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NAD(P)H:醌氧化还原酶基因多态性与阿尔茨海默病遗传易感性的关系
目的探讨NAD（P）H：醌氧化还原酶（NQO1）基因C609T位点基因多态性与散发性阿尔茨海默病（SAD）遗传易感性的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测了120例SAD患者和122名健康老年人的NQO1基因多态性分布特征。结果 SAD组C等位基因频率低于对照组,SAD组为45.0%，对照组为57.0%（OR=0.63,P＜0.05）。SAD组C/C基因型频率明显低于对照组，SAD组为12.5%，对照组为29.5%（OR=0.34，P＜0.01）。结论 NQO1基因多态性与SAD发病明显关联，NQO1基因609序列C/C基因型、C等位基因与SAD发病呈明显负关联。NQO1基因609序列C等位基因对SAD发病可能有保护作用。
关键词： 阿尔茨海默病 遗传学 NADH NADPH氧化还原酶类 -
卵巢上皮性癌组织中GRIM-19蛋白的表达及其临床意义
目的 探讨细胞凋亡相关基因19(GRIM-19)蛋白在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织中的表达及其与卵巢癌患者临床病理指标和预后的关系.方法 收集2000年1月-2006年12月在浙江大学医学院附属妇产科医院手术切除的138份卵巢癌、101份卵巢良性上皮性肿瘤和46份正常卵巢组织标本,采用免疫组化法检测其GRIM-19蛋白的表达水平.并采用Mann-Whiteny U和Kruskal-Wallis H检验进行非参数分析,比较不同临床病理指标的卵巢癌组织中GRIM-19蛋白的表达水平；采用Kaplan-Meier和log-rank检验进行单因素生存分析,比较不同GRIM-19蛋白表达水平(分为阴性、弱阳性、中等阳性、强阳性组)的卵巢癌患者的预后；采用多因素Cox回归模型,分析影响卵巢癌患者预后的因素.结果 免疫组化法检测显示,卵巢癌、卵巢良性上皮性肿瘤、正常卵巢组织中GRIM-19蛋白的表达水平分别为(3.4±2.0)、(4.7±2.9)和(7.5±2.2)分,两两比较,差异均有统计学意义(P ＜0.01)；3 者间比较,差异也有统计学意义(P＜0.01).非参数分析显示,GRIM-19蛋白的表达水平与卵巢癌患者的腹水量明显相关(P =0.043),而与卵巢癌患者的年龄、血清CA125水平、病理分化程度、病理类型、手术病理分期、淋巴结转移、原发肿瘤大直径、术后残留灶直径无关(P＞0.05).GRIM-19蛋白表达阴性、弱阳性、中等阳性、强阳性组卵巢癌患者分别为38、77、21、2例,单因素生存分析显示,4组间总生存时间比较,差异有统计学意义(P =0.002)；4组间无瘤生存时间比较,差异也有统计学意义(P=0.008).多因素Cox回归模型分析显示,GRIM-19蛋白表达水平(P=0.001)、手术病理分期(P =0.001)、腹水量(P=0.023)和原发肿瘤大直径(P =0.044)是影响卵巢癌患者预后的独立因素.结论 GRIM-19蛋白在卵巢癌组织中的表达明显下降,提示GRIM-19可能是一种新的抑癌基因；GRIM-19蛋白的表达水平是影响卵巢癌患者预后的独立因素,提示其对卵巢癌患者的预后可能有预测价值.
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50Hz正弦磁场对肌质网钙释放通道Ryanodine受体的影响
目的 探讨正弦磁场对提取的骨骼肌肌质网(SR)囊泡钙释放通道(RyR1)的影响.方法 采用动态光谱法和同位素标记方法 ,分别检测了正弦磁场对SR囊泡Ca2+释放初速率、[3H]-Ryanodine平衡结合度、还原型辅酶(NADH)的氧化初速率和超氧(O·2-)产率的影响.结果 0.4 mT、50 Hz正弦磁场辐照SR囊泡30 min,由1 mmol/L NADH与1 mmol/L NAD调控的Ca2+释放初速率Con组为(10.82±0.89)pmol·mg-1 pro·s-1、MF组为(14.69±1.21)pmol·mg-1pro·s-1;上调了35%,[3H]-Ryan-odine平衡结合度上调15%,由(2.13±0.05)pmol/mg pro上升到(2.45±0.07)pmol/mg pro.另外,该磁场辐照SR囊泡30 min,导致NADH的氧化速率上调22%,由(0.88±0.11)×10-4FI/s上升到(1.07±0.13)×10-4FI/s;O·2-产率上调32%,由(0.99±0.09)×10-5FI/s上升到(1.31±0.06)×10-5FI/s. 结论 0.4 mT正弦磁场在低氧化还原电势环境下对RyR1有显著的激活,且该磁场促进了NADH氧化酶的活力和O·2-产率的增加.
关键词： 电磁场 兰尼碱受体钙释放通道 NADH NADPH氧化还原酶类 -
二烯丙基三硫通过miR-34a调控人白血病细胞中NADPH氧化酶的机制研究
目的:研究二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)对人白血病细胞HL-60细胞中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶活性的影响及可能的作用机制.方法:DATS(150 μmol/L)作用于HL-60细胞不同时间后,采用硝基四氮唑蓝(nitro blue-tetrazolium,NBT)还原实验检测NADPH氧化酶的活性;实时荧光定量PCR检测DATS对微RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)以及S rc、Gab1和Shp-2 mRNA表达的影响及miR-34a对Src、Gab1和Shp-2 mRNA表达的影响;蛋白质印迹法检测DATS及miR-34a对Src、Gab1和Shp-2蛋白磷酸化的影响;细胞计数实验检测DATS和miR-34a对HL-60细胞增殖的影响.结果:DATS作用于HL-60细胞后能明显提高细胞中NADPH氧化酶的活性,且呈时间依赖性,而S rc激酶抑制剂PP2可抑制这种作用;DATS能上调HL-60细胞中miR-34a的表达水平,呈时间依赖性;miR-34a过表达可抑制Src、Gab1和Shp-2 mRNA及磷酸化蛋白的表达;DATS能抑制磷酸化Src、Gab1和Shp-2蛋白的表达水平.DATS和miR-34a过表达能抑制HL-60细胞的增殖,而抑制miR-34a的表达则可提高白血病细胞的增殖能力.结论:DATS可能通过促进HL-60细胞miR-34a-Src-Gab1-Shp途径调控NADPH的氧化酶活性,从而起到抑制白血病细胞增殖的作用.
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宫颈鳞癌组织中NRDR选择性剪接新亚型的鉴定及意义
目的:探讨NRDR选择性剪接新亚型NRDRB1 mRNA和蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及其临床意义.方法:采用RT-PCR、免疫荧光、免疫沉淀、免疫印迹、MALDI-TOF质谱分析等技术,检测正常宫颈上皮及宫颈鳞癌组织中NRDRB1mRNA及蛋白表达.结果:NRDRB1亚型全长1 171 bp,其蛋白保留了SDR家族的N末端辅酶结合模序、C末端底物结合模序以及过氧化物酶体定位信号.因第3外显子的缺失,导致SDR家族典型的"LVSNAA"折叠的丢失,使NRDRB1蛋白空间构象发生改变,从而影响该蛋白的细胞内定位和功能,NRDRB1蛋白的亚细胞定位明显不同于NRDR,酶活性亦明显低于NRDR.NRDRB1 mRNA及蛋白在宫颈鳞癌组织中表达(15/27,55.6%),明显高于正常宫颈上皮组织(P＜0.05),正常宫颈上皮除NRDR外,未检测到NRDRB1 mRNA及其蛋白.结论:NRDR选择性剪接的异常,以及新的剪接亚型NRDRB1细胞内定位及蛋白酶活性的改变可能与宫颈鳞癌的发生发展密切相关.
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醌氧化还原酶1基因多态性与术后认知障碍遗传易感性的关系
目的 探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸:醌氧化还原酶1(NQO1)基因的多态性与术后认知障碍(POCD)的关系.方法 选择择期硬膜外麻醉下行髋关节置换手术患者90例,年龄在59～78岁,术前及术后第7天对患者进行神经心理学测试,根据测试结果分为POCD组与对照组,每组分别取45例行NQO1基因609位点测定.取患者肘静脉血行实时定量PCR,结合特定的Taqman探针基因分型技术,分析NQO1基因多态性(C609T)在对照组和POCD组的分布差异.结果 对照组中有5个样品所提基因组DNA由于质量问题不用于Real-time PCR及后续分析.C/C基因型在对照组中出现频率为30.0%,高于POCD组的11.1%,差异具有显著性(OR=0.292,95%CI 0.092～0.921,P＜0.05);而C/T+T/T基因型个体在POCD组中为88.8%,高于对照组的70%,出现POCD的危险性升高至3.42倍(OR=3.42,95%CI1.08～10.82,P＜0.05).C等位基因在对照组染色体出现频率为56.2%,高于POCD组的40.0%,差异具有显著性(OR=0.519,95%CI 0.282～0.955,P＜0.05);T等位基因在对照组染色体出现频率为43.7%,低于POCD组的60.0%,差异具有显著性(OR=1.93,95%CI 1.047～3.552,P＜0.05).结论 NQO1基因的C609T位点多态性与POCD的遗传易感性密切相关.
关键词： 术后认知障碍 NADPH氧化还原酶类 单核苷酸多态性 -
山茱萸对糖尿病心肌病大鼠的干预作用及机制
目的 探讨山茱萸对糖尿病心肌病大鼠的干预作用及机制.方法 采用腹腔注射链脲佐菌素方法构建糖尿病大鼠模型.将50只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(N组)、糖尿病组(D组)、山茱萸低剂量组(FC-L组,400 mg/kg)、山茱萸高剂量组(FC-H组,800 mg/kg)及氟伐他汀组(Flu组),每组10只.12周后测体质量并计算心体比(H/B)和左心室质量指数(LVMI).应用流式细胞仪检测心肌组织中活性氧(ROS)的表达,生化法检测大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性和心肌细胞中谷胱甘肽(GSH)含量,Western blot及real time PCR检测心肌组织中p-Akt蛋白及P22phox、p47phox、FN、ColⅢ和核因子-κB(NF-κB) mRNA表达.结果 与对照组相比,模型组H/B、LVMI、ROS及P22phox、p47phox、FN、ColⅢ、NF-κB和p-Akt表达均显著升高(F=295.274～543.871,P＜0.05),血清SOD、GSH-px和心肌细胞中的GSH含量均显著降低(F=325.274～415.287,P＜0.05).山茱萸及氟伐他汀干预后,Flu组、FC-L组和FC-H组大鼠的心肌H/B、LVMI、ROS、P22phox、p47phox、FN、ColⅢ、NF-κB和p-Akt表达均显著低于模型组(F=112.557～478.684,P＜0.05),血清SOD、GSH-px和心肌细胞中GSH含量显著升高(F=198.547～347.574,P＜0.05),且均呈剂量依赖性.结论 山茱萸干预可以减轻糖尿病大鼠心肌病变,可能与减少心肌组织氧化应激水平,下调NADPH氧化酶P22phox和p47Phox亚基与p-Akt表达有关.
关键词： 山茱萸 糖尿病心肌病 NADH NADPH氧化还原酶类 植物药疗法
