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受体血清“封闭”供肝与眼镜蛇毒因子抑制异种肝移植超急排斥反应的协同作用
目的 探讨受体血清(recipient serum,RS)“封闭”供肝与眼镜蛇毒因子(CVF)抑制肝移植超急性排斥反应(HAR)的协同作用.方法 采用改良“双套管法”制作豚鼠→SD大鼠原位肝移植HAR模型.取豚鼠和SD大鼠各24只,分别作为供体和受体.供受体随机配对.移植前采集受体大鼠近交系其他个体血清,灭活补体备用.实验随机分为4组(n=6),受体血清(RS)实验组移植前用0.1％ RS的林格氏液(Ringer)“封闭”供肝,CVF实验组受体大鼠在术前24h经尾静脉注射CVF 50 μg/kg,另设RS+CVF联合实验组和Ringer液对照组.采用改良“双套管法”行豚鼠→SD大鼠原位肝移植；观察供肝植入后形态学改变、受体存活时间、移植肝病理损害程度和受体肝功能.结果 各实验组大鼠异种供肝植入后均未见明显花斑样改变.各实验组大鼠移植后存活时间较对照组[(45.2±13.9)min]均明显延长(P＜0.05),其中RS+CVF组大鼠存活时间[(161.5±30.9) min]长于RS组[(88.1±19.7) min](P＜0.01)或CVF组[(125.2±25.5)min] (P＜0.05).各实验组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)均明显低于对照组[(126.1±23.3)U/L] (P＜0.05),RS+ CVF组ALT[(63.2±13.9)U/L]明显低于CVF组[(79.9±18.1)U/L](P＜0.05)或RS组[(106.1±19.3)U/L](P＜0.01).各实验组移植肝血栓、出血、水肿等病理损害(积分)均较对照组明显减轻(P＜0.05),其中RS+CVF组大鼠移植肝病理损害轻(P＜0.05).结论 受体血清“封闭”供肝与CVF对肝移植HAR均具有一定的抑制作用,两者具有协同作用.
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协同性异种肝移植急性排斥反应模型的探索
目的 探索协同性异种肝移植急性排斥反应模型的建立.方法 参照Kamada"二袖套法"并加以改良,分别对Wistar-Wistar大鼠(A组)15对及金黄地鼠-Wistar大鼠(B组)21对进行原位肝移植术,术后观察大鼠一般情况,并于第1、3、5、7天时各处死1只取肝脏组织进行病理观察,余留做观察生存时间.结果 A、B两组供体手术时间、修肝时间、无肝期分别为(23±3)min、(8±2)min、(45±5)min、(17±2.5)及(46±3)min、(21±2.5)min、(18±2)min,手术成功率分别为81.0%与93.3%.A、B两组生存期分别为27.4±3.4天及5.5±1天.A组术后Williams分级均为0级,B组术后第1天1级,第3天2级,超过第5天均为3级.结论 ①利用改良Kamada"二袖套法"可建立稳定的金黄地鼠-Wistar异种肝移植模型;②同时建立了协同性急性排斥反应肝移植模型,并为解决供肝来源不足方面提供了研究基础.
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常规及新肝移植手术的现状
背景:经典术式和背驮式肝移植是目前肝移植的常规术式.目的:对目前肝移植的常规术式及新术式的发展及特点进行总结.方法:检索1900-01/2011-01 Pubmed、CNKI及肝移植注册网中与肝移植术式相关的文献,筛选出的35篇肝移植临床研究、综述、报告等文献进行分析.结果与结论:初检得到1 251篇文献,根据纳入标准保存35篇文献进行分析.经典术式和背驮式肝移植是目前的常规术式.新的移植术式不断出现:劈离式肝移植"一肝两受",节约肝源;活体肝移植取自活体肝,使用灵活,发展较快;自体肝移植难度大,应用少;多米诺肝移植能够有效治疗FAP,但也因难度大开展不多;肝细胞移植和异种肝移植基础研究尚浅.常规术式技术较为成熟,因在利用供肝、开拓肝源方面的优势,新的移植术式应用前景广阔,但仍需手术技术和基础研究上的突破.
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猪作为供体的异种肝移植的研究与进展
背景:猪易于饲养,易繁殖,器官大小与人较匹配,并且可通过基因调控技术来增强供受体器官匹配性,因此猪是佳异种供体器官的大动物模型.目的:总结近年来猪作为供体的异种移植研究进展.方法:应用计算机检索PubMed数据库及万方数据库2001-01/2010-12有关以猪及非人类灵长类为供体进行异种移植的文献报道.结果与结论:使用猪作为供体的异种移植应用于临床可能会缓解供体器官短缺的问题,然而异种移植免疫学方面还存在某些障碍,可通过基因工程技术和开发新型免疫抑制剂来解决.至此所进行的研究还不能完全克服免疫排斥反应,并且除免疫因素外,还有异种病原的感染问题,如猪内源性反转录病毒.现在还不能确定是否具有潜在的感染性,随着进一步的研究,将会彻底克服免疫排斥和病毒感染等问题.
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猪肝门静脉生物力学特性的增龄性变化
本研究对猪肝门静脉的生物力学特性与月龄间的关系进行了探讨,为猪→人异种肝移植提供力学资料.取1～6月龄正常猪肝门静脉36例,利用软组织力学试验机测定其压力-直径关系数据,计算出血管各向同性增量弹性模量(Einc)、压力-应变弹性模量(Ep)、容积弹性模量(Ev)和顺应性(Compliance).
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异种肝移植研究进展
肝移植已成为不可逆肝病尤其是肝衰竭的主要治疗手段,但供体不足问题日益突出.仅以美国为例,1997年即有近1000名患者在等待供体中死亡.为此,不少学者致力于异种肝移植的研究,以期作为供体不足的补充.异种肝移植还具有两大优点:一是可避免同种肝移植常见的肝炎病毒如乙型肝炎病毒(HBV)及丙型肝炎病毒(HCV)再感染;二是异种肝较易进行基因转移等操作,从而可望成为肝靶向基因治疗的工具.然而,异种肝移植也存在如下限制:首先,作为异种肝,易引起免疫反应,导致异种肝组织/细胞的破坏;其次,异种肝在恢复/重建生理功能方面尚存在遣传学限制;后,存在传播动物病原的潜在危险.现将有关研究进展综述如下.
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细胞和体液免疫抑制对大鼠异种肝移植急性排斥中一氧化氮及其合酶、同功酶的影响
目的:探讨一氧化氮、一氧化氮合酶(NOS)及其同功酶在大鼠异种肝移植中的免疫学作用及其表达意义.方法:本实验共分5组:Ⅰ组(同基因组);Ⅱ组(急性排斥组);Ⅲ组(细胞免疫抑制组);Ⅳ组(体液免疫抑制组);Ⅴ组(双重免疫抑制组);应用血清学检测移植术后受体血清ALT、TNF-α及NO代谢终产物(NOx),应用NADPH黄递酶组化及免疫组化检测NO合酶及其同功酶(iNOS,cNOS)的表达 .结果:Ⅱ、Ⅳ组血清ALT,TNF-α及NOx均较Ⅰ、Ⅴ组明显升高4 ～11倍(P<0.01),环孢素A(Ⅲ组)能抑制细胞免疫及NO的合成与表达,但不能延长受体的生存期.Ⅱ、Ⅳ组NO合酶及其同功酶(iNOS,cNOS)在异种肝移植急性排斥时明显表达.结论:肝细胞NO在低免疫反应状态下可能具有肝细胞保护作用,而在高免疫反应状态下iNOS的持续高表达可能是肝损伤的原因.
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豚鼠至大鼠异种肝移植手术操作要点及体会
目的 建立稳定的豚鼠至大鼠的异种肝移植模型.方法 在传统"二袖套"法基础上进行改良,并分预实验和正式试验两组进行手术时间和手术成功率的比较.结果 实验通过改良型二袖套法进行肝移植手术80对,预实验手术25对,成功率68%,正式手术35对,成功率89%,显著高于预实验(P<0.05),而手术时间明显低于预实验(P<0.05).结论 改进的异种肝移植术操作简便,随着手术者经验的提高可明显提高手术成功率,可作为异种肝移植实验可靠的动物模型制作.
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非协调性异种肝移植后再灌注障碍及超微结构变化的观察
目的:探讨非协调性异种肝移植供肝再灌注障碍与超急性排斥反应的可能关系.方法:应用改良缝合法建立豚鼠至大鼠的肝移植动物模型,观察供肝再灌注60分钟内门脉灌注和肝脏组织超微结构的变化.结果:移植后60分钟供肝门脉灌注明显减少;肝细胞的线粒体明显肿胀,线粒体嵴破坏、结构紊乱,内质网扩张、脱粒,肝细胞狄氏间隙消失,肝血窦内可见到血小板和粒细胞粘附、聚集和血栓形成,部分内皮细胞消失.受体心肌细胞肿胀,肌原纤维排列紊乱、疏松化和断裂,线粒体呈多形性,大小不等.结论:豚鼠至大鼠非协调性异种肝移植60分钟时有超急性排斥反应的发生, 从而导致供肝的灌注障碍,同时心肌的受损可以进一步加重供肝的微循环障碍.
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肝细胞生长因子治疗异种肝移植大鼠慢性肝功能障碍研究
目的 研究肝细胞生长因子(HGF)防止异种肝移植大鼠肝功能障碍及作用机理. 方法 以DA大鼠(RT1a)为供体,Lewis大鼠(RT11)为受体建立异种肝移植鼠模型,HGF组和对照组大鼠移植后他克莫司(每天 0.1 mg/kg)肌内注射5天;HGF组大鼠在移植10天起静脉注射HGF(1mg/kg,每周2次),持续至90天.对照组大鼠不予HGF处理.空白对照组不予任何处理.常规法检测血清TB含量、ALT活性,ELISA法检测TNF-α含量. 结果 HGF组ALT、TB均较对照组低,且存活率明显高于对照组,肝脏病理活检显示肝脏无明显坏死,且HGF组TNF-α水平较对照组显著减低. 结论 HGF对肝功能有保护作用,可能通过抑制TNF-α活性而发挥对肝脏的保护作用.
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一氧化氮及其合酶、同工酶在大鼠异种肝移植急性排斥中的免疫监测作用
一氧化氮(Nitric oxide，NO)在移植领域中的功能也越来越受到人们的普遍重视，本研究从多方面证实NO及其NO合酶在肝移植急慢性排斥反应中的免疫监测作用。一、材料与方法1. 材料：雄性健康Wistar大鼠，雌性健康金黄地鼠，体重150g～200g，购于上海市计划生育研究所。环胞素A，还原型β-辅酶Ⅱ四钠盐，硝基四唑氮蓝，Sigma公司产品；iNOS(NOSⅡ)兔抗大鼠多克隆抗体，cNOS(NOSⅢ)兔抗大鼠多克隆抗体，LSAB免疫组化试剂盒(Dako公司产品)。
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五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植的术前检测
目的 本研究为了减少五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植手术的超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)和急性排斥反应(acute rejection,AR)发生率,进行全面术前检测.方法 分别利用PCR技术和植物凝集素细胞染色对供体GGTA1基因敲除类型进行鉴定;30只藏酋猴分别与五指山小型猪进行淋巴细胞毒实验;供受体ABO血型鉴定.结果 供体为GGTA1基因敲除猪,GTKO猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)植物凝集素细胞染色未检测出荧光,表明GGTA1基因敲除成功,与基因型鉴定结果一致.通过淋巴细胞毒实验选定28#与供体PBMC毒性小的藏酋猴做为备选受体.血型鉴定显示供受体血型一致.结论 通过对GTKO五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植的术前检测选定合适的受体,可有效减少异种移植HAR和AR的发生率.
