDI＜1);与未处理组相比,ICA或MMC处理后HepG2细胞内FLIP mRNA水平降低.尤其以联合药物处理组降低更加显著(P＜0.001).结论 ICA与MMC联用可在体外抑制肝癌细胞的增殖,两药具有协同效应,其抑制机制可能通过抑制凋亡抑制蛋白FLIP的表达,从而增加癌细胞的凋亡而实现的.
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FLIP、Smac和survivin蛋白在肺小细胞癌及低分化鳞癌中表达规律及预后相关性研究
目的:通过检测小细胞肺癌(small cell lung carcinoma,SCLC)和低分化鳞状细胞癌(poorly differentiated squamous-cell carcinoma,PDSCC)中FLICE抑制蛋白(FLICE inhibitory protein,FLIP)、促凋亡蛋白Smac(second mitochondrial activator of caspase,Smac)、抗凋亡因子survivin的表达,探讨小细胞肺癌及低分化鳞癌中FLIP、Smac和survivin蛋白的表达规律及其与临床病理指标及预后的关系,为临床诊断、治疗及预后判断提供新的理论依据.方法:应用免疫组化S-P法检测肺小细胞肺癌及低分化鳞状细胞癌中FLIP、Smac和survivin阳性表达;应用蛋白印记(Western blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常肺组织及两种癌组织中FLIP、Smac、survivin蛋白和mRNA表达水平.结果:73例肺癌患者1年生存率为64.5％.其中小细胞肺癌60.5％,低分化鳞状细胞癌68.6％.FLIP、Smac及survivin在小细胞肺癌及低分化鳞癌中的表达均与年龄、性别、是否吸烟及淋巴结转移无关(P＞0.05),但Smac的表达与临床分期及生存率有关(P＜ 0.05);Smac在正常组织表达显著高于癌组织(P＜0.05);FLIP及survivin在正常组织中的表达显著低于癌组织(P＜0.05).结论:癌组织中Smac低表达提示低生存率,Smac可作为独立预后指标;FLIP、Smac和survivin联合检测有助于预后判断.
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FLIP、NF-κB在胃癌中的表达及相关性研究
[目的]研究FLIP、NF-κB在胃癌及癌前病变中的表达及两者之间的关系.『方法]运用免疫组织化学染色SP法检测FLIP、NF-κB在45例胃癌与60例癌前病变组织中的表达.[结果]胃癌FLIP、NF-KB蛋白阳性表达分别为82-2%(37/45)、62.2%(28/45),明显高于肠化生的30.0%(9/30)、23-3%(7/30)(/9＜0.01),与异型增生40.0%(12/30)、33.3%(10/30)(P＜0.01).FLIP表达与胃癌临床分期及淋巴结转移相关,与肿瘤分化程度无明显相关性;NF-κB表达与胃癌分化程度、临床分期及淋巴结转移相关(P＜0.05).NF-KB与FLIP呈正相关(r=0.52,P＜0.05).[结论]FLIP与NF-κB异常表达与胃癌的发生发展及预后密切相关;NF-κB与FLIP在胃癌形成中可能起协同作用.
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癌抑素Canstatin的抗肿瘤作用及其机制
Canstatin是一种来源于Ⅳ型胶原α2链非胶原(NC1)区的血管生成和肿瘤生长抑制因子.它能剂量依赖性抑制血管内皮细胞增殖和迁移,诱导内皮细胞凋亡,在体内实验中Canstatin显著抑制实体瘤的生长.Canstatin的抗肿瘤作用可能与诱导凋亡有关,其作用机制在于抑制磷脂酰肌醇3-激酶/Akt(PI3-k/Akt)信号通路,并依赖膜死亡受体介导的信号事件.
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Fas/Apo-1(CD95)系统与细胞增殖研究的进展
Fas/Apo-1(CD95)系统是细胞凋亡研究的热点.近年来,Fas系统在非凋亡信号方面的研究日益受到关注,有报道证明Fas系统与细胞增殖以及细胞分化具有密切的联系.现就Fas系统在细胞增殖方面的研究进展作一综述.
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FLIP在肿瘤中的研究
FLIP是一种含有死亡结构域的蛋白质,人类有3个亚型c-FLIPL、c-FLIPS和c-FLIPR,是多种肿瘤细胞抑制凋亡的主要蛋白,其中c-FLIPL在细胞凋亡信号中起双重作用.FLIP的表达高低不仅可以决定细胞凋亡通路的开闭,同时也能实现细胞在凋亡信号与增殖信号通路间的转换.FLIP表达的调控是多层次的,涉及多条信号通路,有可能成为极具吸引力的死亡受体信号的治疗靶点.
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RNA干扰靶向沉默FLIP基因对卵巢癌细胞A2780生物学特性的影响及生长抑制作用
目的 探讨靶向FLIP基因的小干扰RNA(siRNA)对人卵巢癌细胞A2780生物学特性的影响及生长抑制作用.方法 设计并体外化学合成FLIP序列特异性双链RNA,在脂质体(Lipofectamice TM2000)介导下转染人卵巢癌细胞株A2780.采用半定量RT-PCR和Westem blot法检测FLIP-siRNAs转染前后A2780细胞FLIP基因mRNA和蛋白表达的变化,并筛选出抑制作用强的FLIP-siRNA.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、Annexin-V-PI双染法流式细胞术(KM)分别检测FLIP-siRNA转染时A2780细胞的生长抑制作用和对凋亡的影响.结果 特异性FLIP-siRNAs 片段能有效降低A2780细胞中FLIP的mRNA和蛋白水平(P<0.01),大抑制半分别为77.4%和66.1%;转染阱siRNA后,A2780细胞的生长活力明显下降(P<0.05),RNA干扰组的细胞凋亡也显著增加(P<0.05).站论靶向FLIP基因的 siRNAs可在转录和翻译水平抑制FLIP基因表达;并可抑制卵巢癌A2780细胞生长,促进其凋亡.
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FLIP在肺癌中的表达及其临床意义
目的研究肺癌中FLIP的表达及其临床意义. 方法用免疫组化法检测58例肺癌及16例肺良性疾病组织中FLIP表达水平,并借助HPIAS-1000图像分析系统对结果进行分析.结果 FLIP在肺癌组织中的表达为81.03%,明显高于肺良性病变组织25%; FLIP表达水平与肺癌分期有关,但与病理类型、分化程度无关. 结论 FLIP的过量表达在肺癌的发生发展中起重要作用.
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cFLIP与肿瘤的关系
cFLIP是新近发现的一种参与细胞凋亡的调控蛋白.其过量表达能抑制Fas,TNFR-1,DB3,TRAIL-R等介导的凋亡途径,从而使异常的肿瘤细胞凋亡减少.cFLIP与多种肿瘤的发生发展有关,同时cFLIP还与某些肿瘤的耐药性有关.
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一种新的凋亡抑制蛋白:FLIP
FLIP(FLICE-inhibitory-protein)是近年来发现的一类含有死亡效应结构域(DED)的凋亡抑制蛋白,在病毒、真核生物、哺乳动物等许多物种中广泛存在.FLIP在结构与序列上与Caspase-8有很多相似之处,且能抑制Caspase-8结合到死亡诱导信号复合物(DISC)上,从而阻断Fas介导的凋亡信号转导.因此认为FLIP与炎症、肿瘤及自身免疫性疾病的发生、发展密切相关.对FLIP的进一步研究将有助于深化对这些疾病的认识,并为临床治疗这些疾病提供新的方法和思路.
