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MTA1基因研究进展
恶性肿瘤患者死亡的主要原因是肿瘤细胞发生转移,目前研究发现肿瘤转移相关基因MTA1在肿瘤组织中的表达程度高低与肿瘤的转移能力及侵袭能力成正比.该基因可能通过某种信号通道调节肿瘤转移蛋白的生成进而参与肿瘤的侵袭与转移,因此,可以通过检测MTA1在肿瘤组织中的表达水平为肿瘤的诊断及预后判断提供新的指标.
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人骨肉瘤mta1 mRNA的siRNA载体构建及其对mta1沉默作用
目的 本实验拟构建针对mta1mRNA的siRNA重组载体,将siRNA对应的DNA发卡样双链序列克隆入载体内,位于H1启动子下游,转染人人骨肉瘤细胞内,在细胞内表达mta1靶向的siRNA分子,特异性沉默mta1的表达.方法 依据GenBank中mta1基因(NM-004689)的序列,用设计分析软件进行设计候选序列,确定针对mta1的siRNA序列.合成mta1发卡样siRNA寡核苷酸,退火成双链DNA,克隆入T载体,利用α互补和T7/SP6 PCR扩增筛选鉴定重组子pGEM-T-mta1;用BglⅡ和HindⅢ双酶切重组子pGEM-T-mta1和siRNA表达载体pSuperneo;将双粘mta1发卡样siRNA片段亚克隆入siRNA表达载体pSuperneo中;利用Bg1Ⅱ和HindⅢ双酶切筛选鉴定重组子pSuperneo-mta1;对插入序列进行DNA序列分析.将siRNA表达载体pSuperneo-mtal转入人骨肉瘤细胞系MG-63中,用RT-PCR方法检测细胞mta1mRNA表达水平.结果 转染pSuperneo-mta1的实验组骨肉瘤细胞中mta1mRNA表达几乎完全被抑制,而2个对照组(无关siRNA对照组和空载体对照组)和未转染的骨肉瘤细胞系MG-63细胞中都存在较高水平的mta1mRNA表达.结论 设计出针对mta1的发卡样siRNA寡核苷酸片段,成功构建出针对mta1的siRNA表达载体pSuperneo-mta1,pSuperneo-mta1转染骨肉瘤细胞后能显著降低细胞mta1mRNA表达.
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MTA1、RECK在结肠息肉癌变过程中的表达及意义
目的 研究MTA1、RECK在结肠息肉及结肠癌组织中的表达,探讨MTA1、RECK在结肠息肉癌变过程中的作用.方法 应用免疫组织化学法检测结肠癌组织104例、结肠息肉组织114例,正常结肠黏膜组织30例中MTA1、RECK基因的表达.结果 正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤至结肠癌中MTA1阳性表达率呈逐渐上升趋势(P＜0.05);结肠息肉(中重度异型增生)组中MTA1的阳性表达率高于结肠息肉(轻度异型增生)组(P＜0.05);RECK在正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、结肠癌组中的表达率分别为100.00％、78.57％、77.27％、53.85％.正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤至结肠癌中RECK阳性表达率呈逐渐下降趋势;中重度异型增生结肠息肉中RECK阳性表达率明显低于轻度异型增生结肠息肉,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 结肠癌组织中MTAI呈高表达,RECK表达缺失.MTA1、RECK参与正常组织、癌前病变、癌组织的发生、发展,在结肠息肉的癌变过程中起着重要的作用.
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In Situ PLA技术原位分析MTA1与NuRD复合体其他组分的相互作用
目的：原位检测肿瘤转移相关蛋白MTA1与NuRD复合体其他组分-Mi2、HDAC2及MBD3的相互作用并分析MTA1/NuRD复合体在HCT116细胞中的分布情况。方法首先利用co-IP技术体外验证MTA1与NuRD复合体其他组分Mi2、HDAC2及MBD3在HCT116细胞裂解液中的相互作用。然后利用In Situ PLA技术，体内原位检测MTA1与三者的相互作用，并根据镜下阳性荧光信号数目，比较MTA1与Mi2、HDAC2及MBD3之间的作用强弱；根据相互作用位点的亚细胞分布情况，分析间期及M期MTA1/NuRD复合体的核质分布情况。结果首次从体内原位水平证实MTA1与NuRD复合体其他组分-Mi2、HDAC2及MBD3的相互作用；其作用强度HDAC2高，Mi2次之，MBD3弱；首次发现MTA1/NuRD复合体存在很明显的胞质分布（约占总量的1/4）；另外，我们还首次发现在M期MTA1/NuRD复合体不再位于核区，而是位于染色体外周。结论In Situ PLA技术是一项有效的原位检测蛋白相互作用的新技术；MTA1/NuRD复合体可能参与MTA1胞质中功能的发挥；并且其胞质分布可能参与M期进程调控。
关键词： MTA1 NuRD复合体 相互作用 In Situ PLA技术 -
食管癌细胞系KYSE150中RNA干扰MTA1的基因芯片分析
目的 探讨MTA1对食管癌转移相关基因的影响.方法 用RNA干扰的方法在食管癌细胞系KYSE150中沉默MTA1基因的表达,随后进行转移相关基因芯片分析.以两次芯片分析中均上调2倍以上(或下调1/2)为差异显著基因.通过DIVID生物信息学数据库进行gene ontology的通路分析.结果 在两次基因芯片分析中均有意义上调的基因共有7个,分别是LAMC1、MMP14、MMP15、MDM2、API5、ODC1、PTGS2;而两次均显著下调的基因共有14个,它们是CSF1R、HGF、IGF2、ITGA6、MMP9、MMP11、MMP13、CASP8、CTSD、TMPRSS4、THBS2、TIMP1、ENPP2、SNCG.通过在DAVID生物信息学数据库中对上述表达差异显著的基因进行通路分析,结果提示差异基因主要富集在5条信号通路上,分别是肿瘤信号通路(MDM2、CASP8、CSF1R、HGF、ITGA6、LAMC1、MMP9、PTGS2)、ECM受体整合信号通路(LAMC1、THBS、ITGA6)、基质金属蛋白酶信号通路(TIMP1、MMP9)、小细胞肺癌信号通路(ITGA6、Cox2)和黏着斑信号通路(ITGA6、HGF、IGF2).结论 MTA1参与了转移相关的一系列分子改变事件,尚需进一步的分子生物学方法验证这些基因调控的信号途径.
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以双质粒逆病毒载体系统快速建立梯度过表达hMTA1稳转单克隆细胞系的方法
目的 利用逆病毒表达载体快速构建梯度过表达人MTA1稳转单克隆细胞系.方法 利用噬菌斑原位杂交筛选人肺噬菌体文库,以阳性克隆为模板,RT-PCR获得人MTA1完整CDS序列.以逆病毒表达载体pMX为基础,经过多次酶切连接,构建逆病毒表达载体pMX-MTA1-flag-IRES-EGFP.将构建好的逆病毒载体系统,转染293-gag/pol细胞,包装出含该表达载体的逆病毒颗粒.以含病毒上清多次感染HCT116细胞,获得稳定转染MTA1的HCT116多克隆细胞系.将该多克隆细胞系按合适比例稀释后接种至10cm大皿,获得大量单克隆细胞系,以GFP为筛选标志,筛选不同荧光强度的单细胞克隆进行扩增并分析MTA1与GFP表达水平的线性关系.结果 测序结果显示成功克隆出人MTA1表达序列.免疫荧光、Western Blot结果证实成功构建出梯度过表达MTA1的稳转细胞系.相关性验证结果显示构建的非融合载体MTA1与GFP的表达呈明显的线性相关,相关系数r=0.932,P＜0.01.结论 利用逆病毒表达系统,快速成功构建并筛选出MTA1与GFP非融合梯度过表达稳转单克隆细胞系,为MTA1基因功能研究提供了良好模型.该逆转录病毒平台可用于快速建立其他基因的稳转单克隆细胞系.
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结肠癌组织中MTA1的表达水平及定位与患者预后的相关性研究
目的 研究结肠癌组织中MTA1的表达水平及在细胞核、细胞质内的定位情况,分析其与结肠癌预后的相关性,并探讨其可能的机制.方法 采用免疫组织化学染色方法在结肠癌组织芯片(30例肠癌组织、10例转移组织、8例正常组织)中检测MTA1与Sox2蛋白的表达水平及定位情况,统计分析二者与临床病理资料及预后的相关性;并初步探讨Sox2与MTA1表达的相关性.结果 ①肠癌组织及转移组织中MTA1细胞质染色强度均显著高于正常组织(P＜0.05),而肠癌组织与转移组织间MTA1表达差异不显著(P＞0.05);②MTA1在细胞质的表达强度与临床分期呈正相关(P＝0.03),生存时间＜5年的肠癌患者的肿瘤组织细胞质内MTA1的表达强度显著高于生存时间≥5年的患者组织(P＝0.007);③Sox2在肠癌组织细胞核及细胞质内的表达均与MTA1细胞质表达具有显著的相关性(P＜0.01).结论 MTA1细胞质过表达提示结肠癌预后不良,这可能与Sox2的过表达相关.
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肝细胞癌组织MTA1和MMP-2表达及其相关性研究
目的:研究肝细胞癌(HCC)组织中转移相关基因1(MTA1)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达及其临床意义,并探讨其与HCC生长及浸润转移的关系.方法:采用免疫组化法检测60例HCC组织及癌旁肝组织中MTA1和MMP-2的表达.结果:MTA1及MMP-2在癌组织中的阳性率分别为65.00%和60.00%,而在癌旁组织中的阳性率分别为35.00%和26.67%,癌组织与癌旁组织比较差异有统计学意义,P<0.05.MTA1在人HCC组织中的表达与临床分期、术后复发、肝外转移及门静脉癌栓相关.MMP-2在人HCC组织中的表达与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移及术后复发相关.在癌组织中MTA1与MMP-2的表达呈正相关.结论:HCC中MTA1及MMP-2的高表达与HCC生长及浸润转移有关,在HCC的发生、发展及术后复发过程中起重要作用.
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乳腺肿瘤中nm23-H1、MTA1蛋白表达与癌浸润转移的关系
目的 探讨nm23-H1、MTA1蛋白在乳腺肿瘤中的表达情况,研究其在乳腺癌发生、发展中的生物学意义并观察其与乳腺癌浸润及转移的内在关系.方法 采用免疫组化SP法检测50例乳腺肿瘤组织中nm23-H1和MTA1蛋白的表达情况.结果 乳腺浸润性导管癌组织nm23-H1蛋白阳性表达率明显低于乳腺纤维腺瘤(P＜0.05);乳腺浸润性导管癌组织MTA1蛋白阳性表达率明显高于乳腺纤维腺瘤(P＜0.05);乳腺肿瘤中nm23-H1和MTA1蛋白表达呈负相关(P＜0.05).结论 MTA1蛋白高表达及nm23-H1蛋白低表达与乳腺癌发生浸润转移有关,二者在乳腺癌发生浸润转移过程中可能起着正负调控作用.联合检测此指标的表达状况将有助于乳腺癌的早期诊断和预后判断.
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食管鳞癌组织中MTA1蛋白的表达
目的 探讨MTA1表达与食管鳞癌发生发展及浸润转移的关系.方法 应用免疫组化SP法检测49例食管癌组织及其相应的30例癌旁非典型增生组织和49例正常组织中MTA1蛋白及的表达.结果 ①伴有淋巴结转移组MTA1蛋白阳性表达率分别高于无淋巴结组,两组间相比差异有显著性(P＜0.05).②浸润至外膜MTA1蛋白的阳性表达率高于深肌层及浅肌层,差异有显著性(P＜0.05);浸润至深肌层组MTA1蛋白的阳性表达率稍高于浅肌层组,两者相比差异无显著性(P＞0.05).③癌组织MTA1蛋白阳性表达率均高于相应的癌旁非典型增生组织及正常食管黏膜组织,三者两两相比差异有显著性(P均＜0.05).结论 人食管鳞癌组织MTA1蛋白表达明显升高,MTA1与食管癌的发生发展及浸润转移有关.
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MTA1蛋白在卵巢癌中的表达及意义
目的 检测MTA1在卵巢癌中的蛋白表达,探讨其病理意义.方法 研究运用免疫组化SP法检测46例卵巢癌、19例交界性肿瘤及13例良性肿瘤组织中肿瘤转移相关基因MTA1蛋白的表达情况,分析其与卵巢癌发生发展及浸润转移的关系.结果 在卵巢癌、交界性肿瘤和良性肿瘤中MTA1蛋白阳性表达率依次降低,组间比较差异有统计学意义( P＜0.05);MTA1蛋白表达与卵巢癌FIGO分期及大网膜转移密切相关( P＜0.05),与分化及性别无关(P＞0.05).结论 MTA1的高表达与卵巢癌的发生发展及浸润转移密切相关.
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MTA1、Ki一67在非小细胞肺癌中的表达及相关性分析
目的 初步探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中转移相关蛋白1(MTA1)和增殖细胞核抗原(Ki-67)的表达并分析其相关性.方法 采用SP免疫组织化学方法检测201 1年1月～2017年1月内蒙古林业总医院经胸外科手术切除并经病理科存档,符合实验条件的46例NSCLC组织和20例癌旁正常对照组织中MTA1和Ki-67的表达,分析MTA1和Ki-67之间的相关性及其与NSCLC临床病理参数的关系.结果 NSCLC组织中MTA1和Ki-67的阳性率分别为65.22％和54.35％,均显著高于癌旁对照组织中的15％和20％(P＜0.05);NSCLC组织中MTA1和Ki-67的表达无相关性(r=0.064,P＞0.05);NSCLC发生淋巴结转移组MTA1表达的阳性率高于无淋巴结转移组(P＜0.05);Ki-67表达的阳性率在NSCLC低分化组高于高中分化组(P＜0.05).结论 MTA1和Ki-67可能在NSCLC转移及肿瘤细胞侵袭过程中具有重要作用.
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MTA1与肿瘤的侵袭转移
MTA1基因是近发现的一个肿瘤转移相关基因,与许多肿瘤的浸润和淋巴结转移程度有关.MTA1蛋白可能是通过参与信号转导及基因表达,调控一系列有关浸润、转移的蛋白而起重要作用.对MTA1基因结构与功能的深入研究,为肿瘤的治疗提供了一定的指导意义.
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肿瘤转移相关基因 mta1和肿瘤
肿瘤致死的主要原因是瘤细胞从原发灶转移到邻近和远隔器官,因此了解肿瘤转移所涉及的基因和基因产物是目前国内外一项重要的研究课题.
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肿瘤转移相关基因1在食管癌细胞上皮间质转化过程中的促进作用
目的 探讨肿瘤转移相关基因1(MTA1)对食管癌细胞上皮间质化(EMT)过程的影响及分子机制.方法 采用慢病毒感染方法建立MTA1敲降的食管癌细胞系LV3-shMTA1-KYSE410及MTA1过表达的食管癌细胞系LV5-MTA1-KYSE450;通过Western Blot方法检测上述食管癌细胞系中MTA1蛋白及EMT相关蛋白的表达水平;进而采用免疫荧光实验检测上述食管癌细胞系中EMT相关蛋白分子标志物E-cadherin和Vimentin的定位以及表达水平的变化;后应用划痕实验明确MTA1表达水平改变后对食管癌细胞迁移能力的影响.结果 食管癌KYSE450细胞系过表达MTA1后,EMT相关蛋白标志物中的E-cadherin表达水平降低而Vimentin表达水平升高,迁移能力增强,细胞迁移率为0.91±0.00,对照组为0.23±0.04;食管癌KYSE410细胞系敲降MTA1后,E-cadherin表达水平升高而Vimentin 表达水平降低,迁移能力降低,细胞迁移率为0.19±0.01,对照组为0.53±0.01,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 MTA1过表达可促进食管癌细胞的间质化、提高食管癌细胞的迁移能力.
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MTA1表达与子宫内膜癌相关性研究
目的:研究转移相关基因1(metastasis-associated-gene1,MTA1)表达水平与子宫内膜癌发生发展的关系.方法:采用免疫组织化学SP法检测449例子宫内膜组织中MTA1的蛋白表达水平,其中正常子宫内膜组织100例,不典型增生子宫内膜组织49例,子宫内膜癌组织300例,χ2检验分析比较3组MTA1表达水平差异,分析MTA1蛋白表达水平与子宫内膜癌分化程度、临床分期、肌层浸润深度的关系.结果:MTA1蛋白在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜及子宫内膜癌组织中的表达水平存在显著性差异,在癌组织中呈现显著的过表达,且与子宫内膜癌不同的组织学分级呈负相关,与不同的肌层浸润深度及临床分期呈正相关,且组间差异有统计学意义(P<0.05).结论:MTA1表达水平的增高与子宫内膜癌的发生、分化程度、临床分期及肌层浸润深度密切相关,可能在其发生发展过程中发挥着重要作用,通过进一步研究确定其能否成为预测子宫内膜癌发生及浸润转移的有效生物学标志,为子宫内膜癌的诊断及治疗提供依据.
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MTA1沉默抑制鼻咽癌转移能力的体外研究
目的：探究MTA1基因敲除后对鼻咽癌细胞株5-8F细胞转移能力的影响。方法设计并构建针对MTA1基因的RNAi片段，脂质体（LipofectamineTM2000）介导Si-MTA1-01（Si-MTA1-01组）和Si-MTA1-02（Si-MTA1-02组）感染5-8F细胞，同时设无义序列转染组（Si-ctr组）为对照。应用荧光定量PCR和蛋白印迹法检测转染后各组细胞的MTAl mRNA和蛋白表达；细胞划痕实验、基底膜侵袭实验和细胞黏附实验检测转染后5-8F细胞迁移和侵袭能力的变化，并进行比较分析。结果与Si-ctr组相比，Si-MTA1-01和Si-MTA1-02组MTA1 mRNA及蛋白表达水平下降，穿膜细胞数减少，细胞黏附率增加（均P<0.05），划痕实验显示细胞阻滞效果明显。结论沉默MTA1能明显减弱鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力，MTA1有望成为治疗鼻咽癌的有效靶点。
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Ezrin 与 MTA1在鼻咽癌组织中的表达研究
目的：探讨埃兹蛋白（Ezrin）与肿瘤转移相关基因1（MTA1）在鼻咽癌组织中的表达。方法选取我院耳鼻咽喉科鼻咽癌患者60例作为观察组，同期选取慢性鼻咽炎患者57例作为对照组，采用免疫组化法测定 Ezrin 和 MTA1的表达，并比较两组阳性表达率差异。结果观察组 Ezrin 和 MTA1的阳性表达率均高于对照组（ P ＜0．01）；Ezrin、MTA1的表达与鼻咽癌临床分期和淋巴结转移紧密相关，其中临床分期越高，有淋巴结转移者 Ezrin、MTA1阳性表达率越高，比较差异具有统计学意义（ P ＜0．01）。结论Ezrin 与 MTA1在鼻咽癌组织中的阳性表达显著增高，且与鼻咽癌病理特征显著相关。
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MTA1、CXCL12在非小细胞肺癌中的表达及相关性分析
目的:初步探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中转移相关蛋白1(MTA1)和趋化因子12(CXCL12)的表达并分析其相关性.方法:采用SP免疫组织化学方法检测46例NSCLC组织和20例癌旁正常对照组织中MTA1和CXCL12的表达,分析MTA1和CXCL12之间的相关性及其与NSCLC临床病理参数的关系.结果:NSCLC组织中MTA1和CXCL12的阳性率分别为65.22%和58.70%,均显著高于癌旁对照组织中的15.00%和10.00%(P<0.05);NSCLC组织中MTA1和CXCL12的表达存在正相关关系(r=0.314,P<0.05);NSCLC发生淋巴结转移组MTA1和CXCL12的阳性率分别为78.57%和71.43%,均高于无淋巴结转移组的44.44%和38.89%(P<0.05);MTA1和CXCL12的表达与NSCLC患者性别、年龄、病理类型、分化程度均无明显关系(P>0.05).结论:MTA1和CXCL12可能在NSCLC发生发展及肿瘤细胞侵袭过程中具有重要作用.
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肿瘤转移相关基因1与P-糖蛋白在化疗后骨肉瘤组织中的表达及意义
本文通过研究骨肉瘤化疗后肿瘤转移相关基因1(MTA1)和耐药表型P-糖蛋白(P-gp)在骨肉瘤中的表达,探讨骨肉瘤侵袭转移和耐药之间的关系,希望能够为骨肉瘤的术后治疗及评价预后提供一定的分子生物学依据.
